文/Peter Pfeiffer Roman Klinkner
正確的移液是實(shí)驗(yàn)成功的保障 // 在實(shí)驗(yàn)室工作的每一個(gè)人都會(huì)移液,但你真的會(huì)嗎?或者不是每一個(gè)人都認(rèn)為他會(huì)正確的移液,你可以從本文中得知移液過程中最重要的是什么,如何得到可以重復(fù)再現(xiàn)的移液結(jié)果。
在實(shí)驗(yàn)室中,幾乎沒有一項(xiàng)工作像移液一樣普通了。也許正是因?yàn)槿绱似胀ā⑷绱撕?jiǎn)單而沒有得到人們的關(guān)注吧。但就是這樣一個(gè)最為普通、簡(jiǎn)單工作卻對(duì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果有著至關(guān)重要的影響,而且還隱含著許多“陷阱”。那么在移液時(shí)要注意些什么問題呢?定期標(biāo)定移液器就可以了嗎?你真的會(huì)正確的移液?或者你應(yīng)該如何改進(jìn)、完善移液技術(shù)呢?
本文章著重介紹的是移液器類型方面的基礎(chǔ)知識(shí),以及它們的應(yīng)用和各種移液技術(shù)。
圖1 正確的移液對(duì)獲得準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果和可重復(fù)性的分析結(jié)論有著非常重要的意義
圖2 手動(dòng)空氣正壓式移液器(左),活塞式多功能分液器(中)和電子移液器(右)
玻璃或者塑料制成的一次性移液器適合于移送液體,它們的采購(gòu)成本非常低廉,但不能準(zhǔn)確的測(cè)定移液量,而想精確移液量和移液總量等準(zhǔn)確的定量移液時(shí)需要使用經(jīng)典的玻璃移液器。但玻璃移液器在小容量移液時(shí)的精度也不高,而且小容量移液時(shí)玻璃移液器也顯得有些笨重了。移液總量在1mL以上時(shí)使用玻璃移液器可以得到理想的移液精度。當(dāng)移液總量在微升范圍內(nèi)時(shí),使用活塞式移液器才能滿足精度要求。這種移液器又稱之為馬爾堡移液器、微型或者微量型移液器?;钊揭埔浩饕呀?jīng)成為實(shí)驗(yàn)室中的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量器具了,能夠在微升范圍內(nèi)快捷方便的完成移液任務(wù)。
活塞式移液器最大的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)特點(diǎn)是帶彈簧的可移動(dòng)柱塞。利用柱塞在移液管中的上下移動(dòng),實(shí)驗(yàn)員可以任意的設(shè)置、調(diào)整移液量,因此可以快速、準(zhǔn)確的移送限定容積的液體,通常在所謂的標(biāo)稱容積10%至100%的范圍內(nèi)?;钊揭埔浩鞣譃閮纱箢愋停嚎諝庹龎菏揭埔浩骱突钊苿?dòng)式移液器。
活塞式移液器的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)非常簡(jiǎn)單類似于注射器,依靠活塞的運(yùn)動(dòng)吸取被移送的液體介質(zhì),液體介質(zhì)與活塞端面直接接觸。
在空氣正壓式移液器中,運(yùn)動(dòng)的活塞與被移送的介質(zhì)之間有一段空氣柱,被移送液體介質(zhì)與移液器吸頭相互接觸。在移送水性介質(zhì)、不同液體之間交替移液時(shí),空氣正壓式移液器是首選的移液器。
空氣正壓式移液器是應(yīng)用最為廣泛的移液器。它還有多通道的變型類型,從而方便的微量滴定板中的移液。例如8通道移液器和12通道移液器。
本文所提到的所有移液器以及包含了分液器、移液機(jī)器人、滴定器、移液輔助設(shè)備等通常都?xì)w入“液體處理”技術(shù)領(lǐng)域中的術(shù)語(yǔ)。
圖3 不同的移液技術(shù),正向移液(左)和反向移液(右)
表1 移液時(shí)常見的十種錯(cuò)誤
當(dāng)前市場(chǎng)開發(fā)出來的最新產(chǎn)品是電子移液器。其簡(jiǎn)單的使用操作和多種多樣的使用可能性使其成為實(shí)驗(yàn)室日常工作中的得力助手。它們的最大優(yōu)點(diǎn)是消除了移液器的壓力點(diǎn)誤差源,因?yàn)樗辉傩枰獙?shí)驗(yàn)員手指的感覺了。尤其是大量移液時(shí)它最受歡迎,因?yàn)樗苊饬藢?shí)驗(yàn)員的手部疲勞。許多電子移液器還提供了作為小容量分液器使用的可能性,即連續(xù)多次移送限定容積的液體。
與手動(dòng)活塞式移液器相比較的這些優(yōu)點(diǎn)應(yīng)在購(gòu)置移液器之前就考慮其最大重量、最高采購(gòu)成本和維護(hù)保養(yǎng)成本等問題。
除了前面介紹的注意事項(xiàng)之外,在選擇移液器時(shí)還要注意被移送液體介質(zhì)的性質(zhì)??諝庹龎菏揭埔浩鬟m合于移送水質(zhì)液體。吸頭的選擇則要根據(jù)被移送液體介質(zhì)的物理量和化學(xué)/物理性質(zhì)。密度很高的液體介質(zhì)(例如汞)、粘度很高的液體介質(zhì)(例如蜂蜜)或者蒸發(fā)氣壓很高的液體介質(zhì)(例如乙醇)應(yīng)該用活塞式移液器來移送。
原則上有兩種移液方式:正向移液和反向移液(參見圖3)。兩種方式的根本區(qū)別在于使用第一和第二按壓點(diǎn)的時(shí)間不同。在正向移液時(shí)移液器吸頭完全排空,而反向移液時(shí)移液器吸頭中保留一部分液體。應(yīng)用最多的是正向移液,尤其是水質(zhì)液體。而反向移液最適合于移送高蒸發(fā)壓力或者高粘度液體介質(zhì),在泡沫很多的液體介質(zhì)移液時(shí),反向移液也有著很好的移液效果。
在移液過程中反復(fù)發(fā)生相同的典型錯(cuò)誤、偏差根源參見表1。表1清楚的說明了這些問題是如何產(chǎn)生的,應(yīng)該如何避免它們的發(fā)生。根據(jù)本文介紹的信息,你應(yīng)該能夠避免常見的錯(cuò)誤,從而改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的移液技術(shù)。