韓 劍，肖 力，羅 明，潘亞南，寧 軒

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，烏魯木齊 830052；2.新疆自治區(qū)高校農(nóng)林有害生物監(jiān)測與安全防控重點實驗室，烏魯木齊 830052)

中國甜瓜種植面積和總產(chǎn)量居世界首位。新疆是甜瓜(厚皮甜瓜)的優(yōu)勢產(chǎn)區(qū)，其味甜色美，品質(zhì)獨(dú)特，素有“瓜中之王”的美稱，是享譽(yù)國內(nèi)外的名優(yōu)特產(chǎn)。病毒病是當(dāng)前新疆甜瓜生產(chǎn)中的首要病害，發(fā)生普遍、流行嚴(yán)重，造成甜瓜含糖量降低，品質(zhì)低劣，經(jīng)濟(jì)效益下降，很大程度上制約了甜瓜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

國內(nèi)外報道危害瓜類作物的病毒已達(dá)86種之多[1]，其中在中國危害嚴(yán)重的主要有小西葫蘆黃花葉病毒 (Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV) 、西瓜花葉病毒 (Watermelon mosaic virus，WMV) 、CMV、甜瓜壞死斑點病毒 (Melon necrotic spot virus， MNSV)、番木瓜環(huán)斑病毒 (Papaya ringspot virus，PRSV) 、南瓜花葉病毒(Squash mosaic virus，SqMV)等[2]。2016年潘亞南等[3]對新疆吐魯番、鄯善、昌吉哈密瓜產(chǎn)區(qū)病毒病進(jìn)行檢測，檢出CMV、 WMV、 ZYMV和MNSV，其中CMV是優(yōu)勢毒原，檢出率最高70%。李繼洋等[4]運(yùn)用多重RT-PCR技術(shù)檢測新疆南、北疆16個地區(qū)(市)哈密瓜主栽區(qū)的病毒病發(fā)生及分布，發(fā)現(xiàn)WMV、CMV、ZYMV3種病毒發(fā)生普遍。古勤生[2]發(fā)現(xiàn)，CMV現(xiàn)在中國北方地區(qū)葫蘆科作物病毒病樣本中的檢出率僅次于WMV和ZYMV，是危害葫蘆科作物的主要病毒之一。

黃瓜花葉病毒(CMV)寄主廣泛，能侵染85科、365屬、1000種以上的單、雙子葉植物，是目前世界范圍內(nèi)發(fā)生最普遍、分布最廣、危害最嚴(yán)重的植物病毒之一。CMV是典型的種傳病毒[5]。攜帶病毒的種子不僅形成帶毒幼苗作為病毒病害發(fā)生的初侵染源，再經(jīng)昆蟲媒介的二次傳播形成發(fā)病中心，引發(fā)病毒病大面積爆發(fā)。新疆是全國最大的西瓜和甜瓜制種基地，承擔(dān)著多家大型跨國種業(yè)公司制種任務(wù)，帶毒種子隨種子調(diào)運(yùn)和種質(zhì)資源交流遠(yuǎn)距離傳播擴(kuò)散，對病毒病的發(fā)生、傳播影響極大。因此，加強(qiáng)種子檢測、采取有效的種子脫毒處理措施，從源頭杜絕病原是控制種傳病毒病發(fā)生蔓延和安全防控的重要舉措，具有事半功倍的成效。采用干熱處理、溫湯浸種、輻射、化學(xué)藥劑等種子處理技術(shù)具有鈍化、脫除種子攜帶病毒的作用，是一種減輕病毒病害的經(jīng)濟(jì)有效的措施。日本和韓國采用種子脫毒處理技術(shù)在有效控制瓜類檢疫性種傳病毒黃瓜綠斑駁花葉病毒(Cucumber greenmottle mosaic virus， CGMMV)方面取得了良好的效果。張竹青[6]試驗比較了8種辣椒種子處理方式對CMV、煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)的防治效果。任琛榮等[7]應(yīng)用多重PCR技術(shù)檢測籽用西葫蘆種子的CMV、ZYMV及WMV帶毒情況及熱處理的脫毒效果，針對不同病毒、不同種子采取的脫毒方法不同，脫毒效果各異。對新疆甜瓜種子的CMV帶毒及有效脫除病毒的研究尚未見報道。

