花群俊，林彥星，楊仕標(biāo)

(1.武定縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 武定 651600；2.深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，廣東 深圳 518045；3.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，云南 昆明 650224)

豬塞內(nèi)卡病毒病是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的由塞內(nèi)卡病毒(Seneca Valley Virus，SVV)感染引起豬出現(xiàn)水泡性病變的一種傳染病。其特征是引起豬鼻鏡及蹄冠處出現(xiàn)水皰、潰爛從而導(dǎo)致跛足甚至死亡，臨床癥狀與口蹄疫、豬水泡病等我國(guó)規(guī)定的一類動(dòng)物傳染病相似。塞內(nèi)卡病毒從發(fā)現(xiàn)至今不足30年，全球范圍內(nèi)對(duì)該病病原學(xué)、流行病學(xué)等方面的認(rèn)識(shí)仍相對(duì)空白，普遍缺乏對(duì)病毒抵抗能力、傳播途徑、潛伏期、擴(kuò)散期、致病性、針對(duì)性預(yù)防方法和免疫方法的了解。另外，研究人員發(fā)現(xiàn)，美國(guó)目前分離到的A型塞內(nèi)卡病毒與20世紀(jì)80年代出現(xiàn)的病毒屬于同一病毒株，與巴西出現(xiàn)的病毒基因有98.6 %的相似性，但與加拿大前幾年發(fā)現(xiàn)的病毒基因相似性較低(86.7%～90.5%)，表明該病毒是易突變的RNA病毒，導(dǎo)致病毒本身的不確定性進(jìn)一步增加。

1 病原學(xué)特性

1.1 病原發(fā)現(xiàn)

SVV最初被認(rèn)為是細(xì)胞培養(yǎng)物中的污染物，推測(cè)其來(lái)源于豬的胰酶或胎牛血清[1]。2002 年，由美國(guó)基因治療公司在馬里蘭州使用 PER.C6 細(xì)胞(轉(zhuǎn)化的胎兒成視網(wǎng)膜細(xì)胞)培養(yǎng)腺病毒-5(Ad5)病毒載體時(shí)分離到塞內(nèi)卡病毒-001(SVV-001)[2]。多年來(lái)，SVV主要作為溶瘤細(xì)胞進(jìn)行研究，用于治療某些神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，一直被認(rèn)為是一種非致病性病毒。2007年，一批自加拿大運(yùn)往美國(guó)明尼蘇達(dá)州的豬鼻鏡出現(xiàn)水泡、蹄部冠狀帶潰爛等類似水皰病的癥狀，經(jīng)檢測(cè)排除口蹄疫、豬水泡病、水泡性口炎，最終通過(guò)PCR檢測(cè)確定為SVV陽(yáng)性。2014年10月后，該病毒先后大規(guī)模影響巴西、美國(guó)的豬場(chǎng)，才逐漸被全球各國(guó)所關(guān)注。

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，20世紀(jì)80年代末該病毒已存在于家畜中，除豬外，牛和小鼠等動(dòng)物也有檢測(cè)到SVV抗體的報(bào)道，在當(dāng)時(shí)被認(rèn)為是豬特發(fā)性水泡病(Porcine Idiopathic vesicular disease，PIVD，指不由口蹄疫、水皰病、水皰性口炎和水皰性疹所引起的出現(xiàn)水皰病變臨床癥狀的疾病的統(tǒng)稱)的病原[3]。2015 年7 月，巴西報(bào)道了一起與SVV感染有關(guān)的新生仔豬死亡綜合征(neonatal losses syndrome)。主要影響 0～7 日齡的仔豬，0～3 日齡的仔豬死亡率高(40%～80%)，4～7 日齡的仔豬表現(xiàn)出中等死亡率(0～30%)。受影響的母豬場(chǎng)出現(xiàn)新生仔豬死亡率突發(fā)性增長(zhǎng)，不過(guò)在 4～10d內(nèi)恢復(fù)到正常的死亡率水平。對(duì)幾個(gè)豬群受影響的仔豬進(jìn)行病理學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)仔豬的多個(gè)組織，包括大腦、血液和淋巴組織都有大量的塞內(nèi)卡病毒，這表明存在病毒的普遍感染[4]。雖從死亡病例中分離到的不同病毒毒株之間存在基因相似性，但并未發(fā)現(xiàn)可以用來(lái)解釋仔豬死亡原因的特征性病變。研究人員將其稱為流行性暫時(shí)性新生仔豬死亡(epidemic transient neonatal losse，ETNL)。

