鄭秀娥 李晉 柴謙 張俊國

1 山東省食品藥品監(jiān)督管理局審評認(rèn)證中心 （（山東 濟(jì)南 250014）

2 山東省疾病預(yù)防控制中心 （山東 濟(jì)南 250014）

3 山東大學(xué)附屬醫(yī)院山東省立醫(yī)院檢驗科 （山東 濟(jì)南 250000）

內(nèi)容提要： 目的：對OLYMPUS-AU2700生化檢測系統(tǒng)進(jìn)行性能驗證。方法：對AST等9個生化項目的精密度、線性范圍和攜帶污染率進(jìn)行驗證，并與OLYMPUS-AU5400生化檢測系統(tǒng)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：OLYMPUS-AU2700生化檢測系統(tǒng)AST、CK、GLU、CREA、UA、CA、AMY、Mg和BNN 9個項目的精密度驗證均合格；各項目在測定范圍內(nèi)都表現(xiàn)出較好的線性關(guān)系（斜率0.97～1.03，r≥0.95）；AU2700生化分析儀內(nèi)外圈攜帶污染率驗證合格；兩種儀器相關(guān)性較好（r2≥0.95，斜率0.9～1.1）。結(jié)論：OLYMPUS-AU2700生化檢測系統(tǒng)9項生化指標(biāo)的精密度、線性、攜帶污染率和儀器相關(guān)性這四個方面基本滿足臨床生化檢測的實驗要求。

隨著醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)的快速發(fā)展全自動生化分析儀成為臨床生化檢驗的主要儀器之一儀器性能的優(yōu)劣直接關(guān)系檢驗質(zhì)量。為配合實驗室申請ISO15189質(zhì)量體系，同時也為了驗證2009年購入OLYMPUS-AU2700全自動生化分析儀的性能，本實驗室根據(jù)《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的專用要求》（ISO15189）和美國病理家學(xué)會（CAP）要求[1]，參考相關(guān)文獻(xiàn)并結(jié)合實際工作，對OLYMPUS-AU2700全自動生化分析儀的精密度、線性范圍、攜帶污染率、儀器相關(guān)性四個主要性能進(jìn)行了驗證實驗。

1.材料與方法

1.1 一般材料

樣品來源：本院就診患者或正常體檢者無溶血、無黃疸、無脂血的新鮮血漿。

儀器：OLYMPUS-AU2700全自動生化分析儀是分立式生化分析儀，采用分光比色法、免疫比濁、電極法測定，可檢測生化、免疫、藥物檢測、毒品檢測、電解質(zhì)、同工酶等

項目，使用樣品類型為血清、血漿、尿、體液（包括腦脊液、腹水）等。儀器運(yùn)用凹面光柵分光，集束式點光源（鹵素?zé)簦?，?shù)字光纖傳輸，確保光信號無衰減成電信號。儀器使用可終身使用的硬質(zhì)方形玻璃反應(yīng)杯（光徑為6mm/容量為750μL)采用恒溫液循環(huán)加熱方式（37?C），進(jìn)樣方式為側(cè)軌道樣品架進(jìn)樣方式，10個樣品位/架，攪拌方式為多頭機(jī)械攪拌，反應(yīng)杯自動清洗。

試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品：均為奧林巴斯配套產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 精密度評價

根據(jù)EP5-A2[2]的文件進(jìn)行實驗前質(zhì)量控制，根據(jù)EP15-A2[3]的文件進(jìn)行操作和計算。取低值及高值血漿，連續(xù)測定5d，每天測定3次，兩次之間的時間間隔不少于2h。將測量數(shù)據(jù)錄入精密度驗證表格，自動計算批內(nèi)精密度CV%和批間精密度CV%，均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、和變異系數(shù)百分比、實驗室總誤差等。數(shù)據(jù)分析與結(jié)果判斷：批內(nèi)和批間試驗的精密度CV%均應(yīng)小于該項目方法學(xué)或醫(yī)學(xué)上的最大允許CV%。一般應(yīng)該滿足儀器廠家說明書上儀器性能的精密度要求，如果不能滿足，按以下情況來作為判斷標(biāo)準(zhǔn)：①如果CLIA’88上有相應(yīng)項目的可接受范圍（TEa），則批內(nèi)試驗的CV%不大于1/4TEa，批間試驗的CV%不大于1/3TEa；②如果CLIA’88或其他資料上沒有具體的要求，則按照室間質(zhì)評相應(yīng)項目的可接受范圍（TEa），批內(nèi)試驗的CV%不大于1/4TEa，批間試驗的CV%不大于1/3TEa；③如果上述條件均不滿足，則該項目的最大允許CV%由技術(shù)主管根據(jù)實驗室情況而定。

1.2.2 線性范圍評價

根據(jù)EP6-A[4]文件進(jìn)行操作和計算。選取一份接近預(yù)期上限（H）和一份接近預(yù)期下限（L）的混合血漿測定3次后取均值定為預(yù)期值，并按5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的關(guān)系各自配制混合血漿，形成系列評價樣品。每個稀釋度由高到低、由低到高、再由高到底重復(fù)測定3次，再由高到低重復(fù)測定3次，計算均值。將6對實測值（Y軸）與預(yù)期值（X軸）進(jìn)行直線回歸，計算y=ax+b，驗證線性范圍。以a值在0.97～1.03范圍內(nèi)、r≥0.95為判定標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 攜帶污染率評價

根據(jù)ICSH的《血細(xì)胞分析儀評價指南》[5]。選取一份高濃度標(biāo)本（H），以及一份低濃度的標(biāo)本（L），按國際血液學(xué)

