彭妙蓮，陳小強(qiáng)，王 壘，嚴(yán)棟漢，蔡更元，3，王聲會(huì)，陳贊謀，3，張 秀，黃美玲

（1.國家生豬種業(yè)工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642；2.廣東溫氏種豬科技有限公司，廣東 云浮 527400；3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642）

豬的人工授精技術(shù)因具有加速遺傳改良、降低公豬飼養(yǎng)成本、減少傳染性疾病傳播等眾多優(yōu)勢而越來越被規(guī)模化豬場所青睞。近年來，隨著輸精技術(shù)的改進(jìn)，豬人工授精的效果已接近甚至優(yōu)于自然交配[1]。21世紀(jì)初期，人們開始采用深部輸精技術(shù)，即將公豬精液送入子宮深部，接近母豬卵子受精的輸卵管部位，縮短精子與卵子結(jié)合距離，防止精液倒流，進(jìn)而提高受胎率和產(chǎn)仔數(shù)[2-4]。Norman[5]指出，“深部輸精技術(shù)的真正價(jià)值在于用同樣的操作方式可以降低輸入的精子數(shù)量。這意味著擴(kuò)大了育種優(yōu)良公豬的應(yīng)用范圍，加快了選育的進(jìn)程。從而，選育所用基因均為優(yōu)上加優(yōu)的基因，而非僅僅是優(yōu)秀基因”。

在過去的十年里，低精子數(shù)的深部輸精技術(shù)得到了國內(nèi)外人工輸精站及規(guī)?；i場的認(rèn)可和青睞，尤其在經(jīng)產(chǎn)母豬上，近幾年已被成熟掌握并大范圍推廣應(yīng)用。除此之外，深部輸精技術(shù)還有加快精液吸入、縮短輸精時(shí)間的優(yōu)勢[1，6-7]。

然而，深部輸精技術(shù)在后備母豬上的研究報(bào)道并不多見。艾德生[8]曾報(bào)道，法國大型豬人工授精公司告誡農(nóng)民不要將此技術(shù)應(yīng)用于小母豬，因?yàn)槠湓谌斯な诰^程中更易受到傷害。李毅等[9]、宋忠旭等[10]曾先后在后備母豬上開展了初步探索研究，但受多方因素的影響，并沒得出明確定論，無法探知深部輸精技術(shù)是否適用于后備母豬上。

綜上，為探索后備母豬深部輸精的適用可行性、對(duì)繁殖成績的影響，以及驗(yàn)證該技術(shù)對(duì)育種公豬利用率及工作效率影響，特開展此試驗(yàn)研究。本研究在常規(guī)輸精操作上進(jìn)行了改良創(chuàng)新，將懸掛式輸精與深部輸精結(jié)合應(yīng)用（圖1），以降低20%有效精子數(shù)的輸精量，在大白、長白及杜洛克3個(gè)品種的后備母豬上開展試驗(yàn)，旨在達(dá)到“保成績提效率”的目的，同時(shí)期望能為后備母豬高效輸精方式上的應(yīng)用提供參考。

圖1 改良后深部輸精操作模式

1 試驗(yàn)材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

3個(gè)不同品種種豬場的大白后備母豬529頭，杜洛克后備母豬207頭，長白后備母豬299頭，日齡（255±15）d，體重（150±10）kg，情期 2～3 個(gè)，背膘適宜。

1.2 試驗(yàn)配種時(shí)間

2017年10月至2018年5月。

1.3 主要試劑

精液稀釋粉購自目前市面上銷售的常用長效粉，活力保持7 d。

1.4 主要設(shè)備

假母臺(tái)、17℃恒溫冰箱、數(shù)顯恒溫水浴鍋、恒溫磁力加熱攪拌器、37℃數(shù)顯恒溫板、偉力精子分析系統(tǒng)、國內(nèi)全自動(dòng)灌裝機(jī)、鼓風(fēng)干燥箱、國內(nèi)常用常規(guī)輸精管、母豬夾、輸精松緊帶、卡蘇（上海）深部輸精管等。

