李 玉 徐怡鐘 梁 婷 陶煥青 何 坤 郝 寧 鄒蘇萍 馮士彬 王希春 周裔彬 王一君 張勁松 吳金節(jié) 宛曉春*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶樹生物學(xué)與資源利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，合肥230036；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，合肥230036)

高血脂造成的肥胖及繼發(fā)的心血管疾病不僅表現(xiàn)在人類生命體征上，也出現(xiàn)在日益受到大眾喜愛的伴侶動物——寵物犬身上，嚴(yán)重危害著寵物犬的生活質(zhì)量和身心健康，引起了獸醫(yī)界的廣泛重視[1]，這些健康問題不但困擾著寵物犬的主人，還直接影響著主人和寵物犬的生活質(zhì)量。因此，尋找一個(gè)天然、健康的能夠有效調(diào)節(jié)犬脂類代謝和能夠替代藥品長期食用的功能性犬糧顯得尤為重要。眾多研究表明，綠茶及其多酚不僅能控制動物體重，還能夠降低動物血液中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量，降低心血管疾病的發(fā)生率。劉安軍等[2]以綠茶為原料，應(yīng)用不同的方法進(jìn)行提取，利用提取物飼喂昆明小鼠后發(fā)現(xiàn)，各組小鼠體重均有所下降，平均下降了原始體重的10.1%，并發(fā)現(xiàn)脂肪沉積率降低。因此，如果將綠茶粉及綠茶多酚代替藥物作為作為添加劑生產(chǎn)出具有降脂作用的功能性犬糧，不僅能夠拓寬茶葉和茶多酚的使用空間，而且還可降低給寵物犬用藥造成的身體傷害。

迄今為止，大多數(shù)研究者主要分析了茶葉當(dāng)中某一單體或者某單一成分對嚙齒動物、家禽等的功能性作用，而在犬類上的相關(guān)研究未見全面、系統(tǒng)的報(bào)道。李晶等[3]研究了綠茶粉對老年犬脂肪代謝以及抗氧化能力的影響，但該研究只是測定并分析了綠茶粉對于血清中各種生化指標(biāo)的影響，并未對肝細(xì)胞脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)量做出測定和分析。因此，本試驗(yàn)通過在飼糧中添加1.00%的綠茶粉和0.25%的綠茶多酚，分析綠茶粉及綠茶多酚對犬脂肪代謝和肝細(xì)胞脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)量的影響，探討綠茶粉及綠茶多酚對犬的脂肪代謝是否具有調(diào)節(jié)作用，并進(jìn)一步揭示其降血脂的作用機(jī)制，以期為綠茶粉和綠茶多酚作為添加劑應(yīng)用于調(diào)節(jié)犬脂肪代謝的功能性犬糧的生產(chǎn)奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

綠茶粉由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院饋贈，粉碎后過50目篩網(wǎng)，綠茶多酚購于蕪湖天遠(yuǎn)科技有限公司，為淺黃色粉末，純度為98.92%。綠茶粉和綠茶多酚的主要成分含量參見文獻(xiàn)[4]。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取15只5月齡的體重相近、胎次一致、健康的本地田園犬，適應(yīng)1周后，隨機(jī)分為3組，分別為對照組、綠茶粉組和綠茶多酚組，每組5只(公母隨機(jī))。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，綠茶粉組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加1.00%綠茶粉的飼糧，綠茶多酚組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0.25%綠茶多酚的飼糧。試驗(yàn)期為12周。試驗(yàn)期間按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫。

1.3 基礎(chǔ)飼糧

犬基礎(chǔ)飼糧為上海淘樂思科技有限公司與美國淘樂思實(shí)驗(yàn)中心聯(lián)合研制的恩途(Hentoo)全價(jià)犬糧?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平參見文獻(xiàn)[4]。