本研究采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測甜瓜種子中的CMV帶毒率，比較不同種子處理方法對種子攜帶CMV的脫除效果，明確脫除種子攜帶CMV的有效措施，為甜瓜病毒病害的安全、高效防控提供科學(xué)基礎(chǔ)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試甜瓜種子 ‘春瀟2號’‘優(yōu)密17號’‘欣豐密’‘樓蘭17號’‘春秋17號’均采自新疆維吾爾自治區(qū)葡萄瓜果研究所甜瓜試驗地，‘春秋17號’采自五家渠102團(tuán)病毒病發(fā)生病田。將采集的不同品種甜瓜內(nèi)的種子剖出，自然陰干后，保存于4 ℃冰箱中，冷藏期10～12個月。

1.1.2 試劑 TRNzol總RNA提取試劑、Quant cDNA第1鏈合成試劑盒、普通瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒(TIANgel Midi Purification Kit)、質(zhì)粒小提試劑盒(TIANprep Mini Plasmid Kit)、氨芐青霉素、X-gal、IPTG等購于北京天根生化科技有限公司。pEASY-T1連接試劑盒與Trans-T1感受態(tài)細(xì)胞購于北京全式金生物科技有限公司。限制性內(nèi)切酶EcoR Ⅰ為Promega公司產(chǎn)品。Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix購于Thermo公司。

1.2 方 法

1.2.1 CMV的SYBR Green Real-time PCR 定量檢測體系 利用已建立和優(yōu)化的CMV SYBRGreen Real-time PCR檢測體系。CMV正向引物序列(5′→3′)：AGTCCGTAAAGTTCCTGC，反向引物序列(5′→3′)TCATGTCGCCAATATCA，目標(biāo)片段180 bp。反應(yīng)體系(20 μL)：Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix(2×)10 μL；引物各0.4 μL(10 μmol/L)；模板1 μL；補(bǔ)足ddH2O至20 μL。反應(yīng)條件為：50 ℃預(yù)熱 2 min；95 ℃預(yù)變性4 min；95 ℃變性30 s， 60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共40個循環(huán)。

1.2.2 CMV定量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 以構(gòu)建的CMV-CP基因陽性克隆質(zhì)粒(質(zhì)粒質(zhì)量濃度測定為155.16 ng/μL，相應(yīng)的拷貝數(shù)為7.87×1011拷貝/μL)的10×梯度稀釋液(100～109)為模板進(jìn)行SYBR Green實時熒光定量PCR反應(yīng)擴(kuò)增，觀察其溶解曲線。根據(jù)質(zhì)粒拷貝數(shù)的對數(shù)和循環(huán)數(shù)(Ct值)之間的動力學(xué)曲線，得到定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

對建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線做重復(fù)性檢測。以CMV-CP基因陽性克隆質(zhì)粒的稀釋液為模板，進(jìn)行3次重復(fù)性試驗擴(kuò)增，根據(jù)Ct值的變異系數(shù)來檢驗所建立體系的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

1.2.3 甜瓜種子、胚芽和種苗的帶毒檢測 甜瓜種子、胚芽和種苗總RNA 的提取和cDNA的合成：種子，各品種均取30粒種子，無菌水浸泡過夜后帶種皮提取總RNA。胚芽，取待測甜瓜品種各30粒浸泡后，置于滅菌培養(yǎng)皿中(皿底鋪有濾紙保濕，28 ℃催芽，待胚芽長出1～1.5 cm時，取胚芽提取總RNA。種苗，將甜瓜種子催芽后播種于裝有高溫滅菌土壤的花盆中，培養(yǎng)于防蟲溫室中。幼苗生長至3～4片真葉時，取葉片提取總RNA。每個品種測定30株幼苗。

采用TRNzol試劑盒提取總RNA。同時提取已檢測感染CMV和健康的甜瓜葉片總RNA分別作為陽性和陰性對照。利用Quant cDNA第1鏈合成試劑盒對提取的總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。

