徐繼輝，楊建華，屈少彬*

（深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院，廣東 深圳 518112）

原發(fā)性痛經(jīng)( primary dysmenorrhea，PD)是婦女月經(jīng)期間或經(jīng)行前后，出現(xiàn)下腹部疼痛或痛引腰骶的一類疾病，下腹痛多表現(xiàn)為痙攣性，可同時(shí)伴有頭暈惡心等癥狀，經(jīng)完善檢查未發(fā)現(xiàn)相關(guān)盆腔器質(zhì)性病變，有稱“經(jīng)行腹痛”[1]。醫(yī)學(xué)科技和研究方法的進(jìn)步，推動(dòng)人們對(duì)發(fā)病機(jī)制和防治機(jī)理進(jìn)一步探尋，本文就近十年來中藥干預(yù)原發(fā)性痛經(jīng)鼠類實(shí)驗(yàn)的相關(guān)研究進(jìn)展作一綜述。

1 中藥干預(yù)前后原發(fā)性痛經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀測(cè)指標(biāo)研究

1.1 扭體反應(yīng)

觀察鼠類的扭體反應(yīng)包括對(duì)扭體次數(shù)（扭體次數(shù)與疼痛程度成正相關(guān)）、扭體潛伏期（扭體潛伏期與疼痛程度成負(fù)相關(guān)）是鎮(zhèn)痛試驗(yàn)研究的常用指標(biāo)，段英丹等采用腹腔注射(0.5 ml/只)縮宮素誘導(dǎo)的原發(fā)性痛經(jīng)小鼠模型，觀察記錄小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)和扭體潛伏期，發(fā)現(xiàn)麻黃堿與偽麻黃堿能緩解原發(fā)性痛經(jīng)模型小鼠的疼痛反應(yīng)并呈劑量依賴性[2]。

1.2 離體子宮平滑肌收縮情況

楊新蕊等研究已在臨床取得良好效果的自擬方佛香飲對(duì)痛經(jīng)的鎮(zhèn)痛作用，發(fā)現(xiàn)佛香飲不同劑量組均可降低實(shí)驗(yàn)鼠離體子宮收縮力，較高劑量組子宮平滑肌收縮頻率大大小于模型組、收縮幅度高于模型組[3]。

1.3 觀測(cè)生化數(shù)據(jù)

從多個(gè)實(shí)驗(yàn)室生化指標(biāo)總結(jié)：（1）血清環(huán)磷酸腺苷、環(huán)氧合酶2、鈣離子：段英丹等發(fā)現(xiàn)麻黃堿與偽麻黃堿不但能夠抑制PD模型小鼠扭體反應(yīng)，還能增加血清環(huán)磷酸腺苷(cAMP)、降低鈣離子(Ca2+)的含量，并使環(huán)氧合酶2（COX-2）蛋白的表達(dá)下降，提示麻黃堿與偽麻黃堿發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用與調(diào)節(jié)Ca2+水平和抗炎作用有關(guān)[4]。（2）一氧化氮、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)：李蘭芳等將60只雌鼠分為6組對(duì)照，發(fā)現(xiàn)痛經(jīng)模型組大鼠外周血液和子宮組織勻漿中一氧化氮(NO)含量降低，復(fù)方消經(jīng)痛膠囊低、中、高劑量組大鼠血液和子宮組織中一氧化氮(NO)含量較模型組升高，復(fù)方消經(jīng)痛膠囊低、中、高劑量組血清中SOD、GSH-PX酶活性明顯增高，自由基及其降解產(chǎn)物-丙二醛(MDA)的含量減少，推斷復(fù)方消經(jīng)痛膠囊消除了機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化物和過氧化氫，保護(hù)生物膜免受自由基攻擊，達(dá)到減輕或緩解痛經(jīng)的作用[5]。（3）前列腺素F2α(PGF2α)、前列腺素E2(PGE2)：杜靜等報(bào)道香延止痛方可使痛經(jīng)模型鼠的扭體反應(yīng)潛伏期大大延長(zhǎng)，可降低實(shí)驗(yàn)鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)香延止痛方可降低痛經(jīng)模型鼠子宮組織PGF2α含量，提高PGE2含量[6]。（4）子宮組織上清液γ-干擾素、白細(xì)胞介素4含量及子宮組織IFN-γ、IL-4mRNA表達(dá)：曹衛(wèi)平等選用ELISA法檢測(cè)各組原發(fā)性痛經(jīng)大鼠子宮組織上清液IL-4（白細(xì)胞介素4）和INF-γ（γ-干擾素）含量，RT-PCR法檢測(cè)子宮組織上清液IL-4 mRNA、INF-γ表達(dá)，發(fā)現(xiàn)寒凝血瘀型原發(fā)性痛經(jīng)大鼠存在Th1/Th2平衡漂移,模型組子宮組織IFN-γ降低、IL-4升高，考慮調(diào)節(jié)Th1/Th2的平衡狀態(tài)是香延止痛方緩解痛經(jīng)的路徑[7]。（5）雌二醇、孕酮、前列腺素F2α、前列腺素E2血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α：馬青等干預(yù)寒凝血瘀證原發(fā)性痛經(jīng)大鼠，中藥擬香延止痛方，用溫經(jīng)化瘀止痛法，發(fā)現(xiàn)中藥小劑量組和中藥大劑量組均，降低血清E2、PGF2α和TXB2（血栓素B2）的含量，升高血清PGE2及6-酮-前列腺素F1α的水平，同時(shí)中藥大劑量組血清P（孕酮）含量增加，調(diào)控實(shí)驗(yàn)鼠血清前列腺素、E2含量以及TXB2與6-Keto-PGF1α比值，可能為溫經(jīng)化瘀止痛法止痛作用機(jī)理[8]。