1.4 樣品采集與處理

1.4.1 血液樣品采集

分別于試驗(yàn)第0(試驗(yàn)開始前)、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12周同一時(shí)間點(diǎn)臂頭靜脈采集4 mL血液(非抗凝)，3 000 r/min離心10 min，分離血清，分裝在EP管中，-20 ℃保存待測。

1.4.2 肝臟樣品的采集

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，按照0.1 mL/kg BW的劑量肌肉注射鹿眠寧，等到麻醉較深后，頸靜脈放血處死。打開犬的腹腔，剪斷韌帶和血管，剪掉肝臟上多余的脂肪，分離出肝臟，用生理鹽水沖掉肝臟上的血液，立即切成1 cm3大小的組織塊放入凍存管中，于液氮中保存，待測脂代謝相關(guān)基因mRNA相對表達(dá)量。

1.5 指標(biāo)測定

1.5.1 犬血清脂代謝指標(biāo)的測定

采用生化試劑盒，按照廠家(南京建成生物工程研究所)使用說明書測定犬血清中TG(終點(diǎn)法)、TC[磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)(GPO-PAP)法]、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)(固定時(shí)間法)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)(固定時(shí)間法)的含量。

1.5.2 犬肝組織脂代謝相關(guān)基因mRNA相對表達(dá)量的測定

根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中的目的片段序列，采用Primer 5設(shè)計(jì)引物，引物序列見表1。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法測定犬肝組織中乙酰輔酶A羧化酶α(ACCα)、脂肪酸合成酶(FAS)、載脂蛋白B-100(ApoB-100)、載脂蛋白A-1(ApoA-1)、脂肪酸轉(zhuǎn)位酶(CD36)、過氧化物酶體增殖物活化受體α(PPARα)和?；o酶A氧化酶(ACO)mRNA相對表達(dá)量。

肝組織中總RNA的提取采用Trizol Reagent快速提取試劑盒(TaKaRa,日本)進(jìn)行。將提取到的總RNA采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa,日本)合成cDNA，反應(yīng)結(jié)束后-20 ℃保存?zhèn)溆?。使用SYBR GreenⅠ(TaKaRa,日本)熒光染料，采用qRT-PCR法(ABI-7500PCR儀,美國)檢測脂代謝相關(guān)基因mRNA的相對表達(dá)量。選用β-肌動蛋白(β-actin)作為內(nèi)參基因，結(jié)果以2-ΔΔCt表示。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列

1.6 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，各組數(shù)據(jù)均用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，先進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，再采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)，P<0.05和P<0.01分別表示差異顯著和極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 綠茶粉和綠茶多酚對犬體重的影響

如表2所示，試驗(yàn)開始時(shí)3組犬初始體重相近(P>0.05)。在整個(gè)試驗(yàn)過程中各組犬體重整體呈增長趨勢，試驗(yàn)前3周體重增長較快，且綠茶粉組和綠茶多酚組犬體重與對照組之間沒有顯著差異(P>0.05)。從試驗(yàn)第4周開始，綠茶粉組和犬體重顯著低于對照組(P<0.05)，這種差異性一直維持到第12周，綠茶多酚犬體重雖然也一直低于對照組，但僅在第6、11和12周出現(xiàn)顯著差異(P<0.05)。試驗(yàn)進(jìn)行到第12周時(shí)，對照組犬體重增長量比其他2組犬要高，對照組犬增長了162%，綠茶粉組犬增長了101%，綠茶多酚組犬增長132%，且茶多酚組和綠茶粉組犬體重顯著低于對照組(P<0.05)，與對照組比分別降低了61%和30%。上述結(jié)果表明，在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能有效控制犬體重的增長。

