鄭秀娥 李晉 夏文龍 于素芳

1 山東省食品藥品監(jiān)督管理局審評認證中心 （山東 濟南 250014）

2 山東省疾病預防控制中心 （山東 濟南 250014）

3 山東大學公共衛(wèi)生學院 （山東 濟南 250012）

內(nèi)容提要： 目的：通過對兩種降鈣素原（PCT）檢測系統(tǒng)進行方法學比對和預期偏差評估，探討不同檢測系統(tǒng)間PCT檢測結(jié)果是否具有可比性和檢測結(jié)果的偏差是否在允許范圍內(nèi)。方法：參照美國臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）EP9-A2文件要求，Roche-e601全自動電化學發(fā)光免疫分析檢測系統(tǒng)作為參考方法，Mlabs-m-101型定量免疫熒光檢測系統(tǒng)作為比對方法，對患者血清PCT進行檢測，計算相關系數(shù)和直線回歸方程，評估兩種檢測系統(tǒng)之間的預期偏差。結(jié)果：兩種檢測系統(tǒng)所得的結(jié)果相關性良好（r=0.998，P＜0.05），醫(yī)學決定水平處的系統(tǒng)誤差（SE%）為10.8%，在可接受范圍內(nèi)。結(jié)論：兩種檢測系統(tǒng)PCT結(jié)果具有可比性，能夠滿足臨床檢測要求。

降鈣素原（Procalcitonin，PCT）是嚴重細菌感染/膿毒癥鑒別診斷的觀察指標之一，可輔助臨床快速鑒別細菌感染和病毒感染，判斷細菌感染嚴重程度，是一種新的炎癥介質(zhì)。它是一種無激素活性的降鈣素（CT）前肽物質(zhì)，通常由甲狀腺的髓質(zhì)細胞分泌，其不會降解為降鈣素，亦不受體內(nèi)激素水平的影響，半衰期為25～30h。在細菌內(nèi)毒素等細胞因子誘導下，隨著感染嚴重程度逐漸增加，PCT水平也明顯升高，經(jīng)抗生素治療后，PCT水平迅速下降，并與患者的預后相關[1]。近年來，快速檢測PCT的儀器得到普遍應用，具有操作簡單、不依賴大型設備，快速、即時的特點。但這類快速檢測儀器的檢測結(jié)果與檢驗科大型儀器能否保持一致性，需要進一步驗證。本文對Roche-e601全自動電化學發(fā)光免疫分析檢測系統(tǒng)和Mlabs-m-101型定量免疫熒光快速檢測系統(tǒng)檢測人血清PCT的結(jié)果進行比較，并進行方法學比對以及偏差評估，探討兩個檢測系統(tǒng)是否具有一致性，為臨床使用快速檢測方法檢測PCT提供科學的評估依據(jù)。

1.資料與方法

1.1 儀器與試劑

參比系統(tǒng)用儀器：Roche-e601全自動電化學發(fā)光免疫分析儀及配套試劑、質(zhì)控品和校準品；比對系統(tǒng)用儀器：Mlabs-m-101型定量免疫熒光快速檢測系統(tǒng)（上海勵奧醫(yī)藥咨詢有限公司提供）及配套試劑、質(zhì)控品和校準品。

樣本：在Roche-e601全自動電化學發(fā)光免疫分析儀進行臨床標本檢測并得知結(jié)果后，分別選取結(jié)果分布于不同范圍的無溶血、無黃疸的新鮮患者血清，樣本個數(shù)為40個，各濃度梯度分配比例見表1。

表1.各濃度梯度分配比例

1.2 方法

參照美國臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）《用患者樣本進行方法比對及偏差評估—批準指南》（EP9-A2）[2]的要求，以Roche-e601全自動電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)為參考方法（用Y表示），以Mlabs-m-101型定量免疫熒光快速檢測系統(tǒng)為比對方法（用X 表示），按照EP9-A2文件要求測定PCT含量。進行方法學比對以及偏差評估，探討兩個檢測系統(tǒng)是否具有一致性。

