李文凱，李新敏，艾亮

鄭州市婦幼保健院超聲診斷科，鄭州 4500120

乳腺癌是目前常見的一種女性惡性腫瘤，其發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居首位，而且近年來由于女性面臨壓力的增加以及環(huán)境因素的改變等綜合因素使乳腺癌的發(fā)病率有升高趨勢[1-2]。如能在發(fā)病早期采取積極的治療措施，能顯著提高臨床治療效果，改善患者預后。目前，臨床對乳腺癌的診斷方法較多，如超聲影像、免疫組化、基因檢測等，但由于各種主觀因素的影響，其結果很難標準化[3-5]。腫瘤標志物是臨床常用的早期篩查乳腺癌的重要手段之一，一種惡性腫瘤可以釋放多種腫瘤標志物，而一種腫瘤標志物可以反映多種腫瘤。目前，科學研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤標志物都與乳腺癌有關，但任何一種單獨檢測時的靈敏度均較低，尤其是對于早期患者非常容易漏診[6-8]。此外，腫瘤標志物檢測不能直觀地反映病灶的大小、形態(tài)，對指導臨床治療意義較小。為此，本研究探討彩色多普勒超聲聯(lián)合低氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）、STAT4激活蛋白抑制劑（protein inhibitor of activated STAT 4，PIASY）檢測用于乳腺癌診斷的效能，為臨床更加準確、及時地診斷乳腺癌提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年3月至2016年11月在鄭州市婦幼保健院就診的103例乳腺腫塊患者作為研究組。納入標準：有乳腺腫塊；均在手術前采集血清標本且行超聲檢查。排除標準：合并其他惡性腫瘤、肝腎功能異常、婦科炎癥、結核以及內科合并癥者。研究組患者均為女性，年齡31～72歲，平均（42.3±3.2）歲；腫塊直徑7～104 mm，平均（48.2±11.2）mm；左側病變59例，右側病變42例，雙側病變2例。另選擇同期在鄭州市婦幼保健院進行健康體檢的30例女性作為對照組，年齡30～71歲，平均（41.8±2.3）歲。兩組研究對象的年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，入組研究對象及家屬均對本研究知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 檢查方法

1.2.1 多普勒超聲檢查 采用Sequia512型彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率為10～13 MHz。按常規(guī)檢查方法先檢查腫塊的形態(tài)、大小、邊界、位置、內方及后方回聲、鈣化情況、縱橫比、與周邊組織的關聯(lián)、腋窩淋巴結是否腫大等二維超聲特征。在此基礎上，探測腫塊內部及周圍血流狀況。血流狀況選擇最高流速處實行頻譜檢測，參數(shù)包括阻力指數(shù)（resistance index，RI）、搏動指數(shù)（pulsatility index，PI）、最大血流速度（maximum blood flow velocity，Vmax），共檢測3次，取平均值。

1.2.2 腫瘤標志物檢測 采用微創(chuàng)乳腺活檢技術，通過免疫組化方法評估乳腺組織標本中HIF-1α和PIASY的表達情況。鼠抗人單克隆抗體購自上海麥莎公司，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色試劑盒購自南京建成公司。采集的標本經石蠟包埋，切片、染色，采用免疫組化方法進行檢測，所有操作均根據(jù)說明書進行。

1.3 結果判定

1.3.1 多普勒超聲診斷 惡性判斷標準：①邊緣呈毛刺狀；②形態(tài)不規(guī)則；③內部回聲不均勻；④后方回聲減弱；⑤邊界不清楚；⑥縱橫比＞1；⑦存在腋下淋巴結腫大；⑧RI≥0.7。

1.3.2 腫瘤標志物診斷 HIF-1α主要定位于細胞核，PIASY主要定位于細胞膜、細胞核和細胞質。每張切片在光鏡下隨機選取10個視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞，根據(jù)陽性細胞所占比例及染色程度分別計分。按陽性細胞所占比例：無陽性細胞為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，51%～80%為3分，＞80%為4分；按染色強度：基本不著色為0分，呈淺黃色為1分，呈棕黃色為2分，呈棕褐色為3分；陽性細胞所占比例評分與染色強度評分相乘后得出綜合評分，綜合評分＞4分為陽性表達[9]。

1.3.3 乳腺癌診斷 多普勒超聲、HIF-1α及PIASY 3項診斷指標中有任何一項診斷為惡性或陽性則判定為乳腺癌，3項均為良性或陰性方可排除乳腺癌。診斷價值分析：以病理診斷結果為金標準，靈敏度=真陽性例數(shù)（/真陽性+假陰性）例數(shù)×100%，特異度=真陰性例數(shù)（/真陰性+假陽性）例數(shù)×100%，準確度=（真陰性+真陽性）例數(shù)（/真陽性+真陰性+假陽性+假陰性）例數(shù)×100%。Kappa值為診斷方法與金標準的一致性。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)-計軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 病理組織檢查結果