2.2 綠茶粉和綠茶多酚對犬血清TC含量的影響

如表3所示，與對照組相比，試驗(yàn)第0周時(shí)，綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清TC含量無顯著變化(P>0.05)，各組維持在同一個(gè)比較相似的水平；試驗(yàn)第1～3周時(shí)，各組犬血清TC含量開始略有下降；從試驗(yàn)第4周開始，對照組犬血清TC含量雖有波動，但是體內(nèi)血清TC含量基本維持在同一個(gè)水平，綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清TC含量則開始下降。從試驗(yàn)第7周開始，綠茶粉組和綠茶多酚犬血清TC含量顯著低于對照組(P<0.05)，這種變化趨勢一直維持到第12周。試驗(yàn)進(jìn)行到第12周時(shí)，綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清TC含量顯著低于對照組(P<0.05)，相比對照組分別下降了21.7%、28.0%。上述結(jié)果表明，在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠降低犬血清TC含量。

2.3 綠茶粉和綠茶多酚對犬血清TG含量的影響

如表4所示，在整個(gè)試驗(yàn)過程中對照組犬血清TG含量整體維持在0.9～1.1 mmol/L。試驗(yàn)前3周，各組血清TG含量基本不變，從試驗(yàn)第4周開始，綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清TG含量開始緩慢下降，直至第8周2組同步表現(xiàn)出顯著低于對照組(P<0.05)，并這種顯著性差異一直維持到試驗(yàn)結(jié)束。試驗(yàn)第12周時(shí)，綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清TG含量均顯著低于對照組(P<0.05)，相比對照組分別下降了21.0%、16.1%。上述結(jié)果表明，在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠降低犬血清TG含量。

表2 綠茶粉和綠茶多酚對犬體重的影響

與對照組比，同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同字母或不標(biāo)字母者表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母者表示差異顯著(P<0.05)。表3至表6同。

Compared with the control group, values with the same or no letter superscripts in the same row mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significance difference (P<0.05). The same as Table 3 to Table 6.

表3 綠茶粉和綠茶多酚對犬血清TC含量的影響

表4 綠茶粉和綠茶多酚對犬血清TG含量的影響

2.4 綠茶粉和綠茶多酚對犬血清LDL-C含量的影響

如表5所示，試驗(yàn)前4周，各組犬血清LDL-C含量變化不大，各組間差異不顯著(P>0.05)；從試驗(yàn)第5周開始，綠茶粉及綠茶多酚組血清LDL-C含量開始下降，在試驗(yàn)第5、6周時(shí)與對照組相比差異不顯著(P>0.05)，在第7～12周時(shí)均顯著低于對照組(P<0.05)；試驗(yàn)進(jìn)行到第12周時(shí)，綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清LDL-C含量均顯著低于對照組(P<0.05)，相比對照組分別下降了28.1%、21.7%。上述結(jié)果表明，在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠降低犬血清LDL-C含量。

表5 綠茶粉和綠茶多酚對犬血清LDL-C含量的影響

2.5 綠茶粉和綠茶多酚對犬血清HDL-C含量的影響

如表6所示，試驗(yàn)前4周，各組犬血清HDL-C含量維持在同一個(gè)水平，各組間沒有顯著差異(P>0.05)；從第5周開始，3組犬血清HDL-C含量均有所升高，且綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清HDL-C含量高于對照組，但差異不顯著(P>0.05)；在試驗(yàn)第6～12周，綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清HDL-C含量均顯著高于對照組(P<0.05)；試驗(yàn)進(jìn)行到第12周時(shí)，綠茶粉組和綠茶多酚組犬血清HDL-C含量顯著高于對照組(P<0.05)，相比對照組分別升高了18.5%、25.6%。上述結(jié)果說明，在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠升高犬血清HDL-C含量。