1.3 數(shù)據(jù)處理

1.3.1 離群值的檢查

①計算每樣本雙份測定差值的絕對值Dxi和Dyi、差值絕對值的均值Dx’和Dy’、相對差值絕對值Dx，和Dy，和相對差值絕對值的均值（’，和’，），超出上述平均數(shù)4倍時為離群值，應剔除。②用兩種方法測定分別得出一一對應的2個數(shù)值，第1個X與第1個Y的差值記為（Ei1），第2個X與第2個Y的差值記為（Ei2），計算出所有樣本總的平均差值（E），以4倍的平均差值作為兩儀器間誤差的“可接受限”。

1.3.2 數(shù)據(jù)作圖

①以參考方法為Y軸，以比對方法為X軸，以Yi對Xi作圖，繪制散點圖，目測是否具有線性關系，并計算斜率和截距得出回歸方程Y=bX+a；②以Yij對作圖，檢查兩種方法各重復測定結(jié)果間的線性關系；③以–對作圖，檢查兩種方法重復測定均值間的差異，反映兩種方法間的系統(tǒng)誤差；④以Yij–Xij對作圖，檢查兩種方法重復測定均值間的差值。

1.3.3 兩方法相關性檢驗

計算相關系數(shù)r，如果r≥0.95，且對r值進行假設檢驗，P＜0.05則可認為兩方法具有良好的相關性。

1.3.4 計算方法間系統(tǒng)誤差

根據(jù)回歸方程，計算得出臨床給定PCT的醫(yī)學決定水平濃度Xc=0.5ng/mL處的預期偏倚，計算參考方法Y與對比方法X 之間的系統(tǒng)誤差（SE%）。SE=|Yc-Xc|，SE%=SE/Xc×100%。

1.3.5 判斷標準

系統(tǒng)誤差SE%＜試劑說明書規(guī)定的允許誤差T±20%，則臨床可接受。

2.結(jié)果

2.1 離群值檢查結(jié)果

Dx’=0.066，控制限為4Dx’，即0.264；Dy’=0.019，控制限為4Dy’，即0.076；，=0.056，控制限為4Dx，即0.226；’=0.05，控制限為4Dy’，即0.2，經(jīng)比較，無超過控制限的值，故兩種方法測定數(shù)值均無離群值。

方法間離群點的檢查：計算得E為0.185，控制限為4E，即0.74，相對差值E'為0.229，控制限為4E'，即0.916，無超過此范圍的值。

2.2 相關性分析和偏倚評估結(jié)果

檢測結(jié)果的相關系數(shù)r為0.998，回歸方程為Y=1.022X–0.065，從統(tǒng)計圖可以看出，Yi始終高于Xi，兩方法間結(jié)果存在差異，且樣本濃度越高，差異越大，但兩系統(tǒng)相關性較好。（見圖1～4）。

圖1.重復測定均值的散點圖

2.3 兩方法相關性檢驗

兩種方法的相關系數(shù)r為0.998，P＜0.05，兩系統(tǒng)高度相關。也說明測定范圍足夠?qū)挘`差的影響可以忽略不計，回歸統(tǒng)計的斜率b和截距是可靠的。

圖2.各次結(jié)果的散點圖

圖3.重復測定的均值偏差圖

圖4.各次結(jié)果的偏差值

2.4 計算預期偏倚

前述得到的線性回歸方程為Y=1.022X-0.065，將PCT的醫(yī)學決定水平處的濃度值代入回歸方程，計算得SE%=10.8%，＜20%，故判定為臨床可接受。

3.討論

本實驗參照CLSI EP9-A2的流程對兩種檢測系統(tǒng)進行了比對，無離群值剔除，且比對結(jié)果相關性較好，r=0.998，P＜0.05，SE%＜T±20%，說明兩種方法比對結(jié)果臨床可接受，兩個不同系統(tǒng)的檢測結(jié)果具有一致性。

