歐陽(yáng)曉玫,牟建平,滕寶霞,賀曉文

(甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730050)

林可霉素利多卡因凝膠是由鹽酸林可霉素、鹽酸利多卡因組成的復(fù)方制劑，曾用名綠藥膏，主要用于外科燒傷及蚊蟲(chóng)叮咬引起的各種皮膚感染，在我國(guó)廣泛使用. 2002年收載于《化學(xué)藥品地標(biāo)升國(guó)標(biāo)第2冊(cè)》，國(guó)外藥典無(wú)收載，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)鹽酸利多卡因的含量進(jìn)行控制[1]，因此，該制劑的質(zhì)量和療效無(wú)法得到有效保證. 本文參照相關(guān)文獻(xiàn)[2-5],采用高效液相色譜法測(cè)定凝膠中鹽酸利多卡因的含量，建立的方法操作簡(jiǎn)單易行，符合《中國(guó)藥典》2015年版檢測(cè)要求，排除了樣品中凝膠基質(zhì)和其他雜質(zhì)干擾，并考察了全國(guó)10家生產(chǎn)企業(yè)214批次樣品中鹽酸利多卡因的含量.

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(日立Chromaster5430型，帶DAD檢測(cè)器)；酸度計(jì)(梅特勒，型號(hào)：FE28)；電子天平(梅特勒精密電子天平，型號(hào)：DU205). 利多卡因?qū)φ掌?來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100342-201304，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.8%)；甲醇(LiChrosolv，色譜純)；乙腈(LiChrosolv，色譜純)；四硼酸鈉(國(guó)藥集團(tuán)，優(yōu)級(jí)純)；磷酸(科密歐，分析純). 林可霉素利多卡因凝膠為國(guó)家評(píng)價(jià)性抽檢樣品.

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent 5 Tc-C18(2)柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：0.05 mol/L硼砂溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.0)-甲醇-乙腈(體積比為68∶19∶13)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：214 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL.

1.3 對(duì)照品溶液的配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取利多卡因?qū)φ掌?.016 0 mg置100 mL容量瓶中，用0.05 mol/L硼砂溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻備用.

準(zhǔn)確稱(chēng)取利多卡因?qū)φ掌?.024 06 g置100 mL量瓶中，用0.05 mol/L硼砂溶液溶解稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照儲(chǔ)備液，該溶液質(zhì)量濃度為240.6 μg/mL. 取20 μL進(jìn)樣，所得色譜圖如圖1(a)所示.

1.4 供試品溶液的配制

稱(chēng)取樣品4 g置于燒杯中，加入少量0.05 mol/L硼砂溶液，用玻璃棒充分?jǐn)嚢枋蛊浞稚⒕鶆虿⑷芙夂螅D(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加0.05 mol/L硼砂溶液稀釋至刻度，搖勻備用. 該溶液過(guò)濾后取20 μL進(jìn)樣測(cè)定，所得色譜圖如圖1(b)所示.

圖1 利多卡因液相色譜圖Fig. 1 Chromatogram of lidocaine liquid

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

林可霉素利多卡因凝膠是水性凝膠劑，水性凝膠基質(zhì)大多在水中溶脹成水性凝膠而不溶解. 選用磷酸鹽緩沖液溶解樣品，結(jié)果林可霉素利多卡因凝膠樣品分散不均一、溶解較差. 選取0.05 mol/L硼砂溶液溶解樣品，結(jié)果林可霉素利多卡因凝膠樣品中凝膠基質(zhì)干擾小，樣品溶解性較好.

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱的理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性符合“高效液相色譜法”(中國(guó)藥典2015年版四部通則0512)項(xiàng)下的要求. 理論板數(shù)按利多卡因峰計(jì)算不低于2 000，待測(cè)峰與其它峰的分離度應(yīng)不小于1.5.

2.3 重復(fù)性

分別精密吸取利多卡因?qū)φ掌啡芤?0 μL，按上述色譜條件測(cè)定，各進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，利多卡因?qū)φ掌啡芤旱腞SD為0.60%.

2.4 線性關(guān)系

分別量取對(duì)照儲(chǔ)備液適量，用0.05 mol/L硼砂溶液稀釋成質(zhì)量濃度為40.1、80.2、120.3、160.4、200.5、240.6 μg/mL的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.2”節(jié)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖2所示. 曲線方程：y=62 964x+69 467，r=0.999 4. 結(jié)果表明，在40.1 ～240.6 μg/mL之間與峰面積呈良好線性關(guān)系.

圖2 利多卡因標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 2 Standard curve of lidocaine

2.5 精密度試驗(yàn)

取質(zhì)量濃度為160.4 μg/mL的對(duì)照溶液，按“1.2”節(jié)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果其峰面積的RSD為0.5%，表明本文所建立的方法具有較好的精密度.

2.6 回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取1.00 mL樣品各3份，分別置于50 mL量瓶中，加入質(zhì)量濃度為160.4 μg/mL的利多卡因?qū)φ諆?chǔ)備液0.4、0.5、0.6 mL，用0.05 mol/L硼砂溶液稀釋至刻度，搖勻，按“1.2”節(jié)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果如表1所列. 由表1可見(jiàn)，平均回收率為97.6%，表明加樣回收率良好.

2.7 鹽酸利多卡因含量測(cè)定

根據(jù)建立的含量測(cè)定方法，對(duì)我院承擔(dān)的國(guó)家評(píng)價(jià)性抽檢品種林可霉素利多卡因凝膠的214批次樣品中鹽酸利多卡因含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果214批次樣品中鹽酸利多卡因含量分布在84.0%～101.5%之間，平均值93.9%(n=214)，結(jié)果如圖3所示. 制劑中鹽酸利多卡因的含量基本呈正態(tài)分布，部分批次的含量較低，說(shuō)明部分生產(chǎn)企業(yè)對(duì)鹽酸利多卡因投料及工藝控制不理想.

圖3 214批次樣品鹽酸利多卡因含量的頻數(shù)分布圖Fig. 3 Frequency distribution of 214 batches of lidocaine hydrochloride

3 結(jié)論

本文采用高效液相色譜法測(cè)定林可霉素利多卡因凝膠中鹽酸利多卡因的含量，建立了鹽酸利多卡因的含量測(cè)定方法. 通過(guò)建立的方法對(duì)國(guó)家評(píng)價(jià)性抽檢的10家生產(chǎn)企業(yè)的214批次林可霉素利多卡因凝膠中鹽酸利多卡因的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)生產(chǎn)的制劑中鹽酸利多卡因的含量較低，制劑的質(zhì)量和療效未得到有效保證.