1.2 病毒結(jié)構(gòu)和分類

塞內(nèi)卡病毒(Seneca Valley Virus，SVV)在分類學(xué)中屬于小RNA 病毒科(Picornaviridae)塞內(nèi)卡病毒屬(Senecavirus)A型塞內(nèi)卡病毒(Senecavirus A)的唯一成員[5]。通過(guò)對(duì)小RNA 病毒科12個(gè)代表性病毒屬病毒進(jìn)行全基因組序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，SVV與心肌炎病毒屬遺傳關(guān)系最近，為直徑約27nm的二十面體無(wú)囊膜單股正鏈不分節(jié)段的RNA病毒，其基因組含有7280個(gè)核苷酸，其中包括了5′端666個(gè)核苷酸的非編碼區(qū)，一個(gè)開(kāi)放閱讀框含有6543個(gè)核苷酸，編碼2181個(gè)氨基酸的多聚蛋白，可分割成12個(gè)成熟多肽，構(gòu)成5′-L-1A-1B-1C-1D-2A-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3′模式，3′非編碼區(qū)有 71 個(gè)核苷酸，帶有Ploy(A)。該病毒目前僅有一個(gè)種類，被命名為A型塞內(nèi)卡病毒(Senecavirus A，SVA)。美國(guó)愛(ài)荷華州立大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室將 SVA 毒株VP1 和全基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，所有新分離毒株之間同源性高達(dá) 99%～100%，但是與早期SVA(1988～2001年)序列差異顯著[6]。美國(guó)SVA毒株與巴西SVA毒株同源性達(dá)97%～98%。進(jìn)化樹(shù)分析表明，SVA在近30年來(lái)已發(fā)生變異，致病性增強(qiáng)。

1.3 理化敏感性

目前仍缺少SVV理化敏感性的研究數(shù)據(jù)。但鑒于SVV與口蹄疫病毒(FMDV)結(jié)構(gòu)特性相近，常認(rèn)為兩者間具有相似的理化敏感性，故消毒時(shí)可考慮采用相同的消毒劑和消毒方法。如2%乙酸或醋、0.2%檸檬酸溶液、2%氫氧化鈉、4%碳酸鈉、醛類、次氯酸鹽等，對(duì)環(huán)境、防護(hù)服、車輛等進(jìn)行消毒。

2 流行病學(xué)

2.1 疾病分布范圍

1969～2007年，澳大利亞、意大利、新西蘭、加拿大、美國(guó)等國(guó)家曾報(bào)道發(fā)生特發(fā)性水皰性疾病(SIVD)疫情，但并未確診。2010年，美國(guó)印第安納州一頭6月齡的切斯特白野豬出現(xiàn)厭食、嗜睡、跛行，口腔、鼻吻和四肢出現(xiàn)囊泡和糜爛癥狀，檢測(cè)能引起水皰癥狀的口蹄疫病毒(FMDV)、豬水皰病病毒(SVDV)、水皰性口炎病毒(VSV)和豬水皰性疹病毒(VESV)4種OIE要求上報(bào)的水皰性疾病病原及相關(guān)細(xì)菌均為陰性，而SVV為陽(yáng)性。2014年秋，巴西出現(xiàn)大量仔豬斷奶前發(fā)病，對(duì)病料的檢測(cè)結(jié)果同樣排除了其他水皰性病毒病和細(xì)菌病，SVV為陽(yáng)性。截至2015年9 月底，美國(guó)有11 個(gè)州確診豬發(fā)生SVV感染。加拿大、意大利和巴西疑似SVV感染。2015 年，我國(guó)廣東某豬場(chǎng)暴發(fā)了豬水皰性疾病，表現(xiàn)為感染豬只鼻部和口腔形成潰瘍，厭食、跛行，新生仔豬急性死亡，后證實(shí)是感染塞內(nèi)卡病毒所致。從陽(yáng)性病料中成功擴(kuò)增獲得SVV全基因組，并命名為 CH-01-2015，該病毒與其他8株分離自加拿大、巴西和美國(guó)的SVV同源性高達(dá) 94.4%～97.1%。