帶毒率和帶毒量檢測：以提取的甜瓜種子RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA為模板，利用所建立的CMV SYBR Green實時熒光定量PCR檢測體系對甜瓜種子帶毒情況進(jìn)行檢測，同時設(shè)置感病和健康甜瓜葉片樣品cDNA分別為陽性和陰性對照，以超純?nèi)ルx子水為空白對照。

統(tǒng)計帶毒率：帶毒率=(檢出病毒種子數(shù)/抽檢種子總數(shù))×100%

將檢出陽性樣品的Ct均值代入標(biāo)準(zhǔn)方程，計算種子帶毒量。

1.2.4 甜瓜種子脫毒處理 對檢測出攜帶CMV的種子，分別通過以下5種方法進(jìn)行處理(各處理30粒種子)，重復(fù)3次。

(1)干熱處理：在65 ℃條件下，熱風(fēng)處理甜瓜種子48 h；(2)濕熱處理：將待脫毒處理的甜瓜種子放在沸水(100 ℃)中(沸水體積大約為種子體積的5倍)，快速振蕩使其在沸水中冷卻；(3)溫湯處理：用55 ℃的溫水浸種40 min；(4)干熱+濕熱處理：先將甜瓜種子在65 ℃條件下熱風(fēng)處理48 h，之后將種子浸于5倍于種子體積的沸水中，快速振蕩使其冷卻；(5)干熱+10%Na3PO4處理：在65 ℃條件下，熱風(fēng)處理種子48 h，之后用10%的Na3PO4溶液浸種40 min。

1.2.5 種子及種苗脫毒效果檢測 種子脫毒檢測：不同處理種子總RNA的提取及cDNA的合成方法同“1.2.3”。采用CMV SYBR Green實時熒光定量PCR檢測體系對處理種子進(jìn)行帶毒量檢測，計算脫毒率。以未經(jīng)熱處理及室溫滅菌水浸泡的種子為對照。

脫毒率=(1-處理后的帶毒量/處理前種子帶毒量)×100%。

種子幼苗脫毒檢測：對干熱處理和干熱+Na3PO4處理后的種子幼苗進(jìn)行脫毒效果檢測。將干熱處理和干熱+Na3PO4處理后的種子先進(jìn)行催芽，待出芽后分別播種于塑料育苗缽中，育苗基質(zhì)為滅菌土，人工氣候箱中常規(guī)培養(yǎng)。幼苗生長至3葉1心時檢測葉片帶毒量，方法同“1.2.5”。

1.2.6 脫毒處理種子發(fā)芽試驗 處理后種子先用流水洗凈，然后冷水浸泡4 h，將種子取出放入培養(yǎng)皿中發(fā)芽，培養(yǎng)皿墊一層濾紙，加適量滅菌水，加蓋放在恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)芽，發(fā)芽溫度為 28 ℃，第3天統(tǒng)計發(fā)芽數(shù)，計算發(fā)芽勢，第7天統(tǒng)計發(fā)芽數(shù)，計算發(fā)芽率，發(fā)芽的標(biāo)準(zhǔn)為種子露白。不作處理的種子用冷水浸泡4 h作為對照。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)用EXCEL 2016和SPSS 22.0 軟件分析，比較各處理間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 CMV Real-time PCR定量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

以CMV-CP陽性重組質(zhì)粒不同質(zhì)量濃度所對應(yīng)的拷貝數(shù)的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，循環(huán)數(shù)(Ct值)為縱坐標(biāo)構(gòu)建CMV SYBR Green實時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)。由圖1可以看出，CMV陽性質(zhì)粒模板不同質(zhì)量濃度對應(yīng)的拷貝數(shù)的log值與Ct値之間具有良好的線性關(guān)系，得到CMV標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=-3.987 2x+54.128(R2= 0.998 7)，可用于對供試樣品病毒含量的定量分析。

圖1 CMV定量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of CMV quantitative detection

