田全召，高漢婷，劉修生，王天軍，張 偉，白躍宇,3,*

（1.河南省鼎元種牛育種有限公司，河南鄭州 450000；2.河南科技學(xué)院，河南新鄉(xiāng) 453003；3.河南省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南鄭州 450008）

Penergetic-T 是 由 德 國(guó)Plocher Produktion 公 司研制的由天然原料經(jīng)過(guò)特殊的物理性處理生產(chǎn)的一種動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑。Penergetic-T 中98.1% 為天然碳酸鈣，0.9% 為天然碳酸鎂，其他成分占1%[1]。Penergetic-T 能夠提高動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，進(jìn)而提高飼料利用率和產(chǎn)品品質(zhì)，提高養(yǎng)殖效益[2-3]；還可改善動(dòng)物排泄，從而改變畜禽舍內(nèi)空氣，為動(dòng)物提供一個(gè)相對(duì)舒適的生存環(huán)境[4-5]。

張波等[2]研究報(bào)道Penergetic-T 能提高延邊黃牛瘤胃發(fā)酵效率，提高了延邊黃牛瘤胃液中菌體蛋白數(shù)量，同時(shí)也使總揮發(fā)性脂肪酸和丙酸濃度提高。Penergetic-T 對(duì)延邊黃牛的育肥具有明顯的促進(jìn)作用,能夠提高日增重，并能提高延邊黃牛的免疫力, 減輕疲勞, 降低血液中的膽固醇和甘油三酯[3]。李官浩等[4]報(bào)道，飼料中添加Penergetic-T 可以顯著提高種公豬的射精量、精子活率和精子密度。但對(duì)飼喂反芻動(dòng)物特別是對(duì)牛的繁殖性能的影響鮮有報(bào)道。本文在前人研究基礎(chǔ)上，研究飼喂Penergetic-T 對(duì)公牛精液品質(zhì)的影響，為合理利用Penergetic-T 及認(rèn)識(shí)其對(duì)反芻動(dòng)物繁殖性能的作用機(jī)理提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和設(shè)備 Penergetic-T、氯化鈉、載玻片、蓋玻片、試管、水浴鍋、比色皿、密度儀、細(xì)管機(jī)、冷凍儀等，德國(guó)Minitu 公司生產(chǎn)；雞蛋、檸檬酸、甘油、葡萄糖，鄭州銀豐公司生產(chǎn)；三羥甲基氨基甲烷（Tris） ，上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司生產(chǎn)；吉姆薩染液，Sigma公司生產(chǎn)；固定液（含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉）。

1.2 試驗(yàn)牛設(shè)計(jì)及日糧 選擇2～3 歲、生長(zhǎng)發(fā)育正常的西門塔爾種公牛120 頭隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組60 頭，試驗(yàn)組進(jìn)行飼喂試驗(yàn)。本試驗(yàn)分預(yù)試期和正試期。預(yù)試期30 d，正試期60 d。試驗(yàn)在2017 年10 月1 日—12 月30 日進(jìn)行。試驗(yàn)組和對(duì)照組基礎(chǔ)日糧相同，按精粗比為1∶2 的比例飼喂，即5 kg 全價(jià)精料、10 kg 羊草。試驗(yàn)組在精料中添加0.25 g/（d·頭）Penergetic-T。添加方式為：按1 000 kg 精料中添加0.5 kg Penergetic-T的比例提前將Penergetic-T 與精料混勻，早飼和中飼時(shí)各取2.5 kg 給料，在飼養(yǎng)員監(jiān)督下精料全部采食干凈。每天飼喂3 次，自由飲水，常規(guī)光照。飼喂前將精料與粗料混合均勻。保證牛有清潔、干凈的飲水和休息環(huán)境。種公?；A(chǔ)精料組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

表1 種公?；A(chǔ)精料組成及營(yíng)養(yǎng)成分

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 采精時(shí)間及采精方法 采用假陰道采精法對(duì)每頭牛進(jìn)行采精。每頭公牛于采精日上午間隔1 天采精1 次，每周采精2 次。用帶刻度的集精瓶直接讀取射精量數(shù)據(jù)。

1.3.2 鮮精活力檢測(cè) 取稀釋液390 μL、鮮精10 μL 混勻，取10 μL 混勻后的精液滴于載玻片上，加蓋蓋玻片后在38℃恒溫裝置的相差顯微鏡上做活力判定，活力65% 以下精液做廢棄處理，65% 以上進(jìn)行密度及稀釋量的測(cè)定。