2.2 傳染源

病毒以豬作為天然宿主，部分資料顯示奶牛也可作為其天然宿主。血清學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在豬、牛和鼠等動(dòng)物血清中可見(jiàn)自然SVA的中和抗體。同時(shí)，該病毒可以在人視網(wǎng)膜母細(xì)胞(PER.C6)、人肺癌單層細(xì)胞(NCI-H1299a)和具有神經(jīng)內(nèi)分泌功能的腫瘤細(xì)胞上生長(zhǎng)。I期臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)人施加1011vp/kg的病毒劑量仍處于安全范圍，但暫無(wú)人感染該病毒的相關(guān)報(bào)道。據(jù)北美、南美和澳大利亞的研究報(bào)道，發(fā)病仔豬的多個(gè)組織，包括大腦、血液和淋巴組織均含有大量SVA。故豬應(yīng)視為該病毒的主要傳染源。

2.3 傳播

雖然同科的FMDV 可以通過(guò)直接接觸病畜、污染物或氣溶膠進(jìn)行傳播，美國(guó)和巴西在疑似發(fā)病豬場(chǎng)采集的臨床樣品和環(huán)境樣品以及鼠糞便、鼠小腸、蠅類飛蟲(chóng)等媒介物中檢出SVV，但目前尚無(wú)資料顯示SVV是否能夠通過(guò)這些方式傳播。該病表現(xiàn)出一定的季節(jié)性，多發(fā)于春秋兩季。

研究報(bào)道表明其傳播速度較快，如2014年10月至2015年3月的6個(gè)月間巴西約70 %的豬場(chǎng)受其影響，2015年7月至11月上旬的4個(gè)月間美國(guó)約100個(gè)豬場(chǎng)發(fā)現(xiàn)該病毒。部分報(bào)道顯示其在宏觀上呈低流行性，如美國(guó)兩所大學(xué)的獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的回顧性研究，對(duì)來(lái)自25個(gè)州的441例豬唾液樣品使用PCR法進(jìn)行常規(guī)病原體檢測(cè)，結(jié)果顯示SVV僅5例，且分別來(lái)自5個(gè)不同的州，呈低流行性。

2.4 易感動(dòng)物

根據(jù)各國(guó)所報(bào)道的情況，發(fā)病對(duì)象均為豬，未見(jiàn)其他物種有感染發(fā)病的情況。

3 臨床癥狀

發(fā)病成年豬臨床表現(xiàn)較為溫和，病程約持續(xù)1～2周，可出現(xiàn)厭食、昏睡、發(fā)熱等癥狀，發(fā)病初期可見(jiàn)40℃高燒。鼻吻或口腔黏膜(任何皮膚與黏膜交界處)會(huì)出現(xiàn)完整或破裂的小泡，約80%可出現(xiàn)跛行，冠狀帶和蹄壁周圍發(fā)紅或熱燙，出現(xiàn)潰瘍性病變。發(fā)病仔豬常出現(xiàn)昏睡、精神沉郁，偶見(jiàn)腹瀉，體溫一般無(wú)明顯變化。出生0～3日齡死亡率40%～80%，4～7日齡死亡率低于30%。受影響的母豬場(chǎng)出現(xiàn)新生仔豬死亡率的突發(fā)性增長(zhǎng)，但于4～10d內(nèi)恢復(fù)正常死亡率水平。

