范嬋 劉艷婷 趙印

摘 要：目的 探討總蛋白雙縮脲法單試劑盒與雙試劑盒檢測(cè)結(jié)果的一致性。方法 參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）EP9-A2文件的要求，以雙試劑盒為參比方法、單試劑盒為待評(píng)方法，使用患者新鮮血漿標(biāo)本進(jìn)行方法比對(duì)及偏倚評(píng)估。結(jié)果 回歸方程Y=1.0064X+0.2168，相關(guān)系數(shù)r=0.9984，不同醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚均小于我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《WS/T 403-2012 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)》所規(guī)定的總允許誤差的1/2。結(jié)論 總蛋白雙縮脲法單試劑盒與雙試劑盒的檢測(cè)結(jié)果具有良好的一致性，差異臨床可接受，其檢測(cè)報(bào)告可使用相同的參考區(qū)間，但仍建議臨床實(shí)驗(yàn)室使用雙試劑盒檢測(cè)患者樣本。

關(guān)鍵詞：總蛋白；雙縮脲法；偏倚評(píng)估；一致性

中圖分類(lèi)號(hào)：R446.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.20.047

文章編號(hào)：1006-1959（2018）20-0152-03

Abstract：Objective To investigate the consistency of the results of the total protein biuret method single kit and double kit.Methods According to the requirements of the American Society for Clinical and Laboratory Standards（CLSI）EP9-A2 document，the double kit were used as the reference method，the single kit was used as the method to be evaluated，and the patient's fresh plasma samples were used for method comparison and bias evaluation.Results The regression equation Y=1.0064X+0.2168，the correlation coefficient r=0.9984，the bias at different medical decision levels is less than the total specified in China's health industry standard “WS/T 403-2012 Clinical Biochemical Inspection Conventional Project Analysis Quality Index”.Allow 1/2 of the error.Conclusion The results of single kit and double kit of total protein biuret method were in good agreement with each other，the difference was acceptable in clinic.The same reference range could be used for the test report，but it was still recommended that the clinical laboratory should use double kit to detect the patient sample.

Key words：Total protein；Biuret method；Bias assessment；Consistency

總蛋白（total protein，TP）是血清或血漿所含各種蛋白質(zhì)的總稱(chēng)，臨床上常通過(guò)雙縮脲法（biuret method）檢測(cè)血清或血漿TP含量及其組分，用以評(píng)價(jià)患者的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、消化功能及肝臟合成功能等。相關(guān)文獻(xiàn)表明，該方法對(duì)肝臟疾病、腎臟疾病、出血性疾病和免疫性疾病等的診療和愈后判斷具有重要價(jià)值[1-3]。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，試劑盒的性能水平不斷提高，部分廠(chǎng)家在TP測(cè)定單試劑盒的方法基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)了雙試劑盒，以減小標(biāo)本質(zhì)量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾，保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）頒布的EP9-A2文件[4]要求，使用患者新鮮血漿標(biāo)本對(duì)單試劑盒和雙試劑盒進(jìn)行方法比對(duì)和偏倚，探討了兩試劑盒檢測(cè)結(jié)果的一致性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 日立7600全自動(dòng)分析儀；總蛋白雙縮脲法測(cè)定單試劑盒與雙試劑盒均由四川邁克提供，批號(hào)為1117041，儀器檢測(cè)參數(shù)均嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)設(shè)置；配套生化復(fù)合校準(zhǔn)品由四川邁克提供，批號(hào)為0518061，量值嚴(yán)格溯源至YY/T1195-2011血清總蛋白參考測(cè)量方法。低、中、高三水平液體生化多項(xiàng)質(zhì)控品由美國(guó)伯樂(lè)提供，批號(hào)為45771～45773。

1.2標(biāo)本 隨機(jī)選擇2018年8月1日～10日于遂寧市中心醫(yī)院就診的80例門(mén)診患者，并以成都瑞琦公司生產(chǎn)的肝素鈉抗凝真空采血管采集患者靜脈血3 ml，充分混勻后以4000 rpm的參數(shù)離心5 min，及時(shí)分離血漿。所有標(biāo)本均無(wú)溶血、黃疸和脂濁，其檢測(cè)結(jié)果均在線(xiàn)性范圍內(nèi)，且至少50%標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果處于參考區(qū)間之外。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本檢測(cè) 參照EP9-A2文件[4]的要求，以雙試劑盒為參比方法、單試劑盒為待評(píng)方法，使用患者新鮮血漿標(biāo)本進(jìn)行方法比對(duì)及偏倚評(píng)估。標(biāo)本檢測(cè)前對(duì)儀器常規(guī)保養(yǎng)和校準(zhǔn)，且3個(gè)濃度水平的室內(nèi)質(zhì)控均在控。每天以1～8和8～1的順序檢測(cè)8份新鮮標(biāo)本，連續(xù)檢測(cè)10 d，共檢測(cè)80份樣本。所有標(biāo)本均于采樣后2 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.3.2離群值檢驗(yàn) 按照EP9-A2文件進(jìn)行方法內(nèi)及方法間離群值檢驗(yàn)[5]。