標(biāo)準(zhǔn)化委員會制定的程序 ，將高值樣本連續(xù)測定3次（H1、H2、H3），緊接著連續(xù)測定低值樣本3次（L1、L2、L3），攜帶污染率結(jié)果為[（L1～L3）/（H3-L3）]×100%。結(jié)果＜2%為合格。

1.2.4 儀器相關(guān)性評價

根據(jù)EP9-A2[6]的標(biāo)本要求和EP-15A2[3]對能力比對與偏差評估的相關(guān)要求，選取新鮮血清（包括正常和異常，常規(guī)項目24份標(biāo)本），分別在兩臺生化分析儀上平行檢測，每天做8個標(biāo)本，測定一次，共測3d，舍去離群值得到20組數(shù)據(jù)。以AU5400為參考儀器（A），設(shè)定測定結(jié)果為Y，以AU2700（B）為比對儀器，設(shè)定測定結(jié)果為X，進(jìn)行相關(guān)性分析。得到回歸方程Y=bX+a及相關(guān)系數(shù)R的平方，判斷標(biāo)準(zhǔn)為R2≥0.95，b在0.9～1.1。

表1. 精密度驗證結(jié)果

表2. 線性范圍評估

2.結(jié)果

2.1 精密度的驗證結(jié)果

所有檢測項目的批內(nèi)精密度均小于廠家聲明的批內(nèi)精密度或小于CLIA’88 1/4CV；AST低值、CK、GLU高值、UA、CA、AMY、MG高值、BUN均小于廠家聲明的總精密度；AST高值、GLU低值、MG低值、CREA批間精密度均小于CLIA’88 1/3CV。AU2700生化分析儀檢測系統(tǒng)的精密度均符合要求（見表1）。

2.2 線性范圍的驗證結(jié)果

使用6種濃度標(biāo)本進(jìn)行9個項目的檢測。將6對實測值（Y軸）與預(yù)期值（X軸）進(jìn)行直線回歸，計算y=ax+b。9個項目的檢測值均符合a值在0.97～1.03范圍內(nèi)、r≥0.95的判定標(biāo)準(zhǔn)（見表2）。

2.3 攜帶污染率的驗證結(jié)果

AMY在AU2700生化分析儀外圈檢測，UA在內(nèi)圈檢測。通過驗證AMY和UA的攜帶污染率來評價AU2700的攜帶污染率。AU2700生化分析儀的內(nèi)圈和外圈攜帶污染率分別是0.0%、-0.05%，小于2.0%（見表3），根據(jù)此原則判斷AU2700生化分析儀進(jìn)行項目檢測時，結(jié)果完全不會受其他標(biāo)本的干擾，攜帶污染試驗合格。

表4. 兩種生化檢測系統(tǒng)的相關(guān)性分析

表3. 攜帶污染率驗證結(jié)果

2.4 儀器相關(guān)性評價結(jié)果

通過對OLYMPUS-AU5400和AU2700生化檢測系統(tǒng)的相關(guān)性比較發(fā)現(xiàn)，AST等9個檢測項目的相關(guān)系數(shù)R2均≥0.95，a均在0.9～1.1（見表4），一致性較好。

3.討論

檢測系統(tǒng)的性能驗證是臨床實驗室質(zhì)量管理的重要內(nèi)容。按照ISO15189醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可準(zhǔn)則的要求，臨床實驗室需要定期對檢測系統(tǒng)的性能進(jìn)行驗證，以確保臨床檢測結(jié)果的質(zhì)量。OLYMPUS-AU2700于2009年在本科室投入使用，已運(yùn)行4年，需要對其性能進(jìn)行評價。

精密度評價實驗的主要目的是評價單個儀器所用的方法以及儀器的精密度。它是醫(yī)學(xué)檢驗中保證測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠的重要指標(biāo)，代表隨機(jī)誤差的大小，是對同一標(biāo)本進(jìn)行多次重復(fù)側(cè)定時測定值的一致程度，是進(jìn)行其他方法學(xué)驗證實驗的前提。本次評價使用低值和高值兩個濃度新鮮血漿，每天兩個濃度各分析1批次，批次中重復(fù)測定3次，連續(xù)測定5d。測量結(jié)果表明AU-2700生化檢測系統(tǒng)精密度均能滿足臨床要求。

線性是反映方法學(xué)性能評價的重要指標(biāo)之一，線性實驗有助于評價偏倚大小。根據(jù)EP6-A[4]文件進(jìn)行操作和計算，AU-2700 生化檢測系統(tǒng)的線性范圍驗證均符合要求。

攜帶污染率是儀器性能驗證不可缺少的一部分，通過評價AMY和UA的攜帶污染率來反映AU-2700攜帶污染情況。AMY和UA攜帶污染率均驗證合格，因此判斷AU2700生化分析儀進(jìn)行項目檢測時，結(jié)果完全不會受其他標(biāo)本的干擾，攜帶污染試驗合格。

儀器相關(guān)性主要用于評價項目的準(zhǔn)確度，特別是不參加室間質(zhì)評或無室間質(zhì)評項目的準(zhǔn)確度評價或驗證。通過與每年參加衛(wèi)生部和山東省室間質(zhì)評的AU-5400比對，AU-2700生化檢測系統(tǒng)與AU-5400生化檢測系統(tǒng)具有較好的相關(guān)性。說明AU-2700生化檢測系統(tǒng)的準(zhǔn)確度較好。

通過本次性能驗證結(jié)果表明，AU-2700生化檢測系統(tǒng)性能較好，運(yùn)行穩(wěn)定，基本達(dá)到臨床實驗室要求，能滿足臨床檢測需要。