1.5 試驗(yàn)精液

1）精液來源：對(duì)應(yīng)品種公豬經(jīng)檢測質(zhì)量合格的精液；2）精液生產(chǎn)：稀釋液的配置、精液的采集和稀釋參照《GB 23238—2009種豬常溫精液》[11]；3）精液分裝：常規(guī)輸精，每劑有效精子數(shù)25億/80 mL；深部輸精，每劑有效精子數(shù)20億/80 mL。

1.6 試驗(yàn)方法

1.6.1 試驗(yàn)分組 每個(gè)品種試驗(yàn)分為2組，試驗(yàn)組（20億/80 mL，改良后深部輸精）；對(duì)照組（25億/80 mL，常規(guī)輸精）。

1.6.2 分品種在不同豬場開展試驗(yàn)

（1）改良后輸精方式對(duì)后備母豬適用可行性試驗(yàn)：統(tǒng)計(jì)參與試驗(yàn)的大白、杜洛克及長白后備母豬每批次試驗(yàn)組和對(duì)照組在輸精拔管后的出血頭數(shù)，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

（2）大白后備母豬試驗(yàn)：參與本次試驗(yàn)的大白后備母豬來自廣東某大白種豬場。529頭大白后備母豬分7個(gè)批次進(jìn)行試驗(yàn)，每批次約76頭，分試驗(yàn)組Ⅰ和對(duì)照組Ⅰ，每組38頭左右，兩組豬只健康狀態(tài)、天齡、體重、情期及背膘等條件盡可能接近或平均分配。

（3）杜洛克后備母豬試驗(yàn)：試驗(yàn)選在同為廣東的某杜洛克種豬場，共4個(gè)批次207頭杜洛克后備母豬。每批次每組約25頭，分試驗(yàn)組Ⅱ和對(duì)照組Ⅱ，每組豬只要求與大白要求一致，盡可能的條件接近。

（4）長白后備母豬試驗(yàn)：參與本次試驗(yàn)共299頭長白后備母豬，共分4個(gè)批次試驗(yàn)，每批次分試驗(yàn)組Ⅲ和對(duì)照組Ⅲ，每組約38頭。豬只的要求與大白、杜洛克一致。

（5）輸精時(shí)間對(duì)比試驗(yàn)：每個(gè)試驗(yàn)場挑選熟悉輸精操作的操作人員4名，合計(jì)12名。要求輸精操作人員接受系統(tǒng)的理論培訓(xùn)的同時(shí)，并在淘汰后備母豬或正常后備母豬第3次輸精上練手操作至少20次，方可負(fù)責(zé)各場試驗(yàn)組和對(duì)照組的輸精操作。輸精時(shí)要求4人同時(shí)操作，操作人員可自行決定試驗(yàn)組、對(duì)照組輸精順序，完成一組后再進(jìn)行下一組。輸精前需事先做好配種準(zhǔn)備，如精液、輸精管、潤滑油等準(zhǔn)備到位。試驗(yàn)組計(jì)時(shí)從拿紙巾擦拭母豬后軀開始至最后一頭母豬拔管結(jié)束為止；對(duì)照組計(jì)時(shí)以趕公豬誘情算起（期間部分人員同時(shí)在做按摩母豬等刺激母豬興奮的工作）至輸精完成后趕公豬回到欄舍結(jié)束，以分鐘為單位，記錄試驗(yàn)組和對(duì)照組輸精用時(shí)。全部試驗(yàn)批次結(jié)束后，求和各試驗(yàn)組和對(duì)照組共用時(shí)間（精確至分鐘），分品種對(duì)比分析平均一個(gè)操作員采用改良后深部輸精方式以及常規(guī)輸精方式輸精一頭后備母豬的時(shí)間（精確至秒）。

