趙青海 胡 毅

（1.北京中農(nóng)穎泰生物技術(shù)有限公司，北京100193；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖北武漢430070）

土霉素鈣屬于四環(huán)素類抗生素， 抗菌譜較廣。 自2017 年硫酸粘桿菌素在飼料中禁用之后， 土霉素鈣作為替代品大量使用在各個階段的主商品飼料中， 作為主要的抗生素品種，對于減少仔豬斷奶腹瀉， 促進(jìn)生長具有一定的作用。 然而， 土霉素鈣如果長期超量添加，存在非常嚴(yán)重的耐藥性問題， 各企業(yè)和研究機(jī)構(gòu)深刻認(rèn)識到這一點(diǎn)， 并積極尋求解決之道。 2019 年7 月10 日農(nóng)村農(nóng)業(yè)部發(fā)布194 號公告， 明確在2020 年7 月1 日前， 飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長類藥物飼料添加劑的商品飼料， 故尋找土霉素鈣的替代產(chǎn)品以及方案， 具有非常重大的意義。

腸桿菌肽最早是由1993 年美國普林斯頓大學(xué)從腸道細(xì)菌中分離出一類分子量小于2.5KD (千道爾頓） 的索套結(jié)構(gòu)肽， 由21 個氨基酸組成， 分子質(zhì)量為2.1kDa， 其中N 端的8 個氨基酸形成一個圓形的環(huán)狀結(jié)構(gòu)， 9-21氨基酸形成β 發(fā)夾結(jié)構(gòu)， 貫穿圓環(huán)， 故其性質(zhì)非常穩(wěn)定， 對高溫、 蛋白酶有良好耐受性。腸桿菌肽對革蘭氏陰性菌具有強(qiáng)烈的殺滅作用， 在微生物實驗室條件下， 針對大腸桿菌，沙門氏菌等主要有害菌可以做遠(yuǎn)低于土霉素鈣的最低抑菌濃度。 本試驗在斷奶仔豬日糧中添加腸桿菌肽替代原配方中的土霉素鈣， 研究并驗證其對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響， 旨在為腸桿菌肽替代土霉素鈣提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

腸桿菌肽（抗菌肽含量0.5%）， 林州中農(nóng)穎泰生物肽有限公司提供。 20%土霉素鈣， 正大集團(tuán)購買。

1.2.1 試驗動物及設(shè)計 挑選8 欄健康的平均斷奶日齡在21 日齡左右、 斷奶方式一致、 平均斷奶體重在7-8 公斤的仔豬， 分為2個組， 每組3 個重復(fù)， 每個重復(fù)20 頭左右，各處理間初始體重?zé)o明顯差異。 試驗前3 天保健， 不使用抗生素等藥物， 試驗期為16d。 試驗用基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平見表1。 各個處理組日糧中藥物添加見表2。 試驗豬在斷奶前按豬場的正常飼養(yǎng)管理規(guī)定進(jìn)行飼養(yǎng)和免疫。試驗期間自由采食， 供給衛(wèi)生的飲水， 并進(jìn)行嚴(yán)格的環(huán)境監(jiān)控， 以保證實驗的準(zhǔn)確性。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平

營養(yǎng)濃度

表2 各處理組日糧藥物添加方案

1.2.2 檢測指標(biāo)與方法

1.2.2.1 記錄指標(biāo)

記錄每欄仔豬初重、 末重、 飼料消耗量，每天記錄每欄采食量折算每頭日采食量， 早晚中晚各觀察一次仔豬腹瀉情況。

1.2.2.2 計算指標(biāo)：

日增重（g/d） = （試驗?zāi)┛傊?試驗期死亡/淘汰的動物總重-試驗初總重） /試驗頭數(shù)， 其中試驗頭日數(shù)應(yīng)包括被淘汰的豬試驗天數(shù)在內(nèi)。

