刁全平，郭 華，羅維巍，李鐵純，回瑞華，侯冬巖

(鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 鞍山 114007)

圖1 異丙嗪分子結(jié)構(gòu)式

異丙嗪(promethazine)，又名非那根、抗胺蕁，是吩噻嗪類衍生物，屬抗組胺藥，具有鎮(zhèn)吐、抗暈眩及鎮(zhèn)靜催眠等作用[1-3].異丙嗪為手性分子，在藥物中以外消旋體形式存在(分子結(jié)構(gòu)如圖1所示).由于藥物對映體在藥理、毒理和臨床療效等方面存在較大差異[4-8]，目前關(guān)于異丙嗪R、S構(gòu)型對映體不同的藥效、毒理研究尚未見文獻報道，因此建立異丙嗪對映異構(gòu)體的手性拆分方法尤為重要.異丙嗪的手性拆分通常采用高效液相色譜法[9]和毛細管電泳法[10]，采用卵類粘蛋白手性固定相拆分異丙嗪對映體尚未見文獻報道.卵類粘蛋白是一類新型的蛋白質(zhì)色譜填料，具有眾多手性識別位點和較寬的對映選擇范圍[11，12]，已被應(yīng)用于一些藥物的手性拆分.本文建立了用卵類粘蛋白柱拆分異丙嗪對映體的高效液相色譜方法,考察了有機改性劑含量、流動相pH值、緩沖鹽濃度、流速等因素對異丙嗪對映體分離的影響,優(yōu)化了最佳分離條件.與其它分離方法比較，該方法分析時間短、重現(xiàn)性好、分析結(jié)果可靠，為異丙嗪對映異構(gòu)體的藥理、毒理研究提供一定的支持.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters 1525高效液相色譜儀；waters 2996型二極管陣列檢測器；Agilent Ultron ES-OVM(5 μm,150 mm×4.6 mm)手性柱；PHS-3C精密數(shù)顯酸度計(上海天達儀器有限公司)；電子天平(AL 204梅特勒-托利多公司(上海)有限公司).

鹽酸異丙嗪對照品購自上海江萊生物科技有限公司，純度98%，批號：100422；甲醇為色譜純，天津化學(xué)試劑有限公司；磷酸二氫鉀、磷酸和氫氧化鉀等試劑為分析純，天津化學(xué)試劑有限公司；水為二次蒸餾水，實驗室自制.

1.2 實驗方法

精密稱取鹽酸異丙嗪對照品，用甲醇溶劑配制濃度為10 μg/mL的測試溶液.色譜條件：甲醇-磷酸二氫鉀(0.01 mol/L)=6∶94(V/V)(pH=2.96)為流動相，色譜柱為Agilent Ultron ES-OVM(5 μm,150 mm×4.6 mm)手性柱，流速為0.7 mL/min，檢測波長為250 nm，進樣量10 μL，HPLC進行測定.

2 結(jié)果與討論

2.1 有機改性劑含量的選擇

選擇甲醇為有機改性劑，以磷酸二氫鉀(0.01 mol/L)為緩沖溶液，流動相pH值為2.96，流速為0.7 mL/min，考察甲醇含量對拆分的影響.隨著有機改性劑甲醇含量的增加，樣品在固定相上的保留效應(yīng)減弱，降低了固定相和手性藥物的分子作用，拆分效果降低，分離度Rs和選擇性系數(shù)α都發(fā)生變化，結(jié)果如圖2所示.根據(jù)最佳分離效果，選擇甲醇-磷酸二氫鉀(0.01 mol/L)=6∶94(V/V)為流動相.

2.2 流動相pH值的選擇

以甲醇-磷酸二氫鉀(0.01 mol/L)=6∶94(V/V)為流動相，用磷酸和氫氧化鉀調(diào)節(jié)磷酸二氫鉀溶液的pH值，流速為0.7 mL/min，發(fā)現(xiàn)流動相pH值在2.96～3.82范圍內(nèi)時，樣品能夠得到拆分，結(jié)果如圖3所示.流動相的pH值能夠影響固定相和手性藥物的分子狀態(tài).異丙嗪在酸性條件下為正離子狀態(tài)，能夠與卵類粘蛋白發(fā)生較強的作用力，拆分效果較好.但如果流動相的pH值過低，會破壞手性固定相，對色譜柱產(chǎn)生不可修復(fù)的損傷，因此選擇流動相的pH=2.96.

圖2 甲醇含量對分離度Rs(▲---▲)和單旋體容量因子k1′(◆---◆)的影響 圖3 pH值對分離度Rs(▲---▲)和單旋體容量因子k1′(◆---◆)的影響

2.3 緩沖鹽濃度的選擇

在甲醇-磷酸二氫鉀溶液=6∶94(V/V)為流動相、pH值為2.96、流速為0.7 mL/min的色譜條件下，考察不同濃度的磷酸二氫鉀緩沖溶液對異丙嗪對映體拆分的影響，結(jié)果如圖4所示.當緩沖溶液的pH值不變，緩沖鹽的濃度會影響固定相的離子效應(yīng)，影響手性固定相的手性拆分能力.當使用0.01 mol/L的磷酸二氫鉀作緩沖溶液時，異丙嗪的手性拆分效果較好.

2.4 流速的選擇

以甲醇-磷酸二氫鉀(0.01 mol/L)=6∶94(V/V)(pH=2.96)為流動相，考察不同流速對拆分的影響，結(jié)果如圖5所示.當流動相流速為0.7 mL/min時有最佳的分離效果.

圖4 緩沖鹽濃度對分離度Rs(▲---▲)和單旋體容量因子k1′ (◆---◆)的影響 圖5 流速對分離度Rs(▲---▲)和單旋體容量因子k1′ (◆---◆)的影響

2.5 異丙嗪手性拆分色譜圖

圖6 鹽酸異丙嗪手性拆分色譜圖

按照步驟2.1～2.4所確定的實驗條件對異丙嗪對映體進行手性拆分，結(jié)果如圖6，Rs=1.417.

3 結(jié)論

異丙嗪分子含有吩噻嗪、胺基、甲基等基團，能與卵類粘蛋白手性固定相的胺基、羰基、羥基等基團發(fā)生三點作用而被拆分.有機改性劑的含量影響了樣品在固定相上的保留，合適的比例對手性拆分的效果非常重要.流動相pH值影響固定相和樣品分子的存在形態(tài)和基團特性，在拆分過程中需要選擇合適的流動相pH值.本文建立了采用卵類粘蛋白手性拆分異丙嗪對映異構(gòu)體的方法，可以用于異丙嗪光學(xué)異構(gòu)體藥理、毒理等臨床研究，還可以對其藥物代謝等生理作用的研究提供一定支持.卵類粘蛋白官能團種類多，包括多種極性基團、非極性基團，并且具有立體結(jié)構(gòu)豐富、能夠與手性藥物等發(fā)生多種包合和絡(luò)合等作用，手性識別位點多，對手性藥物具有強大的拆分能力，在手性拆分領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景.