代洪波，林 艷，周遠(yuǎn)成，陰文奇

（1.畜禽生物制品四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610200；2.四川省動(dòng)物生物制品工程技術(shù)研究中心，四川 成都 610200）

豬瘟是一種高度接觸性傳染病，不同品種、不同年齡段的豬均易感，并且死亡率極高，每年給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，豬瘟活疫苗免疫是防治該病的唯一有效途徑。我國(guó)已經(jīng)實(shí)施了幾十年的豬瘟疫苗強(qiáng)制免疫，然而豬瘟的防控壓力依然巨大，豬瘟疫苗免疫效果不佳甚至免疫失敗的情況時(shí)有發(fā)生。豬瘟疫苗的免疫效果不僅受疫苗質(zhì)量的影響，同時(shí)還受到母源抗體、動(dòng)物體況、免疫抑制性疾病等一系列因素的影響[1]。如何提高仔豬豬瘟疫苗首次免疫后的抗體水平、縮短仔豬抗體保護(hù)空窗期，已經(jīng)成為困擾我國(guó)規(guī)?；B(yǎng)豬的一大難題[2-3]。本試驗(yàn)分別開(kāi)展不同劑量豬瘟疫苗免疫試驗(yàn)與不同母源抗體水平免疫試驗(yàn)，評(píng)價(jià)抗原量與母源抗體水平對(duì)豬瘟疫苗免疫效果的影響。同時(shí)結(jié)合規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)的實(shí)際案例，探討如何縮短仔豬抗體保護(hù)空窗期等問(wèn)題。

1 不同劑量免疫試驗(yàn)

1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)與試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)于2017年12月至2018年1月在四川某公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房進(jìn)行。篩選4~5周齡豬瘟ELISA抗體陰性試驗(yàn)仔豬20頭。

1.2 試劑與疫苗

豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自IDEXX公司。豬瘟細(xì)胞源活疫苗（15 000 RID/頭份），由四川華神獸用生物制品有限公司提供。

1.3 分組與接種

選用20頭豬瘟抗體陰性仔豬，隨機(jī)分為4組，每組5頭。A組：每頭仔豬肌肉注射30 000 RID的豬瘟細(xì)胞苗；B組：每頭仔豬肌肉注射15 000 RID的豬瘟細(xì)胞苗；C組：每頭仔豬肌肉注射7 500 RID的豬瘟細(xì)胞苗；D組：不接種，作為對(duì)照組。

1.4 采血與抗體檢測(cè)

所有試驗(yàn)豬，分別在免疫后 14 d、21 d、28 d、35 d采血分離血清，用豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1.5 結(jié)果與討論

不同劑量免疫試驗(yàn)豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。對(duì)照組（D組）試驗(yàn)過(guò)程中豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果均為陰性。

C組（7 500 RID/頭）免疫后28 d豬瘟ELISA抗體全部轉(zhuǎn)陽(yáng)，阻斷率均值69.4%；免疫后35 d阻斷率均值上升至78.8%。B組（15 000 RID/頭）免疫后28 d豬瘟ELISA抗體全部轉(zhuǎn)陽(yáng)，阻斷率均值71%，比C組高1.6個(gè)百分點(diǎn)；免疫后35 d阻斷率均值82.8%，比C組高4個(gè)百分點(diǎn)。A組（30 000 RID/頭）免疫后21 d豬瘟ELISA抗體全部轉(zhuǎn)陽(yáng)，比B組與C組提前7 d；免疫后28 d阻斷率均值77.6%，比B組高6.6個(gè)百分點(diǎn)；免疫后35 d阻斷率均值84.6%，比B組高1.8個(gè)百分點(diǎn)。

分別以每頭7 500 RID、15 000 RID、30 000 RID劑量進(jìn)行豬瘟細(xì)胞苗免疫豬瘟抗體陰性仔豬，免疫后28 d即可產(chǎn)生高水平的ELISA抗體；提高豬瘟抗體陰性豬的免疫劑量，豬群ELISA抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)的時(shí)間提前；隨著豬瘟疫苗免疫劑量的提高，豬瘟ELISA抗體阻斷率均值有所上升。