料肉比=總耗料/總增重

腹瀉率= （腹瀉頭數(shù)* 腹瀉天數(shù)） /（試驗豬頭數(shù)* 試驗天數(shù)） *100%

2 結(jié)果與分析

腸桿菌肽替代土霉素鈣對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響腸桿菌肽替代土霉素鈣對斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉率的影響見表3。 同土霉素鈣組相比， 抗菌肽組日增重提高了4%、 采食 量 提 高 了2.2% （P ＞0.05）、 料 肉 比 增 加0.8%， 腹瀉率降低12.4%， 整個試驗期無仔豬死亡。

表 3 腸桿菌肽替代土霉素鈣對斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉率的影響

3 討論

自抗生素發(fā)明以來， 抗生素不僅僅對人類的健康產(chǎn)生了巨大的作用， 并且在動物的健康以及生產(chǎn)性能的提高有著不可磨滅的貢獻(xiàn)，極大地豐富了我們對動物食品的需求。

然而隨著時代的發(fā)展， 抗生素也展現(xiàn)出來了它有害的一面。 近30 年來， 抗生素在動物飼料中的使用量日漸增長， 品種也日漸豐富，隨之而來是我們必須面對的兩個問題： 其一是動物本身對抗生素產(chǎn)生耐藥性的問題， 需要不停地增加使用量才能維持同樣的效果，最終導(dǎo)致某類抗生素失效。 其二是在商品飼料以及養(yǎng)殖現(xiàn)場抗生素的使用量過量導(dǎo)致的食品安全問題。 非抗生素類物質(zhì)替代抗生素在動物生產(chǎn)過程中使動物保持健康和穩(wěn)定的生產(chǎn)性能， 是我們必須面對的課題， 抗菌肽就是其中一個非常重要的研究方向。

抗菌肽分子量小、 水溶性好、 熱穩(wěn)定性較高、 生物功能多樣， 有著與傳統(tǒng)抗生素不同的殺菌機(jī)制， 不易導(dǎo)致耐藥性菌株的產(chǎn)生。目前全球共發(fā)現(xiàn)的抗菌肽已達(dá)到兩千多種。腸桿菌肽是一種優(yōu)質(zhì)的抗菌肽， 研究顯示，腸桿菌肽不僅僅對革蘭氏陰性菌具有非常明確的殺滅作用， 而且因其膜穿孔的殺菌機(jī)制，極難產(chǎn)生耐藥性， 符合抗生素替代品的發(fā)展趨勢。 Sophie 等（2000） 研究發(fā)現(xiàn)， 腸桿菌肽純品對E.coli O157：H7 最低抑菌濃度為1μg/ml。Fabian 等（2007） 研究顯示， 其對沙門氏菌最低抑菌濃度為3.12μg/ml， 以上研究表明， 腸桿菌肽最主要的兩種導(dǎo)致動物生產(chǎn)性能降低和腹瀉的兩種革蘭氏陰性菌作用確切。

針對養(yǎng)殖現(xiàn)場， 研究者們對現(xiàn)場采集的大腸桿菌野生毒株進(jìn)行了最低抑菌濃度的測定。研究結(jié)果表明， 20%土霉素鈣和0.5%腸桿菌肽對大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922 都有很強(qiáng)的抑菌效果； 而0.5%腸桿菌肽大腸桿菌野生毒株的抑制效果明顯高于20%土霉素鈣； 土霉素鈣對CVCC50094 表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑菌效果，但對野生型沙門氏菌， 0.5%腸桿菌肽對大部分沙門氏菌的MIC 小于20%土霉素鈣， 效果較好。 無論是在實驗室， 還是在生產(chǎn)現(xiàn)場， 新型抗菌肽腸桿菌肽均能體現(xiàn)出較好的抑菌能力， 做到了替代抗生素， 但避免了使用抗生素的弊端， 是在無抗時代下一個值得深入研究并推廣的選項。