1.6.3 查情及配種時(shí)機(jī)確定 由豬場經(jīng)驗(yàn)豐富的操作人員專門負(fù)責(zé)，利用公豬接觸刺激和人工檢查的方式查情，每天至少兩次。根據(jù)母豬外陰變化、黏液、靜立反射等情況確定配種時(shí)機(jī)。

1.6.4 輸精方法

（1）統(tǒng)一輸精3次，每次間隔8～16 h。

（2）常規(guī)輸精操作過程試情公豬在現(xiàn)場，與母豬面對(duì)面，口鼻接觸；改良后深部輸精操作前45 min趕走公豬，配種過程公母豬不見面。

（3）輸精操作由固定的操作人員負(fù)責(zé)，常規(guī)輸精參照《豬人工授精技術(shù)規(guī)程（NY/T 636—2002）》[12]；改良后深部輸精操作參照卡蘇深部輸精步驟進(jìn)行，連接上精液后，使用輸精松緊帶將精液吊掛在母豬后軀上方，讓精液自動(dòng)輸入子宮。

1.7 數(shù)據(jù)處理方法

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010初步整理后，采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 后備母豬不同輸精方式出血結(jié)果統(tǒng)計(jì)

大白后備母豬試驗(yàn)組Ⅰ出血比例1.54%，對(duì)照組Ⅰ1.86%，差異不大；杜洛克試驗(yàn)組Ⅱ比例2.88%，對(duì)照組Ⅱ1.94%，試驗(yàn)組略高，但均在合理范圍；長白試驗(yàn)組Ⅲ出血比例1.34%，對(duì)照組Ⅲ1.33%，幾乎無差異?？傮w上，試驗(yàn)組采用改良后深部輸精方式共輸精513頭，輸精出血9頭，比例1.75%；常規(guī)輸精對(duì)照組共522頭，輸精出血9頭，比例1.72%，兩者差異不大。由此說明，改良后深部輸精方式并沒有對(duì)后備母豬造成明顯損傷。具體數(shù)據(jù)詳見表1。

表1 后備母豬不同輸精方式出血情況對(duì)比

2.2 不同品種后備母豬試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 大白后備母豬試驗(yàn)結(jié)果 大白后備母豬采用改良后深部輸精方式，以每劑20億/80 mL有效精子數(shù)輸精的分娩率、胎均總仔及胎均活仔分別為：96.92%、15.69頭和14.62頭，均分別高于25億/80 mL的常規(guī)輸精方式1.38個(gè)百分點(diǎn)、0.49頭、0.46頭，但差異不顯著（P＞0.05）。表明，大白后備母豬采用改良后深部輸精方式是可行的。具體數(shù)據(jù)詳見表2。

2.2.2 杜洛克后備母豬試驗(yàn)結(jié)果 杜洛克后備母豬采用改良后深部輸精方式，降低20%有效精子數(shù)的分娩率為96.15%，比常規(guī)輸精方式的分娩率高4.89個(gè)百分點(diǎn)；胎均總仔及胎均活仔，則分別比常規(guī)輸精方式高 0.33 頭、0.2 頭，但差異不顯著（P＞0.05）。具體數(shù)據(jù)詳見表3。

表2 大白后備母豬不同輸精方式的成績對(duì)比

表3 杜洛克后備母豬不同輸精方式的成績對(duì)比

2.2.3 長白后備母豬試驗(yàn)結(jié)果 長白后備母豬以20億/80 mL采用改良后深部輸精方式的分娩率及胎均總仔與25億/80 mL的常規(guī)輸精方式基本無變化，胎均活仔，前者比后者高0.47頭，但差異不顯著（P＞0.05）。具體數(shù)據(jù)詳見表 4。