表1 不同劑量免疫試驗(yàn)豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

2 不同母源抗體免疫試驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)與試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)于2018年4—6月在四川某公司動(dòng)物實(shí)驗(yàn)房進(jìn)行。篩選3~4周齡豬瘟母源抗體阻斷率60%~80%試驗(yàn)豬10頭，豬瘟母源抗體阻斷率值40%~50%試驗(yàn)豬5頭，豬瘟抗體陰性試驗(yàn)豬10頭。

2.2 試劑與疫苗

豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自IDEXX公司。豬瘟細(xì)胞源活疫苗（15 000 RID/頭份），由四川華神獸用生物制品有限公司提供。

2.3 分組與接種

將10頭豬瘟母源抗體阻斷率60%~80%試驗(yàn)豬隨機(jī)分為2組，每組5頭，記為第1組與第2組；將豬瘟母源抗體阻斷率值40%~50%的5頭試驗(yàn)豬記為第3組；將10頭豬瘟抗體陰性試驗(yàn)豬隨機(jī)分為2組，每組5頭，記為第4組與第5組。第1組每頭肌肉注射30 000 RID豬瘟細(xì)胞苗；第2組至第4組每頭肌肉注射15 000 RID豬瘟細(xì)胞苗；第5組：不接種為對(duì)照組。一免后28 d，第1組至第4組分別以相同劑量進(jìn)行二免。

2.4 采血與抗體檢測(cè)

所有試驗(yàn)豬，分別在一免后14 d、一免后28 d（二免前）、二免后14 d、二免后28 d采血分離血清，以豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)。

2.5 結(jié)果與討論

不同母源抗體免疫試驗(yàn)豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)照組（第5組）試驗(yàn)過(guò)程中豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果均為陰性。

第 1組（30 000 RID/頭）與第 2組（15 000 RID/頭）免疫前豬瘟母源抗體阻斷率均值70%以上，一免后14 d抗體阻斷率均值分別為64.4%與61%；一免后28 d阻斷率均值分別為44.6%與38.4%；二免后14 d阻斷率均值分別為67.2%與58.2%；二免后28 d阻斷率均值為77.8%與68.6%，相差9.2個(gè)百分點(diǎn)。

第3組（15 000 RID/頭）免疫前豬瘟母源抗體阻斷率均值43.8%，一免后14 d抗體阻斷率均值降低至41.6%；一免后28 d阻斷率均值為51.6%，陽(yáng)性率100%；二免后14 d阻斷率均值上升至64.4%；二免后28 d阻斷率均值79.6%，比第2組高11個(gè)百分點(diǎn)。

第4組無(wú)豬瘟母源抗體，二免后28 d豬瘟ELISA抗體阻斷率均值為85.8%，比第1組高8個(gè)百分點(diǎn)，比第2組高17.2個(gè)百分點(diǎn)，比第3組高6.2個(gè)百分點(diǎn)。

高水平母源抗體組（阻斷率值60%以上）一免后14 d仍維持較高水平的母源抗體，二免后的豬瘟抗體水平受到較大影響，與無(wú)母源抗體組存在較大差異。低水平母源抗體（阻斷率值40%~50%）對(duì)一免后豬瘟疫苗抗體水平有一定影響，對(duì)二免后豬瘟疫苗抗體水平影響較小。在較高母源抗體的情況下，提高豬瘟疫苗的免疫劑量，可以在一定程度上改善豬瘟疫苗的免疫效果。

表2 不同母源抗體水平接種豬瘟疫苗ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

3 免疫程序調(diào)整試驗(yàn)

3.1 試驗(yàn)豬場(chǎng)

四川某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)，經(jīng)產(chǎn)母豬3 000頭左右。

3.2 試驗(yàn)前豬瘟疫苗免疫程序

后備豬：配種前間隔1個(gè)月進(jìn)行2次豬瘟疫苗免疫；經(jīng)產(chǎn)母豬：仔豬21日齡斷奶時(shí)跟胎免疫豬瘟疫苗；仔豬：28日齡豬瘟疫苗一免，60日齡豬瘟疫苗二免。母豬與仔豬的接種劑量均為1頭份/頭。