表6 綠茶粉和綠茶多酚對犬血液HDL-C含量的影響

2.6 綠茶粉和綠茶多酚對犬肝組織脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

如表7所示，與對照組犬相比，綠茶粉組和綠茶多酚組犬肝組織ACCαmRNA的相對表達(dá)量均顯著降低(P<0.05)，分別為對照組的24.8%和12.8%；肝組織FASmRNA的相對表達(dá)量均顯著降低(P<0.05)，分別為對照組的38.5%和23.5%；肝組織ApoB-100 mRNA的相對表達(dá)量均顯著降低(P<0.05)，分別為對照組的27.3%和31.1%；肝組織ApoA-1 mRNA的相對表達(dá)量均顯著升高(P<0.05)，分別為對照組的2.05、1.44倍；肝組織ACOmRNA的相對表達(dá)量均顯著升高(P<0.05)，相比對照組分別升高了34.2%和80.3%；肝組織PPARαmRNA的相對表達(dá)量均顯著升高(P<0.05)，分別為對照組的1.21和1.79倍。綠茶粉組犬肝組織CD36 mRNA的相對表達(dá)量高于對照組，為對照組的1.08倍，但差異不顯著(P>0.05)，綠茶多酚組犬肝組織CD36 mRNA的相對表達(dá)量顯著高于對照組(P<0.05)，為對照組的1.73倍。上述結(jié)果說明，在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠降低犬肝組織ACCα、FAS、ApoB-100 mRNA的相對表達(dá)量，升高ApoA-1、ACO、PPARα和CD36 mRNA的相對表達(dá)量。

3 討 論

研究表明，綠茶對體重有控制作用。Kuan等[5]通過30周的試驗(yàn)比較了普洱茶、烏龍茶、黑茶和綠茶對Sprague-Dawley鼠的作用，結(jié)果顯示：在控制體重方面，烏龍茶優(yōu)于普洱茶，普洱茶優(yōu)于黑茶，黑茶優(yōu)于綠茶；在降TG方面，烏龍茶和普洱茶優(yōu)于綠茶和黑茶；但是在降TC方面，綠茶和普洱茶效果更好。這些研究結(jié)果表明，長期飼喂茶葉能控制鼠的體重并能降低血脂。本試驗(yàn)開始時(shí)3組犬的平均體重相似，沒有顯著差異，試驗(yàn)前3周犬體重快速增長，隨著試驗(yàn)的進(jìn)行，各組犬體重均在上升。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，綠茶粉組和綠茶多酚組犬平均體重分別比對照組降低了61%和30%。這說明，綠茶粉及綠茶多酚對犬均具有控制體重的作用。

表7 綠茶粉和茶多酚對犬肝組織脂代謝相關(guān)基因mRNA相對表達(dá)量的影響

低密度脂蛋白(LDL)的主要作用是從血液中把機(jī)體內(nèi)的TC轉(zhuǎn)運(yùn)到組織。當(dāng)細(xì)胞需要TC時(shí)，細(xì)胞載脂蛋白B/E(ApoB/E)受體上調(diào)，促進(jìn)TC進(jìn)入細(xì)胞，以備機(jī)體利用。LDL所特有的載脂蛋白是ApoB-100，它是激活肝臟、腎上腺和脂肪組織細(xì)胞ApoB/E受體所需的關(guān)鍵性因子，肝臟和外圍細(xì)胞的ApoB/E受體可以清除60%～80%的LDL-C。一旦細(xì)胞開始攝取LDL，TC開始被水解，用以合成細(xì)胞膜和激素，它們在合成細(xì)胞膜和激素中發(fā)揮重要的作用，過量的TC則被酰基輔酶A重新合成為膽固醇酯。另外，細(xì)胞內(nèi)的膽固醇含量升高會抑制TC合成的限速酶羥甲基戊二酰輔酶A(AHMG-CoA)還原酶的作用，同時(shí)細(xì)胞會減少ApoB/E受體的生成，阻礙細(xì)胞吸收更多的TC[6]。