1.3.3 精子密度 取精液35 μL 和0.9%的生理鹽水3 500 μL混勻后置于精子密度儀中測(cè)量，得出被測(cè)精液的密度及總稀釋量。

1.3.4 產(chǎn)量統(tǒng)計(jì) 測(cè)定出密度與稀釋量后開始進(jìn)行精液稀釋，取1 只已盛有30 mL 稀釋液經(jīng)34℃水浴預(yù)先加溫的試管對(duì)精液進(jìn)行稀釋，在34℃水浴中暫存10 min 后加稀釋液到總稀釋量，應(yīng)包括第一次稀釋時(shí)的30 mL 稀釋液。精液稀釋后用設(shè)定好的德國(guó)Minitu 自動(dòng)灌裝機(jī)灌裝，灌裝機(jī)設(shè)定為每劑量0.25 mL 精液、含大約2 000 萬(wàn)精子數(shù)。將灌裝好的細(xì)管精液置于冷凍盤上統(tǒng)計(jì)產(chǎn)量，然后放入冷凍儀中冷凍。冷凍時(shí)預(yù)先打開冷凍儀，打開液氮閥門將冷凍儀降至4℃，然后打開冷凍儀蓋子，迅速將分盤好的凍精放入冷凍儀中，蓋好蓋子，啟動(dòng)開始按鈕，待溫度降到-140℃維持7 min 后取出凍精，然后儲(chǔ)存于液氮罐中。

1.3.5 畸形率檢測(cè) 取儲(chǔ)存于液氮罐中的凍精置于37℃水浴鍋解凍，吸取10 μL 置于載玻片上抹片，風(fēng)干5 min后用固定液固定30 min，然后用吉姆薩染液染色1.5 h后鏡檢計(jì)算畸形率。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 利用 Excel 中的“數(shù)據(jù)”、“數(shù)據(jù)分析”“單因素方差分析”對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 Penergetic-T 對(duì)公牛射精量、精子密度、產(chǎn)量的影響 如表2 所示，對(duì)照組和試驗(yàn)組平均值比較，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05，表明飼料中添加Penergetic-T，種公牛鮮精的射精量、精子密度以及凍后產(chǎn)量均高于對(duì)照組，且差異顯著。

2.2 Penergetic-T 對(duì)種公牛精子活力和畸形率的影響由表3 可見，對(duì)照組和試驗(yàn)組平均值比較，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05，表明飼喂時(shí)飼料中添加Penergetic-T 的試驗(yàn)組精子畸形率低于對(duì)照組，精子活力高于對(duì)照組，且差異均顯著，分別比對(duì)照組改善了14.1%和13.0%。

表2 添加Penergetic-T 對(duì)公牛射精量、精子密度、產(chǎn)量的影響（平均值）

表3 添加Penergetic-T 對(duì)種公牛精子活力和畸形率的影響（平均值）

3 討 論

種公牛精液品質(zhì)的好壞直接決定了牛精液生產(chǎn)性能的高低和冷凍精液質(zhì)量的優(yōu)劣，它直接影響著種公牛站的經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)在一定程度上也影響著牛冷凍精液改良推廣的社會(huì)效益。評(píng)定種公牛精液品質(zhì)的指標(biāo)主要有射精量、精子活力、精子密度、畸形率等，而這些指標(biāo)又受到各種因素影響。何江等[6]報(bào)道，影響種公牛精液生產(chǎn)的因素有先天性因素、射精功能性障礙、睪丸及副性腺機(jī)能障礙。張海濤等[7]認(rèn)為，影響種公牛精液產(chǎn)量和品質(zhì)的主要因素有遺傳、環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)等。張黎黎等[8]報(bào)道精液生產(chǎn)能力10%取決于遺傳因素，90%取決于環(huán)境，其中主要是飼養(yǎng)管理?xiàng)l件。