2 藥物在實(shí)驗(yàn)鼠體內(nèi)代謝研究

李煒研究氣滯血瘀型原發(fā)性痛經(jīng)大鼠給予香附四物湯灌胃后體內(nèi)過程，給藥后，從大鼠血漿、膽汁、尿液組織中檢測(cè)到香草酸7個(gè)代謝產(chǎn)物，3個(gè)普魯托品代謝產(chǎn)物，3個(gè)阿魏酸代謝產(chǎn)物，6個(gè)延胡索乙素代謝產(chǎn)物等，此20個(gè)代謝產(chǎn)物主要是使用藥物后發(fā)生硫酸化結(jié)合、葡萄糖醛酸化、甲基化、羥基化、還原等代謝過程所產(chǎn)生，探討香附四物湯對(duì)大鼠代謝組學(xué)的影響，發(fā)現(xiàn)18個(gè)潛在的內(nèi)源性物質(zhì)在給藥組大鼠的尿液、血漿樣品屮均發(fā)現(xiàn)有恢復(fù)[4]。

3 不同時(shí)機(jī)給藥效應(yīng)研究

蒲寶嬋等將18-20 g，SPF級(jí)，60只小鼠按體重分層隨機(jī)分為6組，每組12只。連續(xù)6天每日予模型組、JQF動(dòng)情周期給藥組、元胡止痛片組、JQF第4天給藥組皮下注射苯甲酸雌二醇，測(cè)3周期給藥和1周期持續(xù)給藥對(duì)雌激素受體與縮宮素受體蛋白與mRNA表達(dá)的情況，測(cè)出不同時(shí)機(jī)灌胃給藥對(duì)PD模型小鼠雌激素受體和縮宮素受體mRNA表達(dá)和蛋白有相同的抑制作用[9]。

4 整合效應(yīng)研究

劉立等利用熱板刺激法篩選痛閾值合格的雌性小鼠160只，隨機(jī)分成16組，評(píng)價(jià)桃紅四物湯及各分離部位（乙醇梯度洗脫）的生物效應(yīng)，整合生物效應(yīng)評(píng)價(jià)表后，發(fā)現(xiàn)桃紅四物湯主要效應(yīng)部位群為30%醇洗部分（TH-9），40%醇洗部分（TH-10）和50%醇洗部分（TH-11），是由乙醇梯度洗脫，其中TH-9部位生物效應(yīng)最強(qiáng)，TH-9部位中阿魏酸含量最高，兩者存在相關(guān)相關(guān)性，推測(cè)生物效應(yīng)可能與其所含的化合物含量和種類密切相關(guān)[10]。

5 中醫(yī)外治法研究

中醫(yī)外治法是中醫(yī)藥治療中的一大亮點(diǎn)，被大眾廣泛運(yùn)用的非處方類中成藥丁桂兒臍貼中含丁香、肉桂、蓽撥，艾文超等將丁桂兒臍貼貼敷于大鼠的神闕穴，每日換藥，連敷6天，發(fā)現(xiàn)痛經(jīng)模型大鼠扭體次數(shù)減少，扭體潛伏期延長(zhǎng)，并發(fā)現(xiàn)丁桂兒臍貼大鼠神闕穴能減少離體子宮平滑肌收縮頻率，能抑制正常大鼠離體子宮平滑肌收縮的幅度和頻率及催產(chǎn)素所致的離體子宮平滑肌收縮幅度[11]。

6 原發(fā)性痛經(jīng)痛鼠模型制備方法小結(jié)