高密度脂蛋白(HDL)在清除外周組織TC過程中發(fā)揮著重要的作用。HDL可以在肝臟和小腸新合成，它主要含有ApoA-1、載脂蛋白A-2(ApoA-2)、載脂蛋白C-1(ApoC-1)、載脂蛋白C-2(ApoC-2)、載脂蛋白C-3(ApoC-3)、載脂蛋白E(ApoE)。ApoA-1可激活卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)，把HDL當(dāng)中的游離TC和外圍組織吸收的TC轉(zhuǎn)化為膽固醇酯類，促進(jìn)初生成的HDL向HDL3轉(zhuǎn)變。額外酯化的膽固醇也可以轉(zhuǎn)變?yōu)镠DL2，它也可以從乳糜顆粒和極低密度脂蛋白(VLDL)的分解代謝中獲得。在肝脂肪酶的作用下HDL2也可以向HDL3轉(zhuǎn)變。利用膽固醇的可逆轉(zhuǎn)變的過程，HDL把多余的TC從組織轉(zhuǎn)移到肝臟，在肝臟吸收進(jìn)入細(xì)胞合成細(xì)胞所需的物質(zhì)[7]。

在調(diào)節(jié)體內(nèi)脂代謝方面，綠茶粉和綠茶多酚均能降低犬血清中TC、TG和LDL-C的含量，均能升高犬血清中HDL-C的含量，但是綠茶粉和綠茶多酚的效果在不同方面效果不同。李晶等[3]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂不同濃度綠茶粉的老年犬血清TG含量均有所下降，且犬血清TG含量與綠茶粉濃度呈正相關(guān)，當(dāng)綠茶粉濃度為4 g/kg時(shí)，犬血清TG含量最高，與對照組相比下降了22.54%；飼喂不同濃度綠茶粉的老年犬血清TC含量均下降，添加1、2和4 g/kg綠茶粉的組與對照組比分別降低了15.21%、15.53%和26.38%；飼喂不同濃度綠茶粉的老年犬血清HDL含量均升高，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各綠茶粉添加組均與對照組存在差異顯著；飼喂不同濃度綠茶粉的老年犬血清LDL含量均下降，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各綠茶粉添加組均與對照組存在差異顯著。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)進(jìn)行到第12周時(shí)，與對照組相比，綠茶粉組和綠茶多酚組血清TG含量分別下降了21.0%和16.1%，血清TC含量分別下降了28.0%和21.7%，血清HDL-C含量分別升高了18.5%和25.6%，血清LDL-C含量分別下降了28.1%和21.7%。這說明在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠降低犬血清TG、TC和LDL-C含量，升高犬血清HDL-C含量，具有一定的降脂作用。

FAS是動物機(jī)體合成脂肪酸必不可少的物質(zhì)，是動物新陳代謝的關(guān)鍵性因子。Yeh等[8]通過培養(yǎng)MCF-7乳腺癌細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，茶多酚中的有效成分如兒茶素沒食子酸(EGCG)和茶黃素(TF)均可抑制蛋白激酶B(Akt)的活化，并在一定程度上阻止刺激蛋白-1(SP-1)轉(zhuǎn)錄因子與FAS結(jié)構(gòu)基因結(jié)合，抑制劑磷脂酰肌醇-3(PI3K)可以發(fā)揮同樣的作用。由表皮生長因子(EGF)誘發(fā)合成TG、TC和脂肪酸同樣也可被EGCG及TF3抑制。綠茶和綠茶多酚通過阻斷表皮生長因子受體(EGFR)/PI3K/Akt/SP-1轉(zhuǎn)導(dǎo)信號通路，從而抑制FAS的表達(dá)。Chiang等[9]研究發(fā)現(xiàn)，普洱茶能夠抑制HepG2細(xì)胞中FAS的表達(dá)。從綠茶當(dāng)中提取的52 μmol的EGCG就可使FAS的活性降低50%，猜測可能EGCG與還原型輔酶Ⅱ(NADPH)有相同的結(jié)合位點(diǎn)，抑制了NADPH的活性，從而影響了細(xì)胞內(nèi)脂肪酸的合成[10]。本研究表明，綠茶粉組和綠茶多酚組犬肝組織FASmRNA的相對表達(dá)量顯著低于對照組，分別為對照組的38.5%和23.5%，說明綠茶粉和綠茶多酚能夠抑制犬肝組織FAS的表達(dá)。