目前，對不同實驗室、不同檢測系統(tǒng)檢測相同項目進行比對實驗非常具有必要性，而比對實驗的結(jié)果是各實驗室、各檢測系統(tǒng)間采取整改措施的前提[3]。本實驗中兩檢測系統(tǒng)分別對血清樣本進行PCT檢測，相關系數(shù)＞0.95，P＜0.05，說明兩檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果具有較好的相關性。本文以靶值±20%作為檢測系統(tǒng)可接受性能的評價標準，實驗結(jié)果顯示，Roche-e601全自動電化學發(fā)光免疫分析檢測系統(tǒng)和mlabs-m-101型定量免疫熒光快速檢測系統(tǒng)間，在醫(yī)學決定水平處的SE%＜20%，能夠達到臨床性能的要求。另外，快速檢測方法由于其不依賴大型設備，快速、即時，臨床重癥監(jiān)護室、急診科、呼吸科、新生兒室等科室經(jīng)過一定培訓之后也可以進行即時檢測，這對臨床快速診斷有著重要意義。但是方法X （Mlabs-m-101熒光免疫分析儀）測定值普遍略低于方法Y（Roche-e601電化學發(fā)光免疫分析儀）測定值，這就需要在臨床上判定結(jié)果時應參考兩系統(tǒng)對應各自試劑的說明書，建立各自的參考值范圍，然后做出初步診斷。兩種方法間的差異還可能與實驗室質(zhì)量控制情況有關。加強儀器的維護保養(yǎng)、規(guī)范實驗人員操作、定期進行試劑（包含校準品和質(zhì)控品）評價等方法有助于減少除方法學差異之外的誤差。

近些年，隨著人們對抗生素過分的依賴，導致濫用抗生素的現(xiàn)象日益嚴峻，造成新的多重耐藥菌株的產(chǎn)生，這種現(xiàn)象在我國超出國際水平，成為國家風險[4]。如何準確及時診斷感染，抑制抗生素的濫用，減少新的耐藥菌株的產(chǎn)生，成為當今世界的熱點。血培養(yǎng)作為細菌培養(yǎng)的常用方法，是診斷敗血癥的金標準，但是血培養(yǎng)的陽性率取決于采血時機、細菌數(shù)量的多少等因素；而且檢測時間需要3～5d[5]。與血培養(yǎng)相比，PCT檢測采用血清進行定量檢測，具有快速、簡便等優(yōu)點，可以對細菌、真菌、病毒的早期感染做出及時的輔助診斷、預測，可以在血培養(yǎng)結(jié)果之前，為臨床早期治療敗血癥提供依據(jù)。各類研究表明，PCT是細菌感染和膿毒癥的良好標記物，PCT濃度的增長反映了從細菌感染前的健康狀態(tài)到細菌感染的最嚴重狀態(tài)（膿毒血癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克）的持續(xù)發(fā)展，呈正相關性。PCT已成為與細菌性感染炎性反應相關的特異性指標，特別成為快速鑒別細菌感染所致的SIRS及膿毒癥的重要指標；對于鑒別感染與非感染所致的炎性反應具有重要意義；為指導臨床抗菌藥物的合理使用，療效評估及縮短抗菌藥物的使用時間帶來重要革新[6]。血清PCT具有很高的陰性預測價值，可以減少不必要的抗菌藥物使用及抗菌藥物耐藥性[7]。

本研究結(jié)果表明，比對方法Mlabs-m-101型定量免疫熒光快速檢測系統(tǒng)能夠準確測定血清PCT的含量，同時具有方便、快速的特點，適合POCT開展使用，能夠滿足臨床檢測要求且便于在急診、社區(qū)、和基層醫(yī)療機構(gòu)開展，幫助臨床科室進行快速診斷與鑒別診斷。