表1 實時熒光定量PCR對樣品的重復(fù)性檢測Table 1 Repetitive detection of same samples by Real-time PCR

對建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線做重復(fù)性檢測(表1)，對CMV-CP基因陽性克隆質(zhì)粒同一稀釋液模板的3次擴(kuò)增Ct值誤差不到1個循環(huán)，Ct值變異系數(shù)(CV)為1.52%。結(jié)果表明，本研究所建立的CMV實時熒光定量PCR檢測體系的重復(fù)性較好，能夠保證不同樣品間檢測結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。

2.2 對甜瓜種子、胚芽和種苗中CMV帶毒檢測

對供試甜瓜種子、胚芽和種苗中CMV帶毒狀況進(jìn)行定量檢測，結(jié)果見表2。不同品種的甜瓜種子、胚芽和種苗中CMV帶毒率、帶毒量差異較大。種子帶毒率為80%～96.6%，帶毒量為 6.62×104～5.47×107拷貝/粒。其中‘優(yōu)密17號’‘樓蘭17號’和‘欣豐密’帶毒率均高達(dá) 96.6%，‘春瀟2號’帶毒率相對較低，但帶毒量最高。胚芽帶毒率為5.0%～25.0%，帶毒量為 3.78×104～1.00×106拷貝/粒?！畠?yōu)密17號’胚芽帶毒率和帶毒量均為最高，‘欣豐密’則為最低。種苗帶毒率0～6.6%，帶毒量0～4.59×104拷貝/粒，‘春秋17號’種苗帶毒率和帶毒量均為最高，而‘優(yōu)密17號’種苗中未檢出陽性株。

檢測結(jié)果表明，CMV在甜瓜種子、胚芽和種苗中的帶毒率和帶毒量差異顯著。種子的CMV帶毒率(均值92%)和帶毒量(均值9.74×106拷貝/粒)均為最高，其次是胚芽，帶毒率(均值 13.00%)和帶毒量(均值1.16×105拷貝/粒)顯著減少；種苗為最低，其帶毒率(傳毒率)為 3.30%(均值)，帶毒量為4.18×104拷貝/粒(均值)。

表2 實時熒光定量PCR對甜瓜種子、胚芽和種苗中CMV病毒的檢測結(jié)果Table 2 Detection results of CMV in seeds,plumule and seedlings of melon by real-time PCR assay

注：同列不同字母表示經(jīng)ANOVA檢驗在P<0.05水平差異顯著,下同。

Note:Data with different letters in the same column indicate significant difference atP<0.05 level by ANOVA test，the same below.

2.3 對甜瓜種子中CMV的脫除效果

分別采用干熱、濕熱、溫湯、干熱+濕熱及干熱+10%Na3PO4處理CMV帶毒量較高的‘春瀟2號’甜瓜種子。由表3可見，各處理方法均能在一定程度上降低種子帶毒量，脫毒率為 49.77%～98.93%，不同處理的脫毒效果差異較大。干熱、濕熱、干熱+濕熱和干熱+10%Na3PO4處理甜瓜種子的效果較好，脫毒率均達(dá)到了96%以上，顯著優(yōu)于溫湯處理(P<0.05),干熱處理可達(dá)98.93%，脫毒效果最佳。溫湯處理的脫毒效果最差,脫毒率僅為49.77%。

干熱和干熱+10%Na3PO4處理后的種子脫毒率均可達(dá)98%以上(表3)。進(jìn)一步檢測其種子處理后對種苗的脫毒率，結(jié)果見表4，未經(jīng)處理的種苗帶毒率為4.44%，但干熱處理其幼苗傳毒率可達(dá)3.33%，帶毒量4.57×105copies/g 鮮質(zhì)量，而種子經(jīng)干熱+10%Na3PO4處理后，其幼苗中檢測不出病毒，可完全脫除病毒。

2.4 脫毒處理對種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢的影響

對脫毒處理后的甜瓜種子，測定其發(fā)芽率和發(fā)芽勢的變化，結(jié)果如圖2所示。除溫湯處理外，其他處理的種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢均高于對照組，對種子發(fā)芽有一定的促進(jìn)作用。干熱+濕熱和干熱+10%Na3PO4處理能明顯提高種子的發(fā)芽率，對種子的發(fā)芽勢影響不大。溫湯處理對種子發(fā)芽有一定的抑制作用，降低了種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢。

表3 不同處理對甜瓜種子中CMV脫毒效果的影響Table 3 Effect of different treatments on elimination CMV in melon seeds

注：數(shù)據(jù)為3次重復(fù)試驗的“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”。

Note: Data represent “mean ± SD”.

