孫 燕，李成忠，左偉勇

(江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院/江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點實驗室，泰州225300)

牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)是芍藥科芍藥屬落葉灌木，原產(chǎn)我國西北地區(qū)，現(xiàn)廣泛栽培于河南、山東、安徽、江蘇等地[1]。牡丹籽油是由牡丹籽提取的木本油料，營養(yǎng)豐富而獨(dú)特[2]，并具有醫(yī)療保健作用，其多項指標(biāo)優(yōu)于被稱為“液體黃金”的橄欖油，是植物油中的珍品[3]。牡丹籽油中不飽和脂肪酸含量達(dá)90%以上，其中多不飽和脂肪酸——亞麻酸(屬ω-3系列)含量超過40%，是橄欖油的140倍[4]，并且牡丹籽油不易氧化沉積在人體血管壁、心臟冠狀動脈等部位。因此，牡丹籽油在醫(yī)學(xué)和營養(yǎng)上具有重要作用[5]。2011年，衛(wèi)生部發(fā)布了《關(guān)于批準(zhǔn)元寶楓籽油和牡丹籽油作為新資源食品的公告》，標(biāo)志著牡丹籽油正式成為一種新型油料。

目前，有關(guān)牡丹籽油的研究多集中在提取工藝[6-7]、成分分析[8-9]以及抗氧化活性[10]等方面，有關(guān)牡丹籽油對免疫功能調(diào)節(jié)作用的深入研究較少。本研究從小鼠血清一氧化氮及一氧化氮合成酶水平、細(xì)胞因子水平、腸道sIgA水平變化的角度，研究牡丹籽油對小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用與作用途徑，以期闡明牡丹籽油對改善小鼠健康水平的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗鼠為21日齡ICR清潔級雄性小鼠，體重約13g，用顆粒飼料喂養(yǎng)，購于揚(yáng)州大學(xué)實驗動物中心[動物生產(chǎn)許可證號：SYXK(蘇)2014000002]。

牡丹籽油、牡丹籽油陽性制品均由江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院園林科技系制備；白介素-6(IL-6)、白介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)放射免疫試劑盒購于北京北方生物技術(shù)研究所；分泌型免疫球蛋白(sIgA)放射免疫試劑盒購于中國原子能科學(xué)研究所。一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 動物試驗及樣品制備

小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即對照組(CK)、低劑量組(I組)、中劑量組(II組)、高劑量組(III組)和陽性對照組(IV組)，每組10只，基礎(chǔ)日糧預(yù)飼3d后進(jìn)行試驗。對照組每天灌胃生理鹽水， I組、II組、III組每天分別灌胃牡丹籽油0.25mL、0.5 mL、1 mL，IV組每天灌胃牡丹籽油復(fù)合物0.5 mL，連續(xù)灌胃20d，于第21天，用摘除眼球取血法取血，3 000rmin離心15min，取血清，-20℃保存?zhèn)溆?；處死各組小鼠，取脾臟并稱重，然后用生理鹽水1∶10稀釋并勻漿，5 000rmin離心15min后取上清液，-20℃保存?zhèn)溆?；取整段小腸，清洗腸內(nèi)容物后，刮取腸黏膜，用生理鹽水1∶10稀釋后勻漿，6 000rmin離心30min后取上清液，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 檢測指標(biāo)

1.2.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行One-Way ANOVA統(tǒng)計學(xué)檢驗，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠的脾臟重與相對脾重比較

如表1所示，與CK相比，I、II、III、IV組處理均提高了小鼠的脾臟重量和相對脾臟重量，其中III組顯著高于CK。

表1 各處理組小鼠脾重與相對脾重(n=10)

注：不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下同

2.2 小鼠血清NO、NOS水平

如表2所示，與CK相比，各組血清NO及NOS水平均有所升高，其中II組血清NO水平顯著提高。

表2 不同處理組小鼠血清NO、NOS水平(n=10)

2.3 小鼠脾臟IL-2、IL-6、TNF-α水平

如表3所示，與CK相比，II組脾臟IL-2水平顯著升高，I組脾臟TNF-α水平顯著降低；各組脾臟IL-6水平均較CK升高，但差異不顯著。

表3 不同處理組小鼠脾臟IL-2、IL-6、TNF-α水平(n=10)