鼠類模型大鼠、小鼠均可在實(shí)驗(yàn)中使用，以成年雌大鼠子宮在體、離體實(shí)驗(yàn)多見，經(jīng)檢索文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)多數(shù)實(shí)驗(yàn)以宮縮素腹腔注射引發(fā)痛經(jīng)，考慮系宮縮素可引起子宮收縮，致痛前常采用皮下注射乙烯雌酚或苯甲酸雌二醇增強(qiáng)宮縮素敏感性及加強(qiáng)子宮平滑肌收縮[12]。為更好地研究中醫(yī)藥的治療機(jī)理，根據(jù)人體痛經(jīng)出現(xiàn)不同的中醫(yī)分型，現(xiàn)代學(xué)者模擬人體在不同環(huán)境下制作了不同中醫(yī)證型的大鼠模型，以寒凝血瘀、寒濕凝滯、氣滯血瘀多見，寒凝血瘀證模型多采用冰水浸泡法或全身冷凍法制備，全身冷凍法是將實(shí)驗(yàn)鼠置入零下25℃環(huán)境4小時(shí)，2小時(shí)后換氣5秒，1次/d，連續(xù)10天[13]；冰水浸泡法是準(zhǔn)備0～1℃冰水，將大鼠后肢和下腹部浸泡其中5分鐘，1次/ d，連續(xù)10天[14]；孟桐宇用0至4℃冰水浸泡大鼠，以制備寒凝血瘀型痛經(jīng)大鼠模型，每天浸泡一次，每次6 min，連續(xù)35天[15]。將實(shí)驗(yàn)鼠后肢和下腹部放入(20±2)℃冷水中，在室溫(23±2)℃條件下行寒冷刺激10分鐘，1次/d，連續(xù)4天，可制備寒濕凝滯痛經(jīng)鼠模型[16]。氣滯血瘀證模型制備：李煒采用皮下注射鹽酸腎上腺素及噪音刺激、烘箱熱烘、冰水游泳、隨機(jī)晝夜顛倒、懸尾慢性不可預(yù)見性刺激復(fù)制大鼠氣滯血瘀證模型，血液流變指標(biāo)有比較明顯變化，可大致判斷模型復(fù)制成功[4]。

7 小結(jié)

原發(fā)性痛經(jīng)（PD）在婦女中發(fā)病率高，受到研究者和臨床工作者的廣泛重視。目前，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究技術(shù)的發(fā)展，以及祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究的深入，PD的臨床研究報(bào)道日漸增多，關(guān)于PD分子生物學(xué)及相關(guān)生化指標(biāo)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究、單味中藥色譜及中藥復(fù)方中各個(gè)萃取部位有效藥效研究相對(duì)較少。同時(shí)觀察不同中藥方劑、同一中藥方劑用于不同分離部位的生物效應(yīng)及不同療法、不同給藥時(shí)機(jī)的研究有待進(jìn)一步深入開展。

中藥對(duì)PD鼠類的干預(yù)研究，充分展現(xiàn)了傳統(tǒng)中醫(yī)藥與現(xiàn)代科學(xué)相結(jié)合，為進(jìn)一步深入認(rèn)識(shí)和研究PD、探明治療PD的作用機(jī)理、發(fā)展中醫(yī)藥理論提供技術(shù)支持。檢索總結(jié)近十年相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)今年P(guān)D實(shí)驗(yàn)鼠模型，中醫(yī)分型以寒凝血瘀、寒濕凝滯、氣滯血瘀證型為主，總括以實(shí)證為主，中醫(yī)認(rèn)為不通則痛、不榮則痛，為了給臨床治療PD提供更廣泛的思路、依據(jù)，筆者認(rèn)為可建立不同證型的科學(xué)有效的實(shí)驗(yàn)鼠或其它動(dòng)物模型。除了氣血瘀滯、寒凝血瘀證、氣血虧虛型，《中醫(yī)婦科學(xué)》還提出濕熱瘀阻、腎氣虧損的痛經(jīng)證型[17]，但搜索近十年近文獻(xiàn)相關(guān)未發(fā)現(xiàn)有針對(duì)濕熱瘀阻、腎氣虧損的痛經(jīng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，考慮此兩種動(dòng)物模型較難復(fù)制和評(píng)估，再現(xiàn)性差，故仍需進(jìn)一步探索此兩種動(dòng)物模型的復(fù)制問題進(jìn)而進(jìn)行完整實(shí)驗(yàn)研究。婦女痛經(jīng)的臨床癥狀表現(xiàn)不盡相同，漢·張仲景提出“經(jīng)水不利，少腹?jié)M痛，經(jīng)一月再見者，土瓜根散主之”[18]，明·武之望有云“戴氏曰經(jīng)來而腹痛者，經(jīng)不來而腹亦痛者，皆血不調(diào)”[19]，至清代傅青主提出了更多非月經(jīng)前后表現(xiàn)出的痛經(jīng)，如“經(jīng)水忽來忽痛時(shí)疼時(shí)止”、“經(jīng)水未來腹先疼”、“行經(jīng)后小腹疼痛”、“經(jīng)前腹疼吐血”、“經(jīng)水將來臍下先疼痛”[20]，人類疾病的復(fù)雜性及現(xiàn)有科技水平、科研水平的局限性導(dǎo)致動(dòng)物模型的制備亦有局限性，但同時(shí)也給我們提出了更多的挑戰(zhàn)，中醫(yī)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域仍有很多值得挖掘、探索的東西。