劉小翠 鄧斌 張琪琳

[摘要] 目的 考察益腎排毒丸的穩(wěn)定性在溫度、濕度、光線的影響下隨時間的變化規(guī)律，為其貯存條件和有效期的制訂提供科學(xué)依據(jù)。 方法 根據(jù)2015年版《中華人民共和國藥典》（四部，通則9001）項(xiàng)下原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，采用影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)對益腎排毒丸進(jìn)行穩(wěn)定性考察。 結(jié)果 益腎排毒丸在高溫、高濕及強(qiáng)光照條件下均較為穩(wěn)定，但對其有效成分的含量變化仍有一定影響，故益腎排毒丸應(yīng)避光貯存于干燥陰涼處。長期試驗(yàn)結(jié)果提示益腎排毒丸的預(yù)測有效期為6個月。 結(jié)論 益腎排毒丸制劑具有良好的穩(wěn)定性。

[關(guān)鍵詞] 益腎排毒丸；穩(wěn)定性；影響因素試驗(yàn)；加速試驗(yàn)；長期試驗(yàn)

[中圖分類號] R944.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2019）05（a）-0029-04

Study on the stability of Yishen Paidu Pills

LIU Xiaocui DENG Bin ZHANG Qilin

Department of Pharmacy， Union Hospital， Tongji Medical College， Huazhong University of Science and Technology， Hubei Province， Wuhan 430022， China

[Abstract] Objective To investigate the change of stability of Yishen Paidu Pills with time under the influence of temperature， humidity and light， and to provide a scientific basis for the formulation of storage conditions and expiry date of Yishen Paidu Pills. Methods According to the Guidelines of Stability Testing of Raw Materials and Preparations （Part Ⅳ， General Principles 9001） of 2015 edition the Pharmacopoeia of the People′s Republic of China， factors affecting testing， accelerated testing and long-term testing were adopted to inspect the stability of Yishen Paidu Pills. Results Yishen Paidu Pills were stable under high temperature， high humidity and strong light conditions， but it still had a certain little effect on the content of its effective components. Yishen Paidu Pills should be stored in a cool， dry place away from light. The long-term test results showed that the forecast shelf life of Yishen Paidu Pills was six mouths. Conclusion Yishen Paidu Pills is very stable.

[Key words] Yishen Paidu Pills； Stability； Influencing factors test； Accelerated test； Long-term test

益腎排毒丸是由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院依據(jù)臨床需要研發(fā)的醫(yī)院制劑，制劑的處方組成是在中醫(yī)理論的基礎(chǔ)上，運(yùn)用扶正祛邪的方法所得出中藥復(fù)方，臨床主要用于氣虛血瘀痰阻所致的慢性腎臟病患者。該處方主要包含黃芪、大黃、水蛭和僵蠶四味中藥，四味中藥各具其用，黃芪扶正，大黃、水蛭、僵蠶祛邪。研究[1-2]表明，益腎排毒丸可降低腎衰患者血清肌酐和尿素氮的水平，從而改善腎功能。

中藥制劑的安全性、有效性、穩(wěn)定性對藥品質(zhì)量和臨床療效至關(guān)重要[3]。因此，為保證益腎排毒丸的藥品質(zhì)量，確保其臨床療效，本研究對益腎排毒丸的穩(wěn)定性進(jìn)行了深入研究。本研究依據(jù)2015年版《中華人民共和國藥典》（四部，通則9001）項(xiàng)下原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，對益腎排毒丸進(jìn)行穩(wěn)定性考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

STIK MT-250B藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（施都德儀器設(shè)備有限公司）；華溪HX-200型高速中藥粉碎機(jī)（浙江省永康市溪岸五金藥具廠）；KH5200超聲波清洗機(jī)（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；HH-S型水浴鍋（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；TLC SCANNER 3薄層色譜掃描儀（瑞士，CAMAG）；ZF-7型三用紫外光分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）；雙槽層析缸（規(guī)格：100 mm×100 mm）；Agilent1260高效液相色譜儀；電子天平（十萬分之一，常州奧豪斯儀器有限公司EX125DZH）。

1.2 試藥

甲醇、乙腈（色譜級，購自SIGMA-ALDRICH）；水為超純水，其他試劑均為分析純（購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；硅膠薄層板（Silica gel 60 F254）（德國Merck KGaA，批號：1.05729.0001）。

