文/本刊記者 郭瀟雅

NGS panel技術(shù)提升了學(xué)科在遺傳代謝性肝病方面的診斷識(shí)別能力，也為患者得到及時(shí)診治提供了新的手段。

17歲的小張因青春期第二性征不發(fā)育，生長(zhǎng)遲滯，身材矮小，多年來(lái)輾轉(zhuǎn)多家醫(yī)院未得到診治。在陸軍軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“西南醫(yī)院”），小張被確診為慢性乙肝。在一次復(fù)診時(shí)，西南醫(yī)院感染病科門診醫(yī)師敏銳地發(fā)現(xiàn)小張存在肝大、脂肪肝、高尿酸血癥、血糖偏低、肝臟多發(fā)占位等伴隨癥狀和體征，通過(guò)完善的影像學(xué)檢查、肝組織病理、基因測(cè)序等檢查，明確了患者肝細(xì)胞內(nèi)大量糖原沉積，確診為肝糖原累積?。℅SD）。

GSD為單基因突變所致的遺傳性肝病，有9個(gè)致病基因7個(gè)亞型，早期遺傳篩查確定亞型至關(guān)重要?；驒z測(cè)對(duì)于遺傳代謝性肝病的快速篩查和亞型識(shí)別具有優(yōu)勢(shì)，但由于涉及的基因數(shù)量多且存在較高的遺傳異質(zhì)性和表型異質(zhì)性，遺傳診斷極具挑戰(zhàn)性。

為此，西南醫(yī)院感染病科采用NGS panel檢測(cè)新技術(shù)，發(fā)現(xiàn)小張G6PC基因外顯子5號(hào)上存在經(jīng)典的c.G648T(p.L216L, NM_000151)純合變異，將表型明確為GSD Ia亞型。隨后，通過(guò)口服“生玉米淀粉”這一唯一有效的精準(zhǔn)治療，使小張的病情在一年內(nèi)得到極大改善，身體開(kāi)始生長(zhǎng)發(fā)育，一年內(nèi)長(zhǎng)高17cm，第二性征也開(kāi)始顯現(xiàn)。西南醫(yī)院感染病科門診醫(yī)師告訴記者，該案例參加中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟病學(xué)分會(huì)舉辦的全國(guó)肝病疑難與經(jīng)典病例巡展獲得了總冠軍。

NGS panel是一套基于高通量測(cè)序的遺傳代謝性肝病精準(zhǔn)檢測(cè)新技術(shù)，相關(guān)成果發(fā)表SCI文章2篇。南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院教授徐湘民認(rèn)為，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，NGS突變檢測(cè)技術(shù)可顯著提高疾病的檢出率，具有明顯的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。

西南醫(yī)院感染病科教授鄧國(guó)宏表示，遺傳代謝性肝病是一類由于遺傳性酶缺陷引起的肝臟代謝障礙性疾病。它的種類繁多，就單一病種而言，發(fā)病率并不高，但總體發(fā)病率卻不容忽視。代謝性肝病臨床表現(xiàn)缺乏特異性，使得臨床表現(xiàn)更加復(fù)雜，診斷較為困難，容易造成漏診和誤診。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，30%以上的遺傳代謝性疾病要經(jīng)過(guò)5～10位醫(yī)生的診治；48.3%的患者被誤診為其他疾病，誤診時(shí)間長(zhǎng)達(dá)5年或更長(zhǎng)。因此，如何快速、精準(zhǔn)識(shí)別和分型是遺傳代謝性肝病的重要研究?jī)?nèi)容。

43個(gè)

NGS panel包含了43個(gè)明確的致病基因、覆蓋目標(biāo)基因的703個(gè)外顯子區(qū)共計(jì)116.8kb靶區(qū)域。

在鄧國(guó)宏的帶領(lǐng)下，科研團(tuán)隊(duì)歷時(shí)兩年，克服遺傳代謝性肝病亞型各異、基因變異廣泛、復(fù)雜性高、臨床解讀困難等技術(shù)障礙，搭建了高通量測(cè)序平臺(tái)、最佳測(cè)序策略以及生物信息學(xué)自主分析平臺(tái)。在此基礎(chǔ)上，研發(fā)建立了一套基于高通量測(cè)序的NGS panel遺傳代謝性肝病精準(zhǔn)檢測(cè)新技術(shù)。同時(shí)，科研團(tuán)隊(duì)還建立了一套基于高通量測(cè)序的全外顯子組測(cè)序遺傳代謝性肝病精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)（WES），作為NGS panel技術(shù)的補(bǔ)充。

據(jù)介紹，NGS panel包含了43個(gè)明確的致病基因、覆蓋目標(biāo)基因的703個(gè)外顯子區(qū)共計(jì)116.8kb靶區(qū)域，可對(duì)包括糖原儲(chǔ)積病、遺傳性高膽紅素血癥、卟啉病、戈謝病等在內(nèi)的20個(gè)病種、41個(gè)亞型進(jìn)行精準(zhǔn)識(shí)別和分型。與傳統(tǒng)的Sanger測(cè)序比較，NGS panel技術(shù)的準(zhǔn)確性為100%，并且操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短，避免了Sanger測(cè)序“一次只能測(cè)單個(gè)基因的單個(gè)片段”帶來(lái)的繁重工作量和經(jīng)濟(jì)成本。

通過(guò)NGS panel技術(shù)，已有90名患者接受了檢測(cè)，被查出先天性假性膽堿酯酶缺乏癥、Gilbert綜合征、Crigler-Najjar綜合征II型等疾病。同時(shí)，NGS panel技術(shù)還協(xié)助消化科、神經(jīng)內(nèi)科及部分外院科室診斷疑難罕見(jiàn)病例82例，并進(jìn)行疾病表型精細(xì)分型。

目前，西南醫(yī)院感染病科向社會(huì)廣泛征集病例，將為疑似患者提供基因檢測(cè)診斷和綠色就診通道，同時(shí)，為確診患者家庭成員提供檢測(cè)優(yōu)惠和免費(fèi)遺傳咨詢，實(shí)現(xiàn)對(duì)遺傳代謝性肝病的早期識(shí)別、早期干預(yù)。