ACCα在脂肪酸合成和分解代謝中發(fā)揮著重要作用，是脂肪酸合成的限速酶，它的主要功能是調(diào)節(jié)有關(guān)脂肪酸的合成。ACCα的活性在脂肪合成比較多的組織較高，一般情況下肝臟、脂肪和乳腺等組織中ACCα的活性高于其他組織。ACCα催化反應(yīng)的終產(chǎn)物丙二酸單酰輔酶A在組織細(xì)胞中具有多種功能，它可以作為C2的供體為長鏈脂肪酸從頭合成提供碳原子，碳鏈延長為長鏈脂肪酸后，可以利用組織的物質(zhì)合成磷脂與TG[11]。Lin等[12]研究發(fā)現(xiàn)，茶葉及其茶多酚可促進(jìn)腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)與LKB1的表達(dá)，進(jìn)而抑制ACCα的表達(dá)。本試驗(yàn)中，綠茶粉組和綠茶多酚組犬肝組織ACCαmRNA相對表達(dá)量均較對照組顯著降低，分別為對照組的24.8%和12.8%，說明在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%綠茶多酚能夠降低犬肝組織ACCαmRNA相對表達(dá)量。

研究表明，機(jī)體脂肪代謝紊亂(代謝綜合征)個(gè)體，使用茶葉提取物一段時(shí)間以后，個(gè)體血清TC、TG、LDL-C和ApoB含量降低，然而，于此同時(shí)血清HDL和ApoA-1含量呈現(xiàn)增加的趨勢[13]。Goto等[14]研究發(fā)現(xiàn)，綠茶中的有效活性物質(zhì)EGCG不僅能夠上調(diào)低密度脂蛋白受體(LDLR)的表達(dá)，同時(shí)還能下調(diào)細(xì)胞外載脂蛋白B(ApoB)的表達(dá)，從而促進(jìn)機(jī)體內(nèi)脂肪代謝。EGCG對LDLRmRNA相對表達(dá)量有明顯的升高作用，并在一定程度上降低ApoB-100的含量[14]。LDL所特有的載脂蛋白是ApoB-100，它是VLDL轉(zhuǎn)化為LDL的關(guān)鍵分子。本研究表明，綠茶粉和綠茶多酚可使犬肝組織ApoB-100 mRNA的相對表達(dá)量降低，綠茶粉組和綠茶多酚組分別為對照組的27.3%和31.1%；綠茶粉和綠茶多酚可使肝組織ApoA-1 mRNA的相對表達(dá)量顯著升高，綠茶粉組和綠茶多酚組分別為對照組的2.05和1.44倍。這說明在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠降低犬肝組織ApoB-100 mRNA的相對表達(dá)量，升高犬肝組織ApoA-1 mRNA的相對表達(dá)量。

據(jù)報(bào)道，表沒食子兒茶素(ECG)比其他兒茶素類優(yōu)先在巨噬細(xì)胞中積累，因?yàn)镋CG具有疏水性的化學(xué)結(jié)構(gòu)特征。許多學(xué)者認(rèn)為CD36是氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)的表達(dá)受體，經(jīng)過比對發(fā)現(xiàn)，用抗CD36抗體處理后，巨噬細(xì)胞攝取OX-LDL的量能減少1/2[15-16]。在細(xì)胞上的研究發(fā)現(xiàn)ECG能夠顯著抑制CD36 mRNA的相對表達(dá)量。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，綠茶粉和綠茶多酚均能夠增加犬肝組織CD36 mRNA的相對表達(dá)量，綠茶粉組和綠茶多酚組分別是對照組的1.73和1.08倍。這說明，在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠升高犬肝組織CD36 mRNA的相對表達(dá)量。