益腎排毒丸3批（批號：20170117，20170216， 20170309）由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院提供。對照藥材與對照品：大黃對照藥材（藥用大黃，批號：120984-201202）、大黃酸對照品（批號：110757-201607）、黃芪對照藥材（蒙古黃芪，批號：120974-201612）、黃芪甲苷對照品（批號：110781-201616）均購自中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)項(xiàng)目考察

2.1.1 薄層色譜鑒定 益腎排毒丸中大黃和黃芪藥材原粉的鑒定分別依照2015年版《中華人民共和國藥典》中大黃和黃芪的粉末鑒定項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行，以薄層色譜法進(jìn)行檢測。

2.1.2 溶散時限考察 按照2015年版《中華人民共和國藥典》（通則0921）崩解時限檢查法丸劑項(xiàng)下的方法對3批益腎排毒丸進(jìn)行溶散時限檢查。

2.1.3 含量測定 色譜條件：Agilent TC C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相乙腈（A）-0.2%甲酸溶液（B），梯度洗脫：0～20 min，20%～40%A；20～30 min，40%A；30～35 min，90%A；35～40 min，20%A，流速1.0 mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μL，檢測波長260 nm。供試品及混合對照品的專屬性見圖1。

混合對照品溶液：取毛蕊異黃酮苷對照品0.10 mg、大黃素對照品0.18 mg、大黃素甲醚對照品0.15 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：精密稱取益腎排毒丸粉末2 g，置于錐形瓶中，加甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，冷卻后用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾后取續(xù)濾液，即得。

參照課題組已建立的益腎排毒丸含量測定方法學(xué)[4]進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、及加樣回收率等考察，結(jié)果顯示該方法的精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性良好，加樣回收率在95%～105%，RSD<2%。

2.2 影響因素試驗(yàn)

2.2.1 高溫試驗(yàn) 取同一批益腎排毒丸（批號：20170309），置適宜的潔凈容器中，60℃溫度下放置10 d，于第5、10天取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測[5]，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件測定樣品中毛蕊異黃酮苷、大黃素、大黃素甲醚的含量。益腎排毒丸在60℃溫度下放置10 d，樣品表面顏色加深，變?yōu)辄S棕色至紅棕色。其含量均高于規(guī)定限度（毛蕊異黃酮苷≥0.06 mg/g，大黃素≥0.15 mg/g，大黃素甲醚≥0.06 mg/g）；薄層檢測其特征斑點(diǎn)分布未發(fā)生明顯變化。因此，本研究不再進(jìn)行40℃條件下的高溫試驗(yàn)。即益腎排毒丸在高溫條件下仍保持良好的穩(wěn)定性。見表1。

2.2.2 高濕試驗(yàn) 取同一批益腎排毒丸（批號：20170309），在25℃分別于相對濕度90%±5%條件下放置10 d，于第5、10天取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測[5]，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件測定樣品中毛蕊異黃酮苷、大黃素、大黃素甲醚的含量。此外，準(zhǔn)確稱量試驗(yàn)前后益腎排毒丸的重量，以考察益腎排毒丸的吸濕潮解性能。若吸濕增重5%以上，則在相對濕度75%±5%條件下，同法進(jìn)行試驗(yàn)；若吸濕增重5%以下，其他考察項(xiàng)目符合要求，則不再進(jìn)行此項(xiàng)試驗(yàn)。結(jié)果顯示，在25℃分別于相對濕度90%±5%條件下放置10 d，性狀未發(fā)生顯著變化，樣品的吸濕增重<5%，樣品中上述各成分含量檢測均高于規(guī)定限度，薄層檢測其特征斑點(diǎn)分布未發(fā)生明顯變化。提示益腎排毒丸在高濕條件下仍能保持良好的穩(wěn)定性。見表2。

2.2.3 強(qiáng)光照試驗(yàn) 取同一批益腎排毒丸（批號：20170 309），于照度為4500 lx±500 lx的條件下放置10 d，于第5、10天取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測[5]，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件測定樣品中毛蕊異黃酮苷、大黃素、大黃素甲醚的含量。在光照強(qiáng)度4500 lx±500 lx條件下放置10 d，性狀未發(fā)生顯著變化，樣品中上述各成分含量檢測均高于規(guī)定限度，薄層檢測其特征斑點(diǎn)分布未發(fā)生明顯變化未發(fā)生明顯變化。提示益腎排毒丸在強(qiáng)光照射條件下仍能保持良好的穩(wěn)定性。見表3。