1.3.3兩試劑盒檢測(cè)結(jié)果的比較及線(xiàn)性回歸分析 計(jì)算兩試劑盒所有標(biāo)本雙份測(cè)定的均值，并對(duì)其進(jìn)行配對(duì)資料t檢驗(yàn)比較分析；然后以雙試劑盒每份標(biāo)本雙份測(cè)定的均值為X軸、單試劑盒每份標(biāo)本雙份測(cè)定的均值為Y軸繪制散點(diǎn)圖，從而得到兩試劑盒間檢測(cè)結(jié)果的線(xiàn)性回歸方程（Y=bX+a）及其相關(guān)系數(shù)（r）；并以雙試劑盒每份標(biāo)本雙份測(cè)定的均值為X軸、兩試劑盒每份標(biāo)本雙份測(cè)定的均值差為Y軸繪制偏倚圖。當(dāng)r≥0.975則表示X取值范圍合適，可用直線(xiàn)回歸分析來(lái)評(píng)估斜率（b）和截距（a）；若r<0.975則需擴(kuò)大X取值范圍，增加樣本量后再重新分析全部數(shù)據(jù)[4，5]。

1.3.4偏倚評(píng)估 根據(jù)線(xiàn)性回歸方程計(jì)算單試劑盒在45 g/L、60 g/L和85 g/L這3個(gè)濃度水平處的預(yù)期偏倚（SE%）[5，6]，SE%={（b-1）×X+a}×100/X，然后以衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 403-2012[7]中 TP的總允許誤差（TEa）的 1/2 為臨床可接受水平（即 SE%≤1/2TEa），表示兩試劑盒檢測(cè)結(jié)果具有一致性。TP的 TEa 為靶值±5%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件及Excel2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用配對(duì)資料t檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1離群值檢驗(yàn) 經(jīng)檢驗(yàn)，所有標(biāo)本方法內(nèi)均未見(jiàn)離群值；而方法間的離群值檢驗(yàn)時(shí)僅發(fā)現(xiàn)1份樣本存在離群值，經(jīng)分析確認(rèn)為甘油三酯過(guò)高所致，刪除此標(biāo)本檢測(cè)數(shù)據(jù)后增加標(biāo)本繼續(xù)分析。

2.2兩試劑盒檢測(cè)結(jié)果的比較及線(xiàn)性回歸分析 單試劑盒TP檢測(cè)結(jié)果為（65.94±14.41）g/L，雙試劑盒TP檢測(cè)結(jié)果為（65.30±14.29）g/L，兩試劑盒間檢測(cè)結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.920，P<0.05）。經(jīng)線(xiàn)性回歸分析，其回歸方程為Y=1.0064X+0.2168，r=0.9984，見(jiàn)圖1、圖2。

2.3兩試劑盒檢測(cè)結(jié)果的一致性 單試劑盒在45 g/L、60 g/L和85 g/L這3個(gè)Xc的SE%分別為1.12、1.00和0.90，均小于1/2TEa。這說(shuō)明單試劑盒的SE%臨床可接受，兩試劑盒檢測(cè)結(jié)果具有良好的一致性。

3 討論

TP檢測(cè)具有國(guó)際公認(rèn)的參考方法及參考物質(zhì)，從而促進(jìn)了TP檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化工作，保障了不同廠(chǎng)家試劑間檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性。但在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，使用雙縮脲法單試劑盒檢測(cè)血清或血漿TP時(shí)，其檢測(cè)結(jié)果容易受到標(biāo)本質(zhì)量的影響，如溶血、脂濁等將使檢測(cè)結(jié)果假性增高。為解決這一影響因素，部分廠(chǎng)家研發(fā)了雙試劑盒，即加標(biāo)本后立即加入試劑R1，混勻并孵育5 min再以空白管調(diào)零后測(cè)定吸光度A1，然后加試劑R2，再次孵育5 min后測(cè)定吸光度A2，根據(jù)A2與A1的吸光度差值和校準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算標(biāo)本中TP的濃度，從而明顯減小了標(biāo)本質(zhì)量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

因雙試劑盒的成本比單試劑盒高，目前大部分實(shí)驗(yàn)室仍使用單試劑盒，故本文參照EP9-A2文件的要求進(jìn)行方法比對(duì)及偏倚評(píng)估，以雙試劑盒為參比方法、單試劑盒為待評(píng)方法，研究結(jié)果顯示，單試劑盒的檢測(cè)結(jié)果顯著高于雙試劑盒（t=6.920，P<0.05），相關(guān)系數(shù)r=0.9984，直線(xiàn)回歸方程為Y=1.0064X+0.2168，從圖2可見(jiàn)偏倚點(diǎn)隨雙試劑盒雙份測(cè)定均值呈隨機(jī)分布，但有傾斜的趨勢(shì)，斜率為0.064，截距為0.2168，在45 g/L、60 g/L和85 g/L這3個(gè)Xc的SE%均小于《WS/T 403-2012 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中所規(guī)定的總允許誤差的1/2，說(shuō)明兩種試劑盒的檢測(cè)結(jié)果具有一致性，差異臨床可接受，其檢測(cè)報(bào)告可使用相同的參考區(qū)間。

綜上所述，總蛋白雙縮脲法單試劑盒與雙試劑盒的檢測(cè)結(jié)果具有良好的一致性，但仍建議臨床實(shí)驗(yàn)室使用雙試劑盒檢測(cè)患者標(biāo)本。

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收稿日期：2018-8-21；修回日期：2018-9-1

編輯/錢(qián)洪飛