103例乳腺腫塊患者中，經病理組織檢查確診乳腺增生患者32例，良性腫瘤患者47例，乳腺癌患者24例。

2.2 HIF-1α、PIASY陽性表達情況的比較

研究組患者 HIF-1α、PIASY 陽性表達率均明顯高于對照組健康人群，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 研究組患者與對照組健康人群HIF-1α、PIASY陽性表達情況的比較[n（%）]

2.3 彩色多普勒超聲單獨及聯(lián)合腫瘤標志物診斷乳腺癌與病理診斷結果的對照

彩色多普勒超聲診斷結果表明有41例乳腺癌患者，62例乳腺良性疾病患者；彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY診斷結果表明有32例乳腺癌患者，71例乳腺良性疾病患者（表2）。彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY對乳腺癌診斷的靈敏度、特異度、準確度及Kappa值均高于單獨采用彩色多普勒超聲（表3）。

表2 彩色多普勒超聲單獨及聯(lián)合腫瘤標志物診斷乳腺癌與病理診斷結果的對照

表3 彩色多普勒超聲單獨及聯(lián)合腫瘤標志物對乳腺癌的診斷價值

3 討論

女性乳腺癌是目前威脅女性健康及生命安全的惡性腫瘤。近年來由于社會環(huán)境的劇烈改變，乳腺癌的發(fā)病率呈逐漸升高的趨勢。對于多數(shù)腫瘤而言，在其發(fā)病早期進行確診，采取積極有效的治療措施，往往能夠顯著延長生存期，改善患者預后。因此，如何有效提高乳腺癌早期診斷的準確度已成為近年來的熱點課題。越來越多的研究表明腫瘤標志物水平的升高通常會在患者表現(xiàn)出較為明顯的臨床癥狀之前的幾個月出現(xiàn)，因此以腫瘤標志物作為腫瘤早期診斷的指標具有較高的研究價值[10]。但由于多種腫瘤均會導致腫瘤標志物水平的升高，使腫瘤標志物用于特定腫瘤診斷時的特異度較低。在此背景下，本研究旨在探討彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY檢測用于乳腺癌診斷的靈敏度與準確度，為臨床更早期診斷乳腺癌提供參考。

HIF-1α是一種腫瘤標志物，當細胞或組織內的氧含量下降時，會抑制機體對HIF-1α的降解，從而使其在細胞質內積聚，同時可發(fā)生核轉位，并與β亞基結合形成二聚體，通過該二聚體激活目標基因的轉錄，發(fā)揮生物學活性[11-12]。研究分析表明其在良性腫瘤及正常組織中基本處于正常水平，而在惡性腫瘤組織中的表達水平顯著升高[13]。PIASY是一種能夠抑制信號轉導及轉錄激活蛋白（signal transducer and activator of transcription，STAT）轉錄活性的蛋白質，在缺氧的環(huán)境下，其能通過抑制SIRT1基因轉錄而促進腫瘤的轉移[14]。本研究結果也表明，研究組患者HIF-1α、PIASY陽性表達率均明顯高于對照組健康人群，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），與上述研究結果基本相符。

本研究103例乳腺腫塊患者中，經病理組織檢查確診乳腺增生患者32例，良性腫瘤患者47例，乳腺癌患者24例。術前彩色多普勒超聲診斷結果表明有41例乳腺癌患者，多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY診斷結果表明有32例乳腺癌患者。通過分析表明，彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY對乳腺癌診斷的靈敏度、特異度及準確度分別為87.50%、86.08%和86.41%，均高于單獨采用彩色多普勒超聲，且與金標準具有更高的一致性。其原因可能是由于彩色多普勒超聲能夠清楚顯示乳腺腫塊的形態(tài)和組織結構，根據(jù)聲像學特征對腫瘤的良惡性做出初步判斷，而且能夠顯示腫塊有無毛刺、鋸齒樣結構改變，邊緣的光滑程度，實質內有無細小的鈣化灶。而腫瘤標志物的檢測具有較高的靈敏度，因此二者聯(lián)合應用可顯著提高對乳腺癌診斷的準確度、特異度以及靈敏度。

綜上所述，彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY檢測對乳腺癌診斷的靈敏度與準確度均較高，具有較高的臨床應用價值。