于莉 劉中書

（洪雅縣疾控中心 四川 洪雅 620360）

布魯氏菌是革蘭氏陰性小桿菌，易感染牛、羊、豬等家畜。人類與病畜接觸或食用病畜肉、乳及乳制品后，也可引起感染，得布魯氏菌病。布病是由布魯氏菌屬細(xì)菌侵入人、動(dòng)物機(jī)體內(nèi)引起的人畜共患的急性傳染病，嚴(yán)重影響了人的身體健康。我們基層疾控中心實(shí)驗(yàn)室常用虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行分析。

檢測(cè)主要通過(guò)室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)控來(lái)實(shí)施。室內(nèi)質(zhì)控主要包括人員、環(huán)境、儀器設(shè)施、方法和標(biāo)準(zhǔn)等方面來(lái)控制；室間質(zhì)控主要通過(guò)上級(jí)部門質(zhì)控考核來(lái)實(shí)現(xiàn)。

室內(nèi)質(zhì)量控制：（1）人員的要求：檢驗(yàn)人員不僅要有專業(yè)知識(shí)和熟練的技術(shù)，還須通過(guò)相應(yīng)的培訓(xùn)持證上崗。（2）設(shè)施和環(huán)境條件：實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)的設(shè)施以及環(huán)境應(yīng)滿足相關(guān)技術(shù)規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)的要求。（3）設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：所有儀器設(shè)備必須建立檔案，專人管理，并定期對(duì)其進(jìn)行檢定、校準(zhǔn)和維護(hù)；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)須在有資質(zhì)（國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)）的地方購(gòu)買。（4）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)優(yōu)先選擇國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、再使用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)等，確保使用標(biāo)準(zhǔn)是最新有效的版本。（5）實(shí)驗(yàn)耗材對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響非常大，為滿足檢測(cè)的要求，應(yīng)從購(gòu)買、使用、儲(chǔ)存等環(huán)節(jié)都要按規(guī)定加以嚴(yán)格控制。

在滿足以上這些條件后，就可以開(kāi)始進(jìn)行樣品的分析了，樣品分析主要通過(guò)分析前、分析中、分析后三個(gè)環(huán)節(jié)來(lái)實(shí)施，三個(gè)環(huán)節(jié)都是非常重要，相互影響，相互制約，缺一不可的。

一、分析前質(zhì)量控制是最薄弱的環(huán)節(jié)，這一環(huán)節(jié)也是是確保檢驗(yàn)信息正確、有效的先決條件，樣本的采集前要登記病人的姓名、性別、年齡、住址、工作單位、身份證號(hào)碼、電話等基本信息：病人以往的病史，是否有與牲畜及其相關(guān)產(chǎn)品有接觸史，臨床表現(xiàn)怎樣：是否出現(xiàn)連續(xù)幾天甚至幾周持續(xù)發(fā)熱，多汗，乏力，肌肉以及關(guān)節(jié)疼痛等臨床癥狀。樣品采集后待血清完全分離，再進(jìn)行檢驗(yàn)，如特殊情況下不能及時(shí)檢驗(yàn)的樣品，應(yīng)分離血清后放入冰箱4℃保存，切不可冷凍存放。

二、分析中質(zhì)量控制是最重要的環(huán)節(jié)，第一，樣品采集后血清的分離：一般是采集后待血液自然凝固后分離出血清，如要縮短時(shí)間，需將樣品放入37℃的3箱中孵育30分鐘，待血清完全分離出后再檢驗(yàn)，我們做過(guò)一個(gè)比對(duì)，同樣采集40個(gè)病人的血液標(biāo)本，一種方法是樣本采集后用離心機(jī)及時(shí)分離出血清，進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)陽(yáng)性率為36個(gè)，另一種方法是樣本采集后待其自然凝固后分離出血清，進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)陽(yáng)性率為30個(gè)，再把這些陽(yáng)性樣本用試管凝集試驗(yàn)作確認(rèn)，第一種方法的陽(yáng)性率為30個(gè)；第二種方法的陽(yáng)性率為29個(gè)，由此看來(lái)，第一種方法出現(xiàn)假陽(yáng)性的比例較大，大概是20%左右，后來(lái)尋找原因，是因?yàn)檠逦闯浞址蛛x，里面含有的纖維蛋白絲，與虎紅平板抗原凝集引起假凝集現(xiàn)象，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽(yáng)性。所以這些細(xì)小的環(huán)節(jié)都是影響實(shí)驗(yàn)的成敗的關(guān)鍵。第二，檢驗(yàn)中的注意事項(xiàng)：（1）虎紅平板凝集試驗(yàn)：①必須是清潔的脫脂玻片，因?yàn)槿绻Ｆ晃廴玖藭?huì)影響分析結(jié)果；②經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的0.1ml吸管或微量加樣器，這樣加樣才準(zhǔn)確；③充分混勻，混勻不混勻也會(huì)影響分析結(jié)果；④在規(guī)定的時(shí)間5min內(nèi)判定結(jié)果，超出時(shí)間判定結(jié)果可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性，虎紅平板凝集試驗(yàn)主要是定性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果可分為陰性、陽(yáng)性兩類。（2）試管凝集試驗(yàn)：注意事項(xiàng)：①使用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的吸管，被檢血清的稀釋要求準(zhǔn)確。②同時(shí)做陰性血清對(duì)照和陽(yáng)性血清對(duì)照。③準(zhǔn)確制備判定比濁管，特別是50%清亮度(＋＋)對(duì)判定結(jié)果關(guān)系較大。④充分振蕩后放置37℃溫箱中20～22小時(shí)，取出后放室溫2小時(shí)，再以比濁管為標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。確定每份血清滴度是以出現(xiàn)“十十”及以上的凝集現(xiàn)象的最高血清稀釋度。血清凝集價(jià)在1∶50時(shí)，該血清樣品疑似反應(yīng)時(shí)，經(jīng)3～4周后須再做一次檢查，仍為疑似反應(yīng)者判為陽(yáng)性，凝集價(jià)在1∶50以下則為陰性反應(yīng)。

三、分析后的質(zhì)量控制是最容易忽視的環(huán)節(jié)，認(rèn)為樣品分析完了，也有分析結(jié)果了就沒(méi)有什么用了，可以隨意丟棄了，分析后的血液樣品須留樣一周，以待結(jié)果有疑問(wèn)時(shí)復(fù)查。留樣一周后，仍不能隨意丟棄，因其仍具有感染性，須經(jīng)過(guò)高壓滅菌器滅菌后，打包后交接給廢棄物管理接收員，統(tǒng)一移交專業(yè)公司處理。

實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制主要通過(guò)上級(jí)部門的質(zhì)量控制考核來(lái)實(shí)現(xiàn)，每年參加上級(jí)部門舉辦的布魯氏菌病監(jiān)測(cè)點(diǎn)血清學(xué)質(zhì)量控制考核，并且成績(jī)達(dá)到合格。

只有把握好布病檢測(cè)的每一個(gè)環(huán)節(jié)，保證結(jié)果質(zhì)量，才能更好地完成布病監(jiān)測(cè)工作。其發(fā)病又是一個(gè)比較復(fù)雜的過(guò)程，其臨床表現(xiàn)多種多樣，很難用其中某一臨床癥狀來(lái)確診，對(duì)于布病病人的診斷應(yīng)綜合考慮，通過(guò)病人的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果、臨床癥狀以及實(shí)驗(yàn)室分析后結(jié)果來(lái)判定。