ACO是相關(guān)細(xì)胞內(nèi)和脂肪酸氧化有關(guān)的酶，有研究表明肥胖的動物體內(nèi)該酶活性降低。ACO降低動物機(jī)體血清TG含量的功能是通過增加脂肪酸在過氧化物小體中的氧化能力來實(shí)現(xiàn)的。過氧化物酶體增殖活性受體(PPARs)為核激素受體超家族成員，其中PPARα主要通過上調(diào)過氧化物酶體中ACO和線粒體中肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶 1(CPT1)的表達(dá)，來增加線粒體和組織細(xì)胞中過氧化物酶體代謝脂肪酸的能力。與對照相比，綠茶粉和綠茶多酚使犬肝組織ACOmRNA的相對表達(dá)量分別升高了34.2%和80.3%,說明在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠升高犬肝組織ACOmRNA的相對表達(dá)量。

PPARs是一種細(xì)胞內(nèi)核受體，能參與細(xì)胞內(nèi)多種代謝途徑和細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)PPARs有3種不同的亞型[PPARα、過氧化物酶體增殖活性受體β(PPARβ)、過氧化物酶體增殖活性受體γ(PPARγ)]，它們之間有較高的序列同源性和結(jié)構(gòu)相似性。由于組織分布的不同和靶基因分布的不同，它們有著不同的功能。其中，PPARα在脂類代謝、脂肪酸氧化等方面發(fā)揮著重要的生理功能。PPARα通過與維甲X受體結(jié)合形成異二聚體，再與靶基因PPARα的結(jié)合原件(PPRE)的結(jié)合來調(diào)節(jié)相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄[17]。羅居?xùn)|等[18]研究表明，當(dāng)用茶葉提取物EGCG處理癌細(xì)胞時(shí)，PPARα蛋白的表達(dá)量隨著EGCG含量的增加而增加。PPARα受相關(guān)因子刺激后，通過相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄來調(diào)節(jié)過氧化物酶的表達(dá)、線粒體的β-氧化以及脂肪酸的吸收和TG降解，進(jìn)而調(diào)控肝細(xì)胞內(nèi)的脂代謝。當(dāng)PPARα受體被相關(guān)因子激活時(shí)，通過調(diào)控細(xì)胞內(nèi)相關(guān)脂蛋白代謝基因的轉(zhuǎn)錄，引起機(jī)體內(nèi)脂代謝的變化。此外，PPARα還通過清除富含TG的乳糜微粒促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞內(nèi)脂代謝的進(jìn)行[19]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，綠茶粉和綠茶多酚分別使犬肝組織PPARαmRNA的相對表達(dá)量升高到對照組的1.79和1.21倍，說明在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚均能夠升高犬肝組織PPARαmRNA的相對表達(dá)量。

綜上所述，在飼糧中添加1.00%的綠茶粉或0.25%的綠茶多酚能夠有效降低犬血清TG、TC、LDL-C含量，升高犬血清HDL-C含量，抑制犬肝組織ACCα、FAS、ApoB-100的對表達(dá)，升高犬肝組織ACO、CD36、PPARα的表達(dá)，具有一定的降脂作用。通過綠茶粉與綠茶多酚的對比試驗(yàn)可知，綠茶多酚對犬的降脂效應(yīng)在血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量中同步出現(xiàn)，在犬體重中滯后于綠茶粉，且隨后又波動到無降脂效應(yīng)，但最終出現(xiàn)降脂效應(yīng)，此降脂效應(yīng)與對照組形成顯著性差異，說明在綠茶粉的降脂功效中，綠茶多酚起到關(guān)鍵性作用，綠茶多酚可為研究綠茶粉降脂機(jī)制提供參考物質(zhì)基礎(chǔ)。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，在飼糧中添加1.00%綠茶粉或0.25%綠茶多酚均能夠有效控制犬的體重，調(diào)節(jié)犬體內(nèi)的脂代謝，降低犬肝細(xì)胞ACCα、FAS、ApoB-100 mRNA的相對表達(dá)量，提高犬肝細(xì)胞ApoA-1、CD36、PPARα、ACOmRNA的相對表達(dá)量，從而發(fā)揮降脂作用。