姜慧禎，劉學(xué)杰,王軍棟，崔小菲，劉曉靜，李星辰，李俊強(qiáng)

(煙臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 煙臺(tái) 264670)

蒲地藍(lán)消炎片是由黃芩、蒲公英、苦地丁、板藍(lán)根4味藥材制成的中藥復(fù)方制劑，具有清熱解毒、抗炎消腫的作用,臨床上主要用于治療癤腫、腮腺炎、咽炎、淋巴腺炎、扁桃腺炎等癥[1-2]。該制劑現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)第三冊(cè)(標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS3-B-0649-91)和各企業(yè)申請(qǐng)?jiān)瓏?guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的單頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)，部頒標(biāo)準(zhǔn)收載項(xiàng)目包括性狀和常規(guī)檢查項(xiàng)，其他各企業(yè)自己申請(qǐng)的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，檢驗(yàn)項(xiàng)目設(shè)置參差不齊，存在個(gè)別企業(yè)利用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的缺陷，少投或投劣質(zhì)藥材的風(fēng)險(xiǎn)，本研究在充分考察了蒲地藍(lán)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上[3-5]，采用了顯微及薄層色譜對(duì)處方中的黃芩進(jìn)行了鑒別，采用簡(jiǎn)單易操作且受干擾較少的薄層色譜法對(duì)蒲公英、苦地丁以及板藍(lán)根進(jìn)行定性分析，本文用高效液相色譜(HPLC)方法對(duì)黃芩中黃芩苷的含量測(cè)定進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，HPLC法能夠有效地測(cè)量蒲地藍(lán)消炎片中黃芩苷的含量，通過(guò)此方法能夠較好的對(duì)蒲地藍(lán)消炎片的質(zhì)量進(jìn)行控制。

1 儀器與試藥

奧林巴斯 BX51 電子顯微鏡；安捷倫1200高效液相色譜儀；島津 Auw120D電子天平；昆山市超聲儀器有限公司KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器。硅膠G板購(gòu)自青島基億達(dá)硅膠試劑有限公司；甲醇為色譜純(Honeywell)；水為Millipore制水機(jī)制備；其他試劑為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

黃芩對(duì)照藥材(批號(hào)：120955-201309)、黃芩苷(批號(hào)：110715-201720，供含量測(cè)定用，含量以93.5%計(jì))、咖啡酸對(duì)照品(批號(hào)：110885-200102)、苦地丁對(duì)照藥材(批號(hào)：120990-201406)、板藍(lán)根對(duì)照藥材(批號(hào)：121177-201608)、(R，S)-告依春對(duì)照品(批號(hào)：111753-201706,含量以100.0%計(jì))均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。試驗(yàn)中所用蒲地藍(lán)消炎片(批號(hào)：170901、170902、170903)及陰性樣品由煙臺(tái)渤海藥物研究院自制。

2 黃芩的顯微鑒別

取本品10片，除去包衣，研細(xì)，取約2 g，加10倍量水?dāng)噭?，放置，棄去上清液，取沉淀物，采用水合氯醛裝片，置顯微鏡下觀察：韌皮纖維單個(gè)散在或數(shù)個(gè)成束，梭形，長(zhǎng)60～250 μm，直徑9～33 μm，壁厚，孔溝細(xì)。石細(xì)胞類圓形、類方形或長(zhǎng)方形，壁較厚。木栓細(xì)胞棕黃色，多角形。網(wǎng)紋導(dǎo)管多見，直徑24～72 μm。木纖維多碎斷，直徑約12 μm，有稀疏斜紋孔[6]。

3 薄層色譜鑒別

3.1 黃芩 取本品適量，研細(xì)，取本品粉末2 g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)的混合溶液30 mL，置100 mL圓底燒瓶水浴回流30 min，放冷至室溫，濾過(guò)，濾液置蒸發(fā)皿蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，上清液濾過(guò)作為供試品溶液[1]。另取黃芩對(duì)照藥材1 g及缺黃芩藥材的陰性樣品2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液及黃芩陰性對(duì)照溶液。取上述制備液于同一色譜板展開，結(jié)果見圖1。

3.2 蒲公英 取本品適量，研細(xì)，取粉末約2 g，置100 mL具塞錐形瓶，取約20 mL 5%甲酸的甲醇溶液至錐形瓶，超聲，20 min后取出錐形瓶，濾過(guò)，濾液置蒸發(fā)皿揮干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，將溶液轉(zhuǎn)移至100 mL分液漏斗，加乙酸乙酯2次，每次10 mL，振搖提取，合并乙酸乙酯層溶液置蒸發(fā)皿揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液[6]。同法取缺蒲公英藥材的陰性樣品2 g，制備缺蒲公英的陰性對(duì)照溶液。另取咖啡酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述制備液于同一色譜板展開，結(jié)果見圖2。

1.黃芩對(duì)照藥材；2.缺黃芩陰性樣品；3～5.蒲地藍(lán)消炎片樣品圖1 黃芩鑒別薄層色譜圖

1.咖啡酸對(duì)照品；2.缺蒲公英陰性樣品；3～5.蒲地藍(lán)消炎片樣品圖2 蒲公英鑒別薄層色譜圖

3.3 苦地丁 取本品適量，研細(xì)，取粉末約2 g，置100 mL具塞錐形瓶，濃氨試液0.5 mL使?jié)櫇瘢尤燃淄?0 mL，放置12 h，濾過(guò)，濾液置蒸發(fā)皿揮干，殘?jiān)尤燃淄? mL溶解，作為供試品溶液[6]。另取苦地丁對(duì)照藥材1 g及缺苦地丁藥材的陰性樣品2 g，同法制成對(duì)照藥材及缺苦地丁陰性溶液。取上述制備液于同一色譜板展開，結(jié)果見圖3。