2.3 加速試驗(yàn)

取益腎排毒丸3批（批號：20170117、20170216、20170309），在溫度40℃±2℃、相對濕度75%±5%的條件下（穩(wěn)定性試驗(yàn)箱）放置6個月。在試驗(yàn)期間第1、2、3、6個月月末分別取樣1次，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測[5]，其性狀基本一致，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件測定樣品中毛蕊異黃酮苷、大黃素、大黃素甲醚的含量。見表4。

2.4 長期試驗(yàn)

長期試驗(yàn)是在接近藥物的實(shí)際貯存條件下進(jìn)行，其目的是為制訂藥物的有效期提供依據(jù)。取益腎排毒丸3批，在溫度25℃±2℃、相對濕度60%±10%的條件下放置12個月。分別于0、3、6、9、12個月取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測[5]，其性狀基本一致，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件測定樣品中毛蕊異黃酮苷、大黃素、大黃素甲醚的含量。初步預(yù)測其有效期為6個月。見表5。

3 討論

益腎排毒丸中黃芪為君藥，具有利尿托毒，補(bǔ)氣固表，排膿排毒，斂瘡生肌的功效[6-8]；大黃為臣藥，具有攻積滯、清熱瀉火、涼血、祛瘀、解毒之效[9-10]。研究[11-12]表明，大黃有效成分蒽醌類物質(zhì)對慢性腎病有顯著療效，與黃芪結(jié)合可明顯改善腎臟的病理損傷狀況。此二味中藥一升一降，針對很多水腫病清陽不升、濁陰不降所致的鬼門不開、凈府不潔病機(jī)，絲絲相扣。然而，治療水腫，除此兩法外，還應(yīng)“去宛陳莝”，故而選用佐藥水蛭活血化瘀。水蛭體內(nèi)所含水蛭素具有抗凝血、抗血栓形成[13-14]，降低蛋白尿，增強(qiáng)腎臟血流量，改善腎功能等藥理活性[15-16]，同時佐藥僵蠶具化痰通絡(luò)之效[17]。四藥合用，功效益氣扶正、升清降濁、活血化痰，有利于多種腎病所見氣虛血瘀痰阻水停之證[18]。與傳統(tǒng)的十幾味藥材組成的治療腎病的處方比較，益腎排毒丸配制工藝更簡潔，操作簡單，且益腎排毒丸在協(xié)和醫(yī)院臨床使用已達(dá)20年，毒副作用小，療效確切，更易于被患者接受。

目前，中藥制劑在臨床上的應(yīng)用逐漸增多，但其質(zhì)量控制和穩(wěn)定性仍是影響其臨床應(yīng)用的重要問題。為保證益腎排毒丸的藥品質(zhì)量，確保其臨床療效，本研究對其穩(wěn)定性進(jìn)行了深入研究。在對樣品的有效成分進(jìn)行含量檢測時，選擇測定處方中君臣藥黃芪、大黃的有效成分含量[19]。2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）收載的黃芪含量測定的成分為黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷，但考慮到含量測定方法應(yīng)符合簡單、快速、有效等原則，本研究選取毛蕊異黃酮葡萄糖苷作為黃芪檢測的指標(biāo)性成分[20-21]。大黃素和大黃素甲醚也是藥典收載的大黃含量檢測的重要指標(biāo)性成分[22-23]。長期試驗(yàn)顯示，益腎排毒丸有效成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷、大黃素、大黃素甲醚在6個月內(nèi)含量穩(wěn)定，均在規(guī)定限度以上，由此可判定該制劑在6個月內(nèi)穩(wěn)定性良好。長期試驗(yàn)9個月含量測定數(shù)據(jù)顯示有效成分含量發(fā)生變化，因此，未進(jìn)行后續(xù)穩(wěn)定性研究，其含量變化原因也在進(jìn)一步探討中。

綜上所述，益腎排毒丸制劑具有良好的穩(wěn)定性。其在高溫、高濕及強(qiáng)光照條件下均較為穩(wěn)定，但對其有效分成的含量變化仍有一定影響，在貯存益腎排毒丸時應(yīng)注意環(huán)境的溫度、濕度和光照條件，將其避光貯存于干燥陰涼處。長期試驗(yàn)結(jié)果提示益腎排毒丸的預(yù)測有效期為6個月，該研究為其質(zhì)量控制及臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。

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（收稿日期：2018-05-16 本文編輯：王 蕾）