4 病理變化

4.1 致病機(jī)理

SVV致病機(jī)理目前尚不明確。有學(xué)者對(duì)成年豬感染SVV的發(fā)病機(jī)制和感染動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究，試驗(yàn)動(dòng)物通過(guò)口鼻途徑接種SVV SD15-26病毒株，監(jiān)測(cè)其臨床體征和病變情況，并通過(guò)RT-qPCR法和病毒分離法監(jiān)測(cè)血清中的病毒血癥和口鼻分泌物與糞便的排毒情況。此外，還對(duì)感染動(dòng)物在急性感染期間和康復(fù)期的病毒載量和組織分布進(jìn)行了評(píng)估。研究結(jié)果表明，在人工感染后第4天可觀察到以嗜睡和跛足為特征的臨床體征并持續(xù)2～10d；受感染動(dòng)物的口鼻和足上均觀察到水泡病變，涉及冠狀動(dòng)脈帶、懸蹄、蹄趾間隙和足跟、足底等部位；接種后3～10d可檢測(cè)到短期病毒血癥，而在感染后第1～28天從口鼻分泌物和糞便可檢測(cè)到排毒現(xiàn)象。值得注意的是，對(duì)在第38天收集的組織進(jìn)行RT-qPCR和原位雜交(ISH)檢測(cè)，結(jié)果顯示所有感染動(dòng)物的扁桃體中均存在病毒的RNA片段。與此同時(shí)，人工感染5d后通過(guò)早期中和抗體的檢測(cè)對(duì)感染動(dòng)物的血清學(xué)反應(yīng)進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，其結(jié)果與病毒血癥、排毒情況和組織中病毒含量等水平逐漸降低的情況相符。

4.2 病理變化

豬感染SVV后，除出現(xiàn)上述臨床癥狀外，個(gè)別感染案例還可見(jiàn)漿液纖維素性腹膜炎、心包炎，局部廣泛性空腸炎和局灶性胃潰瘍。通過(guò)顯微鏡觀察遠(yuǎn)端肢體、口腔和鼻吻病變，可見(jiàn)角化、表皮增生、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)并伴隨纖維蛋白滲出、水腫、急性出血、核碎片，偶見(jiàn)球菌菌落，可導(dǎo)致出現(xiàn)潰瘍性胃炎、淋巴漿細(xì)胞性肝炎和膜增生性腎小球腎炎。

2015年巴西幼豬感染后的病理學(xué)變化包括腎臟點(diǎn)狀出血、舌部和冠狀帶潰瘍、間質(zhì)性肺炎、多灶性白喉樣舌炎、淋巴性心肌炎、泌尿膀胱和輸尿管過(guò)渡性上皮細(xì)胞氣球樣變性和淋巴漿質(zhì)細(xì)胞腦炎。神經(jīng)癥狀死亡的仔豬免疫組織化學(xué)方法(IHC)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，病毒分布于腦部脈絡(luò)層的上皮細(xì)胞和周圍血管內(nèi)皮細(xì)胞中，推測(cè)可能是通過(guò)改變血管上皮細(xì)胞的完整性，進(jìn)而感染神經(jīng)脈絡(luò)層，隨后傳遞到相鄰的神經(jīng)纖維網(wǎng)，從而導(dǎo)致神經(jīng)癥狀的產(chǎn)生。同時(shí)，IHC 結(jié)果表明，所有感染仔豬的尿道上皮細(xì)胞中均能檢測(cè)到該病毒，提示尿液可能是該病的一種傳播方式和豬場(chǎng)感染的污染源。此外， RT-PCR和IHC檢測(cè)發(fā)現(xiàn)病毒存在于腹瀉仔豬的腸道，表明病毒可以在腸道上皮細(xì)胞增殖。該研究表明，SVV是一種泛嗜性病毒，在感染早期可造成多系統(tǒng)性疾病。

