付旭東

奶牛乳房炎是指奶牛乳腺受到刺激后所發(fā)生的一種炎性疾病，是奶牛養(yǎng)殖中的常見病和多發(fā)病，嚴重阻礙了奶牛業(yè)的健康發(fā)展和奶制品的食品安全。為掌握當前引起東至縣奶牛乳房炎的主要致病原以及主要致病原的耐藥性情況，本研究對188份奶牛乳樣進行了致病原的分離鑒定與耐藥性分析，為東至縣奶牛乳房炎的臨床合理用藥和綜合防控提供了科學(xué)的指導(dǎo)依據(jù)。

1材料和方法

1.1生化鑒定管、藥敏紙片

細菌生化反應(yīng)管購自杭州天和微生物試劑有限公司；藥敏紙片購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.2樣品的采集

采自東至縣奶牛場的奶牛乳樣共188份。

1.3致病原的分離培養(yǎng)、純化與形態(tài)特征觀察

將乳樣分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂、綿羊血瓊脂、麥康凱瓊脂和S-S瓊脂培養(yǎng)基，置于37℃中培養(yǎng)24～48h，選擇典型的單個菌落進行純化培養(yǎng)，并進行革蘭氏染色和鏡檢觀察。在普通瓊脂和綿羊血瓊脂平板上形成圓形、整齊、光滑、濕潤的單菌落，普通瓊脂上呈金黃色，綿羊血瓊脂上具有溶血環(huán)，染色鏡檢可見形態(tài)呈圓形或橢圓形、葡萄串狀排列的革蘭氏陽性菌，則初步判斷為金黃色葡萄球菌。在普通瓊脂平板上不生長，在綿羊血瓊脂平板上形成圓形、半透明、光滑、濕潤、灰白色的小菌落，具有透明的溶血環(huán)，染色鏡檢可見形態(tài)呈球形或卵圓形、短鏈狀排列的革蘭氏陽性菌，則初步判斷為鏈球菌。在營養(yǎng)瓊脂和麥康凱瓊脂平板上形成圓形、半透明、光滑、整齊、濕潤的單菌落，普通瓊脂上呈灰白色，麥康凱瓊脂上呈紅色，綿羊血瓊脂上具有溶血環(huán)，S-S瓊脂不生長或生長很差，染色鏡檢可見形態(tài)呈短桿狀、兩端鈍圓、散在或成對存在的革蘭氏陰性菌，則初步判斷為大腸桿菌。在S-S瓊脂平板上形成光滑、整齊、濕潤、無色、半透明、中等大小的單菌落，染色鏡檢可見形態(tài)呈桿狀、兩端鈍圓、散在排列的革蘭氏陰性菌，則初步判斷為沙門氏菌。

1.4分離菌株生化鑒定試驗

根據(jù)表1中球菌、桿菌的主要生化特性對分離菌株進行生化鑒定。

1.5藥敏試驗

采用K-B涂布法測定致病菌對常用藥物的敏感性，分析東至縣奶牛乳房炎主要致病原的耐藥性。

2結(jié)果與分析

2.1致病原分離鑒定結(jié)果

通過分離純化、培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、鏡檢形態(tài)、生化特性等方法對188份乳樣進行致病原的分離鑒定，共成功分離鑒定出89株致病原。其中金黃色葡萄球菌共分離鑒定出37株，感染率為19.68%鏈球菌29株，感染率為15.42%（無乳鏈球菌8株，感染率為4.25%；停乳鏈球菌9株，感染率為4.79%；乳房鏈球菌12株，感染率為6.38%）；大腸桿菌23株，感染率為12.23%。表明引起東至縣奶牛乳房炎的致病菌主要為金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌，且以金黃色葡萄球菌的感染最為突出。

2.2藥敏試驗結(jié)果

37株金黃色葡萄球菌對慶大霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星、頭孢氨芐、恩諾沙星、氟苯尼考等藥物較敏感，對青霉素、氨芐青霉素、復(fù)方新諾明、四環(huán)素已產(chǎn)生較強的耐藥性，其中對青霉素和氨芐青霉素的耐藥率80%。29株鏈球菌對慶大霉素、氟苯尼考、頭孢氨芐、環(huán)丙沙星等藥物較敏感，對鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、氨芐青霉素、青霉素、復(fù)方新諾明已產(chǎn)生較強的耐藥性，其中對鏈霉素、四環(huán)素的耐藥率高達70%以上。23株大腸桿菌對頭孢氨芐、慶大霉素、氟苯尼考、氯霉素等藥物較敏感，對復(fù)方新諾明、氨芐青霉素、紅霉素、青霉素已產(chǎn)生較強的耐藥性，其中對復(fù)方新諾明的耐藥率高達78.26%。該結(jié)果表明引起東至縣奶牛乳房炎的主要致病菌已對部分常見藥物產(chǎn)生了較強的耐藥性。

3討論

本研究通過對東至縣奶牛乳樣進行致病原的分離鑒定，表明引起東至縣奶牛乳房炎的主要致病菌為金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌，且以金黃色葡萄球菌的感染最為突出。隨后本研究對金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌進行了耐藥性分析，發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌對青霉素、氨芐青霉素、復(fù)方新諾明、四環(huán)素已產(chǎn)生較強的耐藥性，鏈球菌對鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、氨芐青霉素、青霉素、復(fù)方新諾明已產(chǎn)生較強的耐藥性，大腸桿菌對復(fù)方新諾明、氨芐青霉素、紅霉素、青霉素已產(chǎn)生較強的耐藥性。表明青霉素、氨芐青霉素、復(fù)方新諾明等藥物可能為東至縣奶牛乳房炎防治中的常用藥物，奶牛乳房炎主要致病菌對這些藥物已產(chǎn)生了較強的耐藥性，應(yīng)加強重視。建議奶牛場結(jié)合實際情況重新針對性、合理性選擇用藥，盡量交叉用藥，提高治療效果，避免耐藥性的進一步產(chǎn)生。本研究是國內(nèi)首次對東至縣奶牛乳房炎的致病原進行鑒定與分析，為東至縣奶牛乳房炎臨床合理用藥以及綜合防控措施的制定與優(yōu)化提供了寶貴的參考資料。