表4 不同處理對種苗中CMV病毒脫除效果的影響Table 4 Effect of different treatments on elimination CMV in melon seedlings

圖上不同字母表示差異顯著(P<0.05) Different lowercase letters indicate significant difference(P<0.05)

3 討 論

3.1 甜瓜種子中CMV的帶毒率和傳毒率

本研究采用Real-time PCR技術(shù)對甜瓜種子CMV的攜帶情況進(jìn)行定量檢測，結(jié)果表明，供試甜瓜種子均能檢出CMV，其帶毒率(均值92%)和帶毒量(均值9.43×104拷貝/粒)均較高，不同品種有一定差異。攜帶病毒的種子能否形成感染病毒的幼苗造成病毒在田間傳播的初侵染源受多種因素的影響。研究認(rèn)為，種子傳播病毒不僅受病毒本身、帶毒量、帶毒部位的影響,還與作物品種、感病時間、環(huán)境條件以及病毒-植物互作有關(guān)[8]。Akhtar等[9]試驗發(fā)現(xiàn),CMV侵染辣椒后檢測辣椒種子表皮帶毒率為53%～83%，而生長試驗檢測傳毒率平均為10%～14%，種子表皮帶毒率比種子傳毒率高很多，主要以種皮帶毒為主。研究表明,大多數(shù)病毒在種皮或胚乳帶毒通常不能通過種子傳毒，只有病毒在母株幼苗期和授粉前侵染進(jìn)入種胚，產(chǎn)生的帶毒種子才具有種傳特性[10]，因此將種胚與種皮分開后進(jìn)行檢測,方能獲得準(zhǔn)確的種傳率。本研究通過檢測甜瓜整粒種子、發(fā)芽種子的胚芽和種苗的CMV帶毒狀況，發(fā)現(xiàn)胚芽的帶毒率(均值13.00%)、帶毒量(3.04×103拷貝/粒)都遠(yuǎn)低于種子，表明CMV主要存在于甜瓜種子的種皮上。供試的甜瓜種苗傳毒率為 0～6.6%(均值4.4%)，其胚芽帶毒率、帶毒量與種苗傳毒率具有一定的相關(guān)性。但也有例外，如‘優(yōu)密17號’的胚芽帶毒率(25%)、帶毒量 ( 7.86×103拷貝/粒)均為最高，但在種苗中卻并未檢出帶毒病株。據(jù)報道，黑眼豇豆花葉病毒唯有當(dāng)其侵染寄主胚軸組織時，才能導(dǎo)致種子傳毒[11]。同一病毒在植物的不同品種中的傳毒情況也不同，CMV能通過野生黃瓜種子傳毒，卻不能通過栽培品種的黃瓜種子傳毒[12]，可見病毒的侵染、存在部位與種傳率的關(guān)系較為復(fù)雜。在本研究中，CMV主要是通過甜瓜種子的胚芽、胚軸或其他部位傳毒，可否通過甜瓜種皮傳毒，‘優(yōu)密17號’是否能種傳CMV等均需經(jīng)反復(fù)試驗證實。