5 診斷

由于 SVV感染動(dòng)物所引起的臨床癥狀與其他病毒感染(如FMDV、SVDV、VSV、VESV)引起的臨床表現(xiàn)十分相似，給臨床確診帶來(lái)了困難。因此，需要對(duì)疑似病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。目前該病的主要實(shí)驗(yàn)室診斷方法包括血清學(xué)診斷和病原學(xué)診斷。

5.1 血清學(xué)診斷

最初通過(guò)iELISA(間接ELISA)對(duì)血清中的SVV抗體進(jìn)行檢測(cè)，但iELISA存在較強(qiáng)的交叉反應(yīng)且特異性不高，目前已被cELISA(競(jìng)爭(zhēng)ELISA)替代。cELISA 是通過(guò)待測(cè)抗體與預(yù)先制備的抗SVV單克隆抗體(MAb)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合SVV抗原，評(píng)價(jià)待測(cè)抗體的效價(jià)。該方法近年來(lái)在美國(guó)豬群SVV流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和實(shí)驗(yàn)室確診工作中被廣泛使用。

血清中和試驗(yàn)具有特異性高的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于血清學(xué)調(diào)查。病毒中和試驗(yàn)采用終點(diǎn)稀釋法測(cè)定血清中抗體的中和活性。將熱滅活的血清進(jìn)行2倍系列稀釋，與100 TCID50的SVV等體積混合，在37℃孵育1h，感染NCI-H1299 細(xì)胞，感染72 h 后觀察細(xì)胞病變，當(dāng)90%～100%的細(xì)胞病變得到抑制則判定中和實(shí)驗(yàn)有效，從而確定陽(yáng)性抗體最終稀釋度，計(jì)算抗體效價(jià)。

5.2 病原學(xué)診斷

相關(guān)研究表明SVV可在豬睪丸細(xì)胞(ST細(xì)胞)、豬腎細(xì)胞(PK-15)、人胚腎細(xì)胞(PER.C6)和非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(NCI-H1299)中分離培養(yǎng)。電子顯微鏡檢查、免疫組化、RT-PCR、熒光定量RT-PCR等均可用于SVV分離培養(yǎng)物的鑒別檢測(cè)。其中，電子顯微鏡檢查可通過(guò)是否出現(xiàn)單個(gè)或聚團(tuán)的二十面體結(jié)構(gòu)顆粒，確定是否存在病毒感染。免疫組化試驗(yàn)是抗原檢測(cè)敏感且特異的方法，能定位病原在組織細(xì)胞中的分布。試驗(yàn)通過(guò)RT-PCR 擴(kuò)增SVV基因組特定區(qū)段(如VP3/VP1, 3D/3′非編碼區(qū))，可對(duì)豬水泡樣本中的SVV核酸進(jìn)行檢測(cè)。RT-PCR和熒光定量RT-PCR技術(shù)通常具有特異性高、敏感性強(qiáng)、快速可靠的優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)檢測(cè)[7]。

同時(shí)，新型RNA原位雜交技術(shù)是用于SVV快速診斷的一個(gè)有效手段。原位雜交技術(shù)可以檢測(cè)組織切片中特異的RNA或DNA序列。目前已有學(xué)者使用新型的原位雜交RNA-based 顯色技術(shù)(RNAscope)與雜交信號(hào)放大系統(tǒng)相結(jié)合來(lái)檢測(cè)SVV，探針靶向SVV的VP1基因[8]。感染動(dòng)物的皮膚、脾臟、肝臟、心臟、小腸和淋巴結(jié)等組織經(jīng)福爾馬林固定后的石蠟包埋樣品適于進(jìn)行原位雜交檢測(cè)。