表4 長白后備母豬不同輸精方式的成績對(duì)比

2.3 輸精時(shí)間試驗(yàn)結(jié)果

采用常規(guī)輸精方式，3個(gè)品種的單頭后備母豬輸精時(shí)間為6 min 50 s至7 min之間，差異不大；而采用改良后深部輸精方式，單頭平均輸精時(shí)間下降至4 min 26 s，單頭節(jié)省2 min 27 s。3個(gè)品種節(jié)省的時(shí)間均差異極顯著（P＜0.01），其中長白品種輸精用時(shí)最短，4 min 11 s，比大白及杜洛克的4 min 31 s和4 min 38 s快20 s以上。由此說明，后備母豬輸精使用該方式在時(shí)間效率還是非常有優(yōu)勢的，值得推廣。具體數(shù)據(jù)詳見表5。

表5 后備母豬不同輸精方式輸精時(shí)間對(duì)比

3 討論

3.1 不同品種后備母豬應(yīng)用效果討論

Kunavongkrit等[13]與 Behan 等[14]研究表明，使用含有10億～30億有效精子數(shù)的常溫精液進(jìn)行深部輸精能顯著提高母豬的繁殖力。本研究的結(jié)果表明，以每劑20億/80 mL的輸精量采用改良后深部輸精方式，與每劑25億/80 mL輸精量的常規(guī)輸精方式相比，并沒有顯著提高后備母豬的繁殖力。這一結(jié)論與Bolarin等[15]的研究結(jié)果一致。

通過改良后深部輸精方式與常規(guī)輸精方式試驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，大白后備母豬及杜洛克后備母豬的分娩率及產(chǎn)仔有不同程度的改善，其中大白分娩率、胎均總仔及胎均活仔分別提高1.38個(gè)百分點(diǎn)、0.49頭、0.46 頭，但差異均不顯著（P＞0.05）；杜洛克分別提高4.89 個(gè)百分點(diǎn)、0.33 頭、0.2 頭，但差異均不顯著（P＞0.05）。與丹麥的豬育種專家觀點(diǎn)一致，提高母豬繁殖力并不完全來源于深部輸精技術(shù)本身。深部輸精屬于一項(xiàng)新的技術(shù)，在訓(xùn)練工人進(jìn)行人工輸精時(shí)，專家更注重訓(xùn)練工人把握好母豬發(fā)情的確切時(shí)間及母豬日常的一般體況[8]，且在試驗(yàn)期間操作上更為謹(jǐn)慎、細(xì)致、到位，這也許才是為什么窩產(chǎn)仔數(shù)能夠提高的原因。此外，牛思凡等[16]的研究也表明在深部輸精時(shí)，精液能夠快速地進(jìn)入兩側(cè)子宮角和輸卵管，提高卵子受精率，從而提高母豬窩產(chǎn)總仔數(shù)。

縱觀長白，使用改良后深部輸精方式前后繁殖成績基本沒變化，可能原因在于操作過急。從表5可知，長白使用改良后深部輸精方式用時(shí)比其他兩品種快20 s。當(dāng)前，改良后深部輸精的輸精時(shí)間還沒形成標(biāo)準(zhǔn)，是否這一因素的影響還有待進(jìn)一步研究。而長白的胎均活仔提高 0.47 頭（P＞0.05），主要跟不同單元產(chǎn)房人員接產(chǎn)及時(shí)性有關(guān)。綜上所述，改良后深部輸精不會(huì)影響大白、杜洛克及長白后備母豬的繁殖成績。