1.苦地丁對(duì)照藥材；2.缺苦地丁陰性樣品；3～5.蒲地藍(lán)消炎片樣品圖3 苦地丁鑒別薄層色譜圖

3.4 板藍(lán)根 取本品適量，研細(xì)，取粉末約3 g，置100 mL具塞錐形瓶，加80%甲醇20 mL，超聲30 min，濾過(guò)，濾液置蒸發(fā)皿揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取(R，S)-告依春對(duì)照品，加甲醇制備成每1 mL含0.5 mg對(duì)照品的溶液，作為對(duì)照品溶液[6]。另取板藍(lán)根對(duì)照藥材1 g及缺板藍(lán)根藥材的陰性樣品3 g，按照供試品制備方法制備成對(duì)照藥材溶液及缺板藍(lán)根陰性溶液。取上述制備液于同一色譜板展開，結(jié)果見圖4。

1.板藍(lán)根對(duì)照藥材；2.(R,S)-告依春對(duì)照品；3.缺板藍(lán)根陰性樣品；4～6.蒲地藍(lán)消炎片樣品圖4 板藍(lán)根鑒別薄層色譜圖

4 黃芩苷的含量測(cè)定

4.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性 采用Capcell PAK C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)為色譜柱，采用甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為1.0 mL·min-1，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫為30 ℃[7-8]。黃芩苷及相鄰峰的分離度應(yīng)大于1.5，理論塔板數(shù)按照黃芩苷峰計(jì)算不應(yīng)低于3 000。

4.2 溶液的制備

4.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對(duì)照品12.52 mg，置250 mL容量瓶，加甲醇適量超聲使溶解，冷卻至室溫，加甲醇制成每1 mL含黃芩苷46.82 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

4.2.2 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的本品20片(糖衣片除去包衣)，精密稱定，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置150 mL圓底燒瓶，加70%的乙醇40 mL，置水浴回流3 h，放冷置室溫，濾過(guò)，將圓底燒瓶用少量70%乙醇分次洗滌并同濾液轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶并定容至刻度，混合均勻后，精密量取1 mL儲(chǔ)備液置10 mL量瓶中，定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液[3]。

4.2.3 陰性供試品溶液 取缺黃芩藥材的陰性樣品0.5 g，按照“4.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

4.3 陰性干擾試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，按照“4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：樣品溶液及黃芩苷對(duì)照品溶液色譜峰表現(xiàn)良好，且樣品中黃芩苷色譜峰分離度符合系統(tǒng)適用性要求，陰性樣品在相應(yīng)位置無(wú)干擾，結(jié)果見圖5。

A.黃芩苷對(duì)照品；B.樣品；C.陰性對(duì)照?qǐng)D5 HPLC色譜圖

4.4 方法學(xué)考察

4.4.1 線性關(guān)系考察 取對(duì)照品溶液，分別按照“4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣1、5、10、15、20 μL，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)和峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，回歸方程Y=12.193X-0.957 5，R2=0.999 7。結(jié)果表明，在此試驗(yàn)條件下，黃芩苷進(jìn)樣量在5.008～100.16 μg時(shí)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

4.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μL，按照上述“4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣5次，精確記錄黃芩苷色譜峰峰面積，結(jié)果RSD為0.42%(<2%),表明儀器精密度良好。

4.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液(批號(hào)：170901)10 μL，按照“4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。每隔2 h測(cè)定1次，共測(cè)定5次，結(jié)果供試品峰面積RSD為0.52%。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

4.4.4 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取同一批號(hào)已知含量的蒲地藍(lán)消炎片(批號(hào)：170901，含量45.53 mg·g-1)9份，每份0.25 g，精密加入黃芩苷對(duì)照品分別為5.56、11.12、16.68 mg，按照“4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定黃芩苷，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知本測(cè)定方法的回收率高，平均加樣回收率為98.87%(n=9)，RSD為0.95%,符合含量測(cè)定的要求。

4.5 樣品的測(cè)定 按“4.1”項(xiàng)下色譜條件，取不同批號(hào)的自制樣品制成供試品溶液，將對(duì)照品和供試液進(jìn)樣10 μL，求得含量，結(jié)果見表2。

表2 自制蒲地藍(lán)消炎片黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果

5 結(jié)果與討論

5.1 本次試驗(yàn)共檢測(cè)9批蒲地藍(lán)消炎片樣品(3批自制，6批市售)的黃芩苷含量，3批自制樣品所用黃芩藥材為3批，含量分別為8.1%、6.7%、8.9%，自制樣品中測(cè)得的黃芩苷結(jié)果在11.38～15.11 mg/片,市售6批樣品中黃芩苷的含量分別為14.17～18.21 mg/片。

蒲地藍(lán)消炎片樣品在制備以及后期處理過(guò)程中黃芩苷按照損失20%計(jì)，按照《中國(guó)藥典》2015年版(一部)黃芩中黃芩苷含量不得低于8.0%，蒲地藍(lán)消炎片每片含黃芩苷(C11H19O11)不得低于10.0 mg應(yīng)為合理限度。

5.2 本研究所建立的質(zhì)量控制方法簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確可靠，可有效控制蒲地藍(lán)消炎片的質(zhì)量。