不少研究表明，大多數(shù)種傳病毒的傳毒率不高。本研究測定的5個品種的甜瓜種子對CMV的平均傳毒率為3.3%，不同品種種子的傳毒率存在差異。任琛榮等[7]檢測籽用西葫蘆種子幼苗的CMV傳毒率，7個品種種子的CMV的平均傳毒率為67.1%，‘綠豐9號’(92%)最高，而‘粒豐9號’最低(50%)，遠(yuǎn)高于甜瓜種子的CMV傳毒率。這種差異可能是由于CMV感染寄主時期不同從而引起種子感染病毒的程度和部位的不同，也可能與CMV毒株的株系不同有關(guān)。此外，有試驗發(fā)現(xiàn)，感染CGMMV黃瓜種子收獲后1個月檢測種傳率為8%，但種子保存5個月后種傳率降低到0.1%[13]。本研究中的甜瓜種子保存已近1 a，可能也會影響其傳毒率改變。研究結(jié)果均說明不同寄主對同種病毒的傳毒率不同，同一病毒的不同分離物對同種寄主傳毒率也會改變。

3.2 甜瓜種子中CMV的脫毒方法及效果評價

種子處理方式主要包括溫湯浸種、微波處理、干熱空氣處理和化學(xué)藥劑處理等[14]。Rast等[15]利用熱空氣處理、干熱處理、10%磷酸鈉處理帶有辣椒花葉病毒(Capsicum mosaic virus，CaMV)的辣椒種子，76 ℃處理3 d并貯存3個月后，可有效滅活種子中的病毒，但嚴(yán)重影響種子萌發(fā)。用熱空氣處理(74 ℃處理48 h或80 ℃處理24 h)番茄種子，消除其攜帶的柏平縷瓜花葉病毒(Pepino mosaic virus，PepMV)，能基本滅活病毒，而在鈍化病毒的同時，也影響到了種子萌發(fā)[16]。因此，在種子脫毒處理中，如何確定鈍化病毒的技術(shù)指標(biāo)，做到既能最大限度地鈍化病毒，又不降低種子的發(fā)芽活力是一個關(guān)鍵問題。

目前，常用的種子脫毒效果的檢測方法主要有種植幼苗癥狀觀察、再對顯癥幼苗結(jié)合PCR檢測驗證等，較費(fèi)時耗力，還容易受季節(jié)、培養(yǎng)條件的限制，也還不能排除一些帶毒種子不形成顯癥幼苗的假陰性現(xiàn)象，存在穩(wěn)定性差、只能定性檢測及靈敏度有限等缺點，不能對處理后的種子中的病毒進(jìn)行精確定量，因此，無法精準(zhǔn)確定鈍化病毒的技術(shù)指標(biāo)。本研究采用5種方法對甜瓜種子進(jìn)行脫毒處理，利用SYBR Green實時熒光定量PCR檢測技術(shù)對處理后的甜瓜種子中CMV病毒進(jìn)行定量檢測。結(jié)果表明，各種處理方法均能在一定程度上降低種子帶毒量，脫毒率為 49.77%～ 98.93%，不同處理的脫毒效果有較大差異。干熱、干熱+濕熱和干熱+10%Na3PO4處理都可達(dá)到97%以上的脫毒率，且都能明顯提高種子的發(fā)芽率，對發(fā)芽勢影響不大。其中干熱處理效果最佳。溫湯處理不僅脫毒效果較差，還對種子發(fā)芽有一定的抑制作用。任琛榮通過相對定量法測定了不同溫度條件下濕熱和干熱處理對西葫蘆種子攜帶病毒的鈍化效果，試驗結(jié)果表明40 ℃濕熱處理24 h、70 ℃干熱處理72 h條件下脫除CMV效果最好(96%)，但種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢降低。本試驗脫毒效果最佳的干熱處理條件(65 ℃，48 h)與任琛榮不同，其結(jié)果各異。可見，針對不同種的葫蘆科種子攜帶相同種類病毒的試驗處理條件存在較大差異，其最佳脫除處理條件均需經(jīng)過嚴(yán)格的試驗才能確定。

降低種傳病毒危害的關(guān)鍵是減低種苗的傳毒率，以減少病毒初侵染源。本研究發(fā)現(xiàn)，干熱處理后的甜瓜種子幼苗傳毒率可達(dá)4.44%，而干熱+10%Na3PO4處理的種子幼苗中檢測不出病毒，表明該方法能更有效去除種胚內(nèi)的病毒，降低幼苗傳毒率，具有最佳的脫毒效果。