3.3 試驗(yàn)前豬瘟抗體檢測(cè)

2018年3月對(duì)不同階段豬群采樣進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示初產(chǎn)母豬陽(yáng)性率100%，阻斷率均值73.9%；經(jīng)產(chǎn)母豬陽(yáng)性率80%，阻斷率均值54.0%。2周齡仔豬陽(yáng)性率60%，阻斷率均值44.7%；4周齡陽(yáng)性率30%，阻斷率均值35.3%；6周齡豬瘟抗體全為陰性；8周齡陽(yáng)性率上升至70%，阻斷率均值上升至41.2%。試驗(yàn)前豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 試驗(yàn)前豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

結(jié)合免疫程序分析，初產(chǎn)母豬配種前完成2次豬瘟疫苗接種，豬瘟抗體水平較高；經(jīng)產(chǎn)母豬每頭接種1頭份，仔豬斷奶時(shí)豬瘟抗體水平不高，母源抗體持續(xù)時(shí)間有限；仔豬4周齡進(jìn)行豬瘟一免，6周齡時(shí)疫苗免疫抗體水平較低，而母源抗體消減，導(dǎo)致6周齡仔豬抗體檢測(cè)全部陰性；8周齡時(shí)豬瘟疫苗免疫抗體上升，陽(yáng)性率與阻斷率均值有所提高。

3.4 豬瘟免疫程序調(diào)整

為提高6周齡左右豬群的豬瘟抗體水平，分別開(kāi)展母豬免疫劑量調(diào)整試驗(yàn)與仔豬免疫時(shí)間調(diào)整試驗(yàn)。1）母豬試驗(yàn)：免疫時(shí)間不變，將經(jīng)產(chǎn)母豬的免疫劑量調(diào)整為2頭份/頭，提高仔豬的母源抗體水平；2）仔豬試驗(yàn)：免疫劑量不變，將仔豬的豬瘟疫苗免疫時(shí)間提前至21日齡，提高6周齡仔豬的豬瘟抗體水平。

3.5 采血與抗體檢測(cè)

母豬試驗(yàn)：母豬產(chǎn)仔后，分別抽樣采集2周齡、4周齡、6周齡、8周齡仔豬血液樣本，母豬產(chǎn)后2周抽樣采血。仔豬試驗(yàn)：分別采集3周齡（免疫前）、5周齡（免疫后14 d）、6周齡（免疫后21 d）、7周齡（免疫后28 d）仔豬血液樣本。以IDEXX公司豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

3.6 免疫程序調(diào)整后豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

3.6.1 母豬試驗(yàn)結(jié)果 共選用50頭母豬，將母豬免疫劑量調(diào)整為2頭份/頭，產(chǎn)仔后2周抽樣檢測(cè)，豬瘟ELISA抗體全部陽(yáng)性，阻斷率均值77.9%。仔豬2周齡豬瘟母源抗體陽(yáng)性率100%，阻斷率均值62.8%；4周齡母源抗體陽(yáng)性率60%，阻斷率均值51.4%。仔豬4周齡每頭免疫1頭份豬瘟細(xì)胞苗，6周齡豬瘟抗體陽(yáng)性率60%，阻斷率均值44.3%；8周齡陽(yáng)性率上升至80%，阻斷率均值50.8%。母豬試驗(yàn)豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

將母豬的免疫劑量調(diào)整為2頭份/頭，與調(diào)整前相比，2周齡與4周齡仔豬的母源抗體水平有所提高。6周齡（免疫后14 d）豬瘟疫苗免疫產(chǎn)生的抗體水平有限，母源抗體仍維持在一定水平，可以給豬群提供一定的抗體保護(hù)；仔豬8周齡時(shí)，首次免疫的豬瘟疫苗已經(jīng)產(chǎn)生較高水平的豬瘟抗體。