營(yíng)養(yǎng)是維持生命機(jī)能和生產(chǎn)精液的物質(zhì)基礎(chǔ)，營(yíng)養(yǎng)過(guò)度、不足或失衡都會(huì)影響精液的產(chǎn)量與品質(zhì)。張小茶等[9]研究表明，日糧營(yíng)養(yǎng)對(duì)種公牛的精液品質(zhì)有重要影響，合理的營(yíng)養(yǎng)是種公牛發(fā)揮最大繁殖能力和延長(zhǎng)使用年限的重要保證。因此，開發(fā)一種既能使公牛生產(chǎn)出大量?jī)?yōu)質(zhì)精液又能獲得良好體況的日糧，成為提高公牛凍精生產(chǎn)效益的關(guān)鍵。種公牛日糧中必須含有足夠的能量、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素等。其中，礦物質(zhì)是種公牛保持健康和較高繁殖性能不可缺乏的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)精液的產(chǎn)生和精子的形成也有一定影響。牛所需要的礦物質(zhì)元素約有20 多種，其中鈣能夠?yàn)榫踊顒?dòng)提供能量，如果鈣含量不足，會(huì)影響種公牛的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致精子的形成受阻，精子活力變差。Penergetic-T 的主要成分之一是碳酸鈣，補(bǔ)鈣可以刺激精細(xì)胞的糖酵解過(guò)程，增加精子活動(dòng)所需的能量，從而加強(qiáng)精子的活力，還可以通過(guò)睪丸、腎上腺和類固醇的生物合成來(lái)影響繁殖進(jìn)而降低精液的精子畸形率，提高精液品質(zhì)。Penergetic-T的另一主要成分是碳酸鎂，王文丹等[10]研究報(bào)道鎂缺乏可導(dǎo)致種公牛性欲減退、精子發(fā)生出現(xiàn)異常、數(shù)量減少、畸形精子增加，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致失去配種能力，因此在日糧中適當(dāng)添加鎂能改善公牛性欲，降低畸形率，提高公牛的精液品質(zhì)。Penergetic-T 還具有提高機(jī)體免疫力和提高細(xì)胞活性的作用[1，11]，從而提高了精子在睪丸內(nèi)與精囊內(nèi)的抗病毒能力和應(yīng)激能力，這可能是本研究中試驗(yàn)組精子畸形率低于對(duì)照組的原因。

Penergetic-T 含有豐富的黃酮類化合物、不飽和脂肪酸、維生素E、維生素C 及微量元素鋅、硒等，具有抗氧化作用。羅海玲等[12]報(bào)道，維生素E 對(duì)提高公羊的精液品質(zhì)和胚胎移植成功率都有良好的促進(jìn)作用。郎海芳[13]試驗(yàn)表明，維生素E 在機(jī)體內(nèi)可能主要參與抗氧化反應(yīng)，并且通過(guò)抗氧化保護(hù)作用來(lái)達(dá)到提高精液品質(zhì)的目的。維生素C 具有抗精子的非特異性凝聚作用，可提高公牛受精率，缺乏時(shí)會(huì)導(dǎo)致精子發(fā)育不良，活動(dòng)能力下降；鋅對(duì)雄性動(dòng)物的內(nèi)分泌機(jī)能、生殖器官、生殖細(xì)胞、精子的生成及精液品質(zhì)等均有重要作用，從而影響其繁殖性能[14]。徐振華等[15]報(bào)道，公牛飼料中添加鋅可明顯縮短性反射時(shí)間，增強(qiáng)公牛性欲。同時(shí)，添加鋅可顯著改善公牛的鮮精活力、精子凍后活力和頂體完整率；硒是動(dòng)物體內(nèi)非常重要的一種不可缺少的微量元素，對(duì)于公牛而言，硒缺少時(shí)精子活力降低、受精能力下降，畸形率增加，精子生成減少[16]。推測(cè)，正是由于Penergetic-T 含有豐富的礦物質(zhì)（鈣鎂）、維生素E、維生素C 及微量元素鋅、硒，公牛日常飼養(yǎng)管理中適當(dāng)添加Penergetic-T 能夠在一定程度上提高精液品質(zhì)。后期可綜合環(huán)境因素、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件、季節(jié)等因素在其他品種進(jìn)一步研究合適的飼喂量與飼喂方式，最后應(yīng)用到整個(gè)牛群，為種公牛站創(chuàng)造更多經(jīng)濟(jì)效益。

4 結(jié) 論

飼料中添加Penergetic-T 能夠顯著提高種公牛的射精量、精子密度、鮮精活力及產(chǎn)量，顯著降低精子畸形率，說(shuō)明飼料中添加Penergetic-T 可顯著提高種公牛的精液品質(zhì)及產(chǎn)量。