崔中鋒，李 格，王麗花，李 寧

（河南省傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州 450000）

原發(fā)性肝癌為我國(guó)高發(fā)惡性腫瘤，其病因和具體分子機(jī)制尚不明確，一般認(rèn)為肝癌是由多種因素共同作用的結(jié)果。隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，眾多學(xué)者認(rèn)為腫瘤因子等在肝癌的發(fā)病中具有重要作用[1]。羧基末端結(jié)合蛋白（CtBP）可抑制多種腫瘤抑制基因轉(zhuǎn)錄，介導(dǎo)腫瘤發(fā)生，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[2]。E-鈣黏蛋白為鈣依賴性跨膜蛋白，對(duì)細(xì)胞組織重構(gòu)具有重要作用，其表達(dá)缺失會(huì)提高腫瘤細(xì)胞的侵襲能力[3]。目前，關(guān)于CtBP1、E-鈣黏蛋白在肝癌組織中的表達(dá)及相互關(guān)系的報(bào)道較少。為此，本研究采用免疫組化法檢測(cè)了肝癌組織CtBP1、E-鈣黏蛋白表達(dá)的變化，以期為探究肝癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年1月至2018年1月我院收治的200例經(jīng)手術(shù)病理檢查確診的肝癌患者，男119例，女81例，年齡36～85歲，平均年齡（62.39±9.87）歲；腫瘤直徑：＞5cm 46例，≤5cm 154例；TNM分期：I期84例，II期116例；腫瘤分化程度：低+中分化142例，高分化58例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移67例，未轉(zhuǎn)移133例。所有患者均進(jìn)行肝癌切除手術(shù)，并于手術(shù)中取肝癌組織和癌旁組織（距離病灶邊緣2～5cm）標(biāo)本。

1.2 方法

1.2.1 抗體與儀器：鼠抗人CtBP1多克隆抗體、鼠抗人E-鈣黏蛋白多克隆抗體均由美國(guó)Santa Cruz公司提供，免疫組織化學(xué)試劑盒由北京中杉金橋公司提供。石蠟切片機(jī)由德國(guó)LEICA公司提供，組織包埋機(jī)由常州中威儀器公司提供，組織脫水機(jī)由日本櫻花公司提供，恒溫培養(yǎng)箱由常州澳華儀器有效公司提供。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色及定量分析：所取肝癌和癌旁組織均使用甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，片厚4 μm。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)CtBP1和E-鈣黏蛋白的表達(dá)情況，一抗工作濃度為1：100，DAB顯色，邁耶蘇木素復(fù)染。陰性對(duì)照用PBS代替一抗。

高倍鏡下（×400）隨機(jī)選取10個(gè)視野，各視野細(xì)胞數(shù)超過(guò)200個(gè)，由3名病理醫(yī)師對(duì)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)定。CtBP1和E-鈣黏蛋白陽(yáng)性表達(dá)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)[4]：CtBP1主要在細(xì)胞核中表達(dá)，＞75%的細(xì)胞染成棕黃色為陽(yáng)性；E-鈣黏蛋白主要在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，＞25%的細(xì)胞膜完整著色為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，采用卡方檢驗(yàn)；以Spearman相關(guān)分析分析肝癌組織CtBP1、E-鈣黏蛋白表達(dá)的相關(guān)性。上述統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CtBP1、E-鈣黏蛋白的表達(dá)情況 肝癌組織CtBP1的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P＜0.05），E-鈣黏蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于癌旁組織（P＜0.05）。見(jiàn)表1：

表1 肝癌和癌旁組織CtBP1、E-鈣黏蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n（%）]

2.2 CtBP1、E-鈣黏蛋白表達(dá)與肝癌臨床病理特征關(guān)系CtBP1、E-鈣黏蛋白表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)（P＞0.05）。CtBP1、E-鈣黏蛋白表達(dá)與TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）：TNM分期II期、低+中分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CtBP1蛋白的表達(dá)明顯升高，E-鈣黏蛋白的表達(dá)明顯降低。見(jiàn)表2：

表2 CtBP1、E-鈣黏蛋白表達(dá)與肝癌臨床病理特征關(guān)系

2.3 肝癌組織CtBP1、E-鈣黏蛋白表達(dá)的相關(guān)性 肝癌組織CtBP1表達(dá)與E-鈣黏蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。見(jiàn)表3：

表3 肝癌組織中CtBP1、E-鈣黏蛋白表達(dá)相關(guān)性分析

3 討論

肝癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為乙肝病毒和丙肝病毒感染、黃曲霉素、酒精、亞硝胺類物質(zhì)、肝硬化等均可導(dǎo)致肝癌發(fā)生[5]。近年來(lái)，眾多學(xué)者從分子層面對(duì)肝癌進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)多種蛋白直接或間接參與了肝癌的發(fā)生和發(fā)展。

CtBP1是一種廣泛存在于細(xì)胞核中的蛋白質(zhì)，能夠下調(diào)多種腫瘤抑制基因的表達(dá)，并能通過(guò)干擾上皮細(xì)胞黏液分子的表達(dá)影響多種細(xì)胞的生物學(xué)行為，如促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）和腫瘤血管生成，因此，CtBP1對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有促進(jìn)作用[6]。并且有研究顯示[7]，干擾CtBP1表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡。本研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織CtBP1的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，并且肝癌組織CtBP1表達(dá)與TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，進(jìn)一步提示了CtBP1與肝癌的發(fā)生、分化及轉(zhuǎn)移有關(guān)。

E-鈣黏蛋白為鈣依賴性黏附蛋白家族中的重要成員，可在Ca2+的參與下介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附，其表達(dá)下降或缺失是發(fā)生EMT的顯著特征，可降低細(xì)胞間的粘附力，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[8]。已有研究證實(shí)[9-10]，E-鈣黏蛋白表達(dá)降低與胃癌、乳腺癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織E-鈣黏蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，并且肝癌組織E-鈣黏蛋白的表達(dá)亦與TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說(shuō)明E-鈣黏蛋白表達(dá)下調(diào)或缺失對(duì)肝癌細(xì)胞浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。

有研究發(fā)現(xiàn)，E-鈣黏蛋白是CtBP1抑制作用的靶基因之一，CtBP1陽(yáng)性表達(dá)升高可使E-鈣黏蛋白的陽(yáng)性表達(dá)受限[12]。本研究亦證實(shí)，肝癌組織CtBP1表達(dá)與E-鈣黏蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，肝癌組織CtBP1、E-鈣黏蛋白的表達(dá)均發(fā)生了明顯異常變化，并且肝癌組織二者的表達(dá)均與肝癌TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)有關(guān)，且CtBP1和E-鈣黏蛋白之間可能存在調(diào)控關(guān)系，聯(lián)合檢測(cè)CtBP1、E-鈣黏蛋白有望成為評(píng)估肝癌惡性生物學(xué)行為的指標(biāo)。