3.2 后備母豬不同輸精方式的討論

研究人員從2014年開始探索后備母豬的輸精方式，包括懸掛式輸精、深部輸精及充氣輸精軟管輸精。為探究不同輸精方式所輸精液到達(dá)子宮部位，研究人員于2015年7月16日在杜洛克種豬場選擇3頭有發(fā)情征狀的杜洛克后備母豬，分別以懸掛式-常規(guī)輸精、深部輸精及充氣輸精軟管輸精方式輸入80 mL紫藥水，10 min后馬上剖豬觀察。結(jié)果見圖2—圖4，懸掛式-常規(guī)輸精方式輸入的精液大部分停留在母豬子宮頸口，少量進(jìn)入了子宮體，極少量到達(dá)子宮角；深部輸精則將大部分精液輸送至兩側(cè)子宮角中段位置；充氣輸精的精液幾乎覆蓋了整個(gè)子宮，大部分遍布在兩側(cè)子宮角，部分直接到達(dá)輸卵管。這一結(jié)果直接印證了深部輸精及充氣輸精軟管將精液輸送至更接近母豬卵子受精的部位，縮短精子與卵子結(jié)合距離，防止精液發(fā)生倒流，優(yōu)于常規(guī)輸精有更高的受胎幾率，與多數(shù)研究報(bào)道一致。

圖2 懸掛式-常規(guī)輸精

圖3 深部輸精

圖4 充氣輸精軟管輸精

然而，實(shí)際操作中，所有不同輸精方式必須操作到位才能取得正向結(jié)果。研究人員在探索后備母豬充氣輸精軟管輸精方式時(shí)發(fā)現(xiàn)，該方法對(duì)人員素質(zhì)要求很高。輸精橡膠軟管非常軟，若在母豬興奮宮縮時(shí)擠壓，容易導(dǎo)致軟管在噴射過程碰到皺褶，反彈折疊或彎曲，出現(xiàn)精液受阻輸不進(jìn)去以及嚴(yán)重倒流問題，從而引起繁殖成績的下降。懸掛式輸精方式也同樣因后備母豬輸精時(shí)精液難吸收，須增加不斷按摩刺激等耗時(shí)工作以及精液容易倒流這兩大突出問題而終止。深部輸精用在后備母豬上，內(nèi)管插入須小心謹(jǐn)慎，尤其對(duì)于容易應(yīng)激的杜洛克母豬上，輸精一頭后備母豬的時(shí)間較常規(guī)輸精無明顯的優(yōu)勢。

改良后深部輸精方式，插管時(shí)間一致，但精液掛上后，無需1人對(duì)1豬輸精，1人在連接精液的同時(shí)觀察至少5頭母豬輸精，同時(shí)可及時(shí)調(diào)整精液袋高度，避免精液輸入過慢影響效率或過快引起倒流，從而達(dá)到“保成績提效率”的目的。

3.3 操作技術(shù)討論

正如多數(shù)研究者提出的深部輸精技術(shù)操作復(fù)雜，須事先對(duì)操作員做好專業(yè)的培訓(xùn)。本研究是在對(duì)比并熟知各輸精方式利弊的前提下，固定操作人員，經(jīng)過理論培訓(xùn)及練手操作后開展。研究中結(jié)合了深部輸精技術(shù)無需公豬誘情、降低精子數(shù)、精液吸收快以及懸掛式輸精減少人工的優(yōu)點(diǎn)，通過懸掛式輸精減少了人工優(yōu)勢的填補(bǔ)，給予操作人員足夠的時(shí)間和信心，放松心態(tài)操作，將對(duì)后備母豬子宮可能造成的損傷降至最低幾率；同時(shí)懸掛式輸精精液難吸收的問題剛好由深部輸精技術(shù)精液吸收快的優(yōu)勢進(jìn)行了彌補(bǔ)。

試驗(yàn)期間，研究人員多次到現(xiàn)場與操作人員進(jìn)行探討分析，不斷總結(jié)及改進(jìn)，整理歸納了幾點(diǎn)改良后深部輸精方式的操作關(guān)鍵點(diǎn)：