2015年巴西新生仔豬SVV感染病例研究結(jié)果表明，來(lái)自感染仔豬舌頭、牙齦、胸部皮膚破裂水泡、冠狀帶潰瘍、心肌、肺、肝、脾、腎盂、膀胱、大腦、小腦、腦干、帶糞小腸等樣品使用RT-PCR方法可檢出病原核酸。來(lái)自感染仔豬舌頭、牙齦、腎盂、腦、膀胱、帶糞小腸等樣品免疫組化檢驗(yàn)呈陽(yáng)性。

6 防控措施

現(xiàn)有研究資料顯示SVV不具備FMDV的危害性，大多數(shù)成年豬感染后預(yù)后良好，未引起嚴(yán)重的公共衛(wèi)生后果和經(jīng)濟(jì)損失。但SVV感染的臨床癥狀類似于FMD、SVD、VS等動(dòng)物水泡性疾病，使得感染豬只的上市存在重大的風(fēng)險(xiǎn)和隱患[8]。雖未有確切數(shù)據(jù)能夠?qū)VV的傳染性進(jìn)行綜合分析，全球范圍對(duì)其認(rèn)知也相對(duì)局限，其對(duì)于豬場(chǎng)的短期或長(zhǎng)期影響暫無(wú)法準(zhǔn)確估量，但近年來(lái)該病在巴西、美國(guó)、加拿大、中國(guó)等地幾乎同時(shí)發(fā)病。表明其從被發(fā)現(xiàn)至今存在進(jìn)一步擴(kuò)大和爆發(fā)的可能，且局部地區(qū)傳播速度快，仔豬致死率較高，發(fā)病區(qū)域的環(huán)境、媒介、生物大多可檢測(cè)到攜帶病毒[9]。

目前，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)尚未將該病列入疫病名錄，其網(wǎng)站也未發(fā)現(xiàn)該病的任何信息。據(jù)報(bào)道，美國(guó)加州已就此啟動(dòng)專項(xiàng)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，美國(guó)農(nóng)業(yè)部也規(guī)定發(fā)現(xiàn)動(dòng)物出現(xiàn)水皰性臨床癥狀后，應(yīng)立即與當(dāng)?shù)刂莴F醫(yī)部門(mén)聯(lián)系，在調(diào)查結(jié)果確認(rèn)前暫停農(nóng)場(chǎng)一切動(dòng)物移運(yùn)。其他國(guó)家關(guān)于SVV和PIVD的相關(guān)限制防治或限制措施，所查閱資料暫時(shí)尚未發(fā)現(xiàn)[10]。我國(guó)雖已發(fā)現(xiàn)該病，但研究資料不多，診斷方法不成熟，缺乏有效疫苗。我國(guó)農(nóng)業(yè)部制定的《2018年獸醫(yī)工作要點(diǎn)》中已明確提出做好塞內(nèi)卡病毒病等新傳入疫病的防治工作。有關(guān)部門(mén)應(yīng)密切關(guān)注國(guó)際疫情動(dòng)態(tài)，做好風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和預(yù)警預(yù)報(bào)工作。同時(shí)，加強(qiáng)疫病監(jiān)測(cè)，加快疫苗的研發(fā)，建立診斷技術(shù)，做好技術(shù)儲(chǔ)備，制定相應(yīng)的應(yīng)急預(yù)案。因該病在臨床上與給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成巨大威脅的FMD 癥狀極為相似，發(fā)現(xiàn)相似疫情，應(yīng)及時(shí)做好與FMD、SVD、VES及VS的鑒別診斷[11]。一旦確診發(fā)生疫情，建議由地方獸醫(yī)主管部門(mén)開(kāi)展緊急調(diào)查和抽樣檢測(cè)，在調(diào)查結(jié)果確認(rèn)前暫停相關(guān)養(yǎng)殖場(chǎng)的動(dòng)物移運(yùn)。確認(rèn)后可參照口蹄疫防控技術(shù)規(guī)范和防控應(yīng)急預(yù)案果斷處置。