表4 母豬試驗(yàn)豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

3.6.2 仔豬試驗(yàn)結(jié)果 在母豬免疫劑量不變的條件下，共選用100頭仔豬在3周齡進(jìn)行豬瘟疫苗接種。仔豬3周齡（免疫前）母源抗體陽(yáng)性率60%，阻斷率均值47.3%；5周齡（免疫后14 d）豬瘟抗體陽(yáng)性率降低至50%，阻斷率均值42.2%；6周齡陽(yáng)性率上升至60%，阻斷率均值45%；7周齡陽(yáng)性率上升至80%，阻斷率均值49.9%。仔豬試驗(yàn)豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5。

在母源抗體水平有限的情況下，將豬瘟疫苗免疫時(shí)間提前至3周齡，仔豬6周齡時(shí)母源抗體消減，仔豬首次免疫的豬瘟疫苗已經(jīng)產(chǎn)生較高水平的豬瘟抗體，有效縮短了6周齡左右豬群豬瘟抗體的空窗期。

表5 仔豬試驗(yàn)豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

4 分析與討論

我國(guó)豬瘟疫苗的種類與生產(chǎn)廠家眾多，豬瘟疫苗的品質(zhì)主要與疫苗種類、生產(chǎn)工藝和抗原含量有關(guān)。豬瘟脾淋苗每頭抗原量不低于150 RID，細(xì)胞苗每頭抗原量不低于750 RID、傳代細(xì)胞苗每頭抗原量不低于7 500 RID。隨著我國(guó)豬瘟疫苗品質(zhì)的不斷提升，對(duì)豬瘟疫苗中牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）等外源污染越來(lái)越重視，豬感染BVDV后表現(xiàn)出亞臨床感染，其癥狀和病理變化類似于溫和型豬瘟[4]。豬瘟疫苗中污染BVDV，將干擾豬瘟疫苗的免疫效果，影響抗體水平[5]。本試驗(yàn)分別以每頭7 500 RID、15 000 RID、30 000 RID劑量的豬瘟細(xì)胞苗免疫陰性仔豬，免疫后28 d全部產(chǎn)生較高水平的豬瘟抗體；隨著免疫劑量的提高，豬瘟抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)的時(shí)間提前，抗體阻斷率均值有所上升，但組間無(wú)顯著差異。與熊丁杰等[6]的試驗(yàn)結(jié)果一致，在沒(méi)有母源抗體等因素影響的情況下，仔豬單次接種合理劑量的豬瘟活疫苗就能產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的抗體保護(hù)。

在豬瘟疫苗使用過(guò)程中，母源抗體是影響仔豬免疫效果的最主要因素之一，在高水平母源抗體水平時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗免疫，母源抗體會(huì)與豬瘟疫苗發(fā)生中和作用，導(dǎo)致疫苗首次免疫效果較差。若在母源抗體消減后再進(jìn)行豬瘟疫苗免疫，將會(huì)產(chǎn)生較長(zhǎng)時(shí)間的免疫空窗期，增加豬瘟病毒感染風(fēng)險(xiǎn)。因此，有條件的規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)需要定期進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，根據(jù)仔豬母源抗體水平適當(dāng)調(diào)整免疫程序，以獲得高水平的群體保護(hù)。

此外，其他動(dòng)物疫病感染，以及動(dòng)物體況等因素均會(huì)對(duì)豬瘟疫苗免疫效果造成較大的影響。寧宜寶等[7]通過(guò)試驗(yàn)證實(shí)，豬細(xì)小病毒、豬偽狂犬病病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒單獨(dú)或混合感染，均會(huì)對(duì)豬瘟疫苗的免疫效果產(chǎn)生一定的影響，當(dāng)豬群受到豬瘟強(qiáng)毒攻擊時(shí)，無(wú)法有效清除豬瘟強(qiáng)毒，造成持續(xù)感染與對(duì)外排毒。筆者在規(guī)?；i場(chǎng)開(kāi)展豬瘟疫苗免疫試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，同一批相同劑量免疫的仔豬，部分試驗(yàn)豬發(fā)生腹瀉疾病，腹瀉豬群的豬瘟抗體水平比其他豬低，并且抗體的離散度較大。規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)豬瘟的防控，需要從疫苗品質(zhì)、免疫程序、飼養(yǎng)管理等眾多方面入手，做好每一個(gè)環(huán)節(jié)的把控，才能營(yíng)造高水平的豬瘟抗體保護(hù)。