（1）準(zhǔn)確查情。

（2）組織管理到位，避免圖快與蠻干。

（3）插管操作須耐心，尤其插內(nèi)管，需等待豬只安靜下來方可順利插入，切忌使用蠻力強(qiáng)插。

（4）輸精時(shí)，輸精人員可同時(shí)觀察鄰近的5～8頭母豬，注意松緊帶的松緊度，及時(shí)做好調(diào)整；針對(duì)個(gè)別精液輸入較慢的母豬，可進(jìn)行適當(dāng)按摩刺激。

（5）輸精過程，要保持配種環(huán)境的安靜。

此要點(diǎn)規(guī)范，經(jīng)本次513頭后備母豬試驗(yàn)總結(jié)得出，具體細(xì)則還有待加強(qiáng)和完善。

3.4 輸精時(shí)間的討論

改良后深部輸精方式掛上精液后，不再需要1人對(duì)1豬輸精的方式，可以1人在連接精液的同時(shí)觀察至少5頭母豬的輸精情況。此外，深部輸精管內(nèi)管較深入母豬子宮體，精液避開了子宮頸皺褶和黏液，輸入速度明顯加快[16]，勞動(dòng)效率的提高也顯而易見，尤其對(duì)于單批次后備母豬配種量大的批次生產(chǎn)場，做好組織管理，輸精時(shí)間效率的提升會(huì)更為明顯。本研究輸精時(shí)間的統(tǒng)計(jì)是在每批后備母豬配種量在25～40頭，4人配合操作的基礎(chǔ)上計(jì)算得出，3個(gè)品種的后備母豬輸精時(shí)間效率均顯著提升，節(jié)省時(shí)間達(dá)到2.5 min。若后備母豬每次配種量低于20頭時(shí)，可減少操作人員。

3.5 輸精劑量的討論

母豬常規(guī)輸精精液劑量一般要求為25億/80 mL有效精子數(shù)[11]，而深部輸精目前還沒明確的輸精劑量及精子數(shù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。本研究采用20億/80 mL有效精子數(shù)作為后備母豬采用改良后深部輸精方式的輸精劑量，較之前的常規(guī)輸精方式精液利用率提高20%，且不影響后備母豬的分娩率和產(chǎn)仔數(shù)，這一結(jié)論與Vazquez等[17]報(bào)道的結(jié)果一致。張騰等[1]的研究表明，15億/80 mL有效精子數(shù)不顯著影響經(jīng)產(chǎn)母豬的受胎率、分娩率、產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)；艾德生[8]、Watson等[18]也曾報(bào)道，利用深部輸精技術(shù)，經(jīng)產(chǎn)母豬每次輸精只需10億精子就能得到與傳統(tǒng)的每次輸入30億精子無差異的妊娠率和窩產(chǎn)仔數(shù)。以上研究結(jié)果說明深部輸精方式在降低輸精精子數(shù)上還有很大潛力可挖。改良后深部輸精方式在后備母豬的應(yīng)用，持續(xù)提高公豬利用效率上有待進(jìn)一步探索與研究。

4 小結(jié)與展望

本研究表明采用改良后深部輸精方式，后備母豬達(dá)到了“保成績提效率”的效果。改良后深部輸精為研究人員開創(chuàng)的一種后備母豬新型輸精模式，目前已有513頭后備母豬的數(shù)據(jù)量，但具體操作細(xì)則及最佳輸精量還有待更大數(shù)據(jù)量進(jìn)一步研究與驗(yàn)證。隨著批次化生產(chǎn)管理模式的推進(jìn)、豬冷凍精液的推廣使用、精液分離技術(shù)的持續(xù)研究等，深部輸精技術(shù)會(huì)越來越受重視。當(dāng)前，經(jīng)產(chǎn)母豬的深部輸精技術(shù)已經(jīng)被大部分同行公司成熟運(yùn)用，后備母豬輸精方式的創(chuàng)新顯得越來越重要。期望本次改良創(chuàng)新后備母豬輸精方式得到的數(shù)據(jù)及觀點(diǎn)，能為人工授精技術(shù)的發(fā)展提供有效助力。