2.4 小鼠腸黏膜sIgA水平

從表4 可以看出，與CK相比，各組腸道黏膜sIgA水平均提高，其中II組顯著升高，表明牡丹籽油能提高小鼠腸黏膜sIgA水平，影響小鼠腸道免疫功能。

表4 不同處理組小鼠腸黏膜sIgA水平(n=10)

3 討論

研究表明，牡丹籽含油率達(dá)22%以上，牡丹籽油中不飽和脂肪酸含量達(dá)92%，其中亞麻酸含量達(dá) 41%，營養(yǎng)價值很高[11]。亞麻酸參與細(xì)胞結(jié)構(gòu)組成以及物質(zhì)代謝，引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及某些代謝產(chǎn)物的變化，進(jìn)而對機(jī)體的免疫功能進(jìn)行調(diào)控，影響多種免疫細(xì)胞的功能[12]。血清NO濃度適當(dāng)?shù)脑黾佑欣谔岣邉游锩庖咚絒13]。本試驗發(fā)現(xiàn)，隨著牡丹油添加量的增加，血清NO和NOS水平都有一定提高，說明牡丹油可提高小鼠的免疫水平。

白細(xì)胞介素作為細(xì)胞因子的一種，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[14]。IL-2是T細(xì)胞生長因子，具有激活免疫效應(yīng)細(xì)胞和產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)因子的作用，能有效地清除腫瘤細(xì)胞和病毒、細(xì)菌感染的細(xì)胞[15]。IL-6是一種輔助性多功能細(xì)胞因子，能調(diào)節(jié)體液和細(xì)胞免疫，在炎癥和組織損傷中發(fā)揮重要作用[16]。本試驗觀察到小鼠在服用牡丹油籽后，脾臟IL-2水平顯著調(diào)高，IL-6水平升高，這在一定程度上提示牡丹籽油參與啟動相關(guān)淋巴免疫系統(tǒng)，促進(jìn)細(xì)胞因子IL-2、IL-6的分泌。研究證明，營養(yǎng)物質(zhì)包括植物中的生物活性成分等對機(jī)體細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)具有重要影響[14]。由此推斷，牡丹籽油可作為生物活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞因子的分泌，提高機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能。

TNF-α是一種具有廣譜生理和病理效應(yīng)的細(xì)胞因子，主要由單核和巨噬細(xì)胞分泌，在一些消化道疾病如炎癥性腸病的發(fā)生中起著重要作用。有研究表明，TNF-α具有中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的趨化作用，能夠促進(jìn)抗原呈遞細(xì)胞(樹突狀細(xì)胞)的成熟，從而加強(qiáng)抗原的呈遞和T細(xì)胞的激活，還可以加強(qiáng)吞噬細(xì)胞的殺菌作用[17]。本試驗中，試驗組脾臟TNF-α水平顯著降低，提示牡丹籽油能減少炎性因子的分泌。

sIgA是胃腸道和黏膜表面主要的免疫球蛋白，對消化道黏膜防御起著重要作用，是防御病菌在腸道黏膜黏附和定植的第一道防線[18-19]。sIgA與胃腸消化酶一起抵抗食物中的抗原，維持機(jī)體的穩(wěn)態(tài)，sIgA分泌到腸腔與黏液混合，包被在上皮細(xì)胞表面，能直接與微生物或食物抗原形成免疫復(fù)合物，以利于巨噬細(xì)胞吞噬和清除，所以此物質(zhì)水平的提高對機(jī)體抵抗外界抗原侵襲具有非常重要的意義[20]。本試驗表明，牡丹籽油能顯著提高腸道黏膜sIgA水平，提示牡丹籽油可能通過促進(jìn)腸道sIgA分泌，增強(qiáng)腸道免疫功能。

綜上，牡丹籽油為生物活性物質(zhì)，可能是提高小鼠免疫功能的主要原因，在提高動物免疫力上發(fā)揮著重要作用。因此，將牡丹籽油應(yīng)用于動物生產(chǎn)中，在提高動物生產(chǎn)性能及機(jī)體免疫力方面具有一定意義。