王玉華 董莎 孫豐卉 常磊 張鵬 趙東杰 李琪 宋方亞 辛隨成

摘要：目的 ?觀察針刺對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）小鼠脊髓鈣離子接頭蛋白-1（IBA-1）、環(huán)氧合酶-2（COX-2）及血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平的影響，探討其可能的作用機(jī)制。方法 ?將36只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4組，正常組小鼠不予處理，其余小鼠均制作EAE模型。造模后第14日開(kāi)始，正常組和模型組小鼠每日抓取1次，激素組小鼠給予醋酸潑尼松灌胃，針刺組小鼠針刺雙側(cè)“腎俞”“足三里”“大椎”。造模后28 d取材，檢測(cè)小鼠血清TNF-α含量及脊髓COX-2、IBA-1陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)果 ?與正常組比較，模型組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分及TNF-α、COX-2、IBA-1水平均明顯升高（P<0.01）;與模型組比較，針刺組和激素組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分和TNF-α、COX-2、IBA-1水平均明顯降低（P<0.01）;與針刺組比較，激素組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分和COX-2、IBA-1水平均明顯降低（P<0.05，P<0.01）。結(jié)論 ?針刺可降低EAE小鼠炎癥反應(yīng)，減輕脊髓神經(jīng)損傷，其機(jī)制可能與降低血清TNF-α含量，減少脊髓COX-2、IBA-1陽(yáng)性表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：多發(fā)性硬化;針刺;鈣離子接頭蛋白-1;環(huán)氧合酶-2;腫瘤壞死因子-α;實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎;小鼠

中圖分類(lèi)號(hào)：R245 ???文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ???文章編號(hào)：1005-5304（2019）05-0049-05

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.05.011 開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Abstract： Objective To observe the effects of acupuncture on the levels of IBA-1， COX-2 in spinal cord and serum TNF-α of experimental autoimmune encephalomyelitis （EAE） mice model; To clarify the mechanism of acupuncture treatment. Methods Thirty-six C57BL/6 mice were randomly divided into 4 groups. The normal group of mice were not immunologically molded， and the others were injected to replicate the EAE model. Since the 14th day after modeling， the normal group and the model group mice were taken once a day. Hormone group received prednisone acetate for gavage. Acupuncture group received acupuncture at “Shenshu”， “Zusanli”， and “Dazhui”. At the 28th day after of modeling， the content of serum TNF-α and the positive expressions of COX-2 and IBA-1 in the spinal cord were detected. Results Compared with the normal group， neurological function score， TNF-α， COX-2 and IBA-1 in the model group increased （P<0.01）. Compared with the model group， the neurological function scores and TNF-α， COX-2 and IBA-1 levels in the acupuncture group and the hormone group were significantly lower （P<0.01）. Compared with the acupuncture group， the neurological function score and COX-2 and IBA-1 levels in the hormone group were significantly lower （P<0.05， P<0.01）. Conclusion Acupuncture can reduce the inflammatory response of EAE mice and alleviate spinal nerve injury. The mechanism may be related to lowering serum TNF-α content and reducing the positive expressions of COX-2 and IBA-1 in spinal cord.

Keywords： multiple sclerosis; acupuncture; IBA-1; COX-2; TNF-α; experimental autoimmune encephalomyelitis; mice

多發(fā)性硬化以中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘病變?yōu)橹饕±碜兓痆1]。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）為國(guó)際公認(rèn)的多發(fā)性硬化動(dòng)物模型。EAE動(dòng)物模型病變部位存在炎癥因子浸潤(rùn)、神經(jīng)脫髓鞘病變甚至神經(jīng)細(xì)胞空泡樣壞死現(xiàn)象[2]。前期臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明，針刺可明顯改善多發(fā)性硬化患者臨床療效，降低EAE模型炎癥因子水平，抑制炎癥反應(yīng)[3-5]?，F(xiàn)代研究表明，環(huán)氧合酶（COX-2）參與炎癥反應(yīng)并與神經(jīng)損傷關(guān)系密切，鈣離子接頭蛋白-1（IBA-1）由神經(jīng)系統(tǒng)小膠質(zhì)細(xì)胞分泌，也參與炎癥反應(yīng)。核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路在神經(jīng)損傷時(shí)被激活，生成腫瘤壞死因子-α（TNF-α）參與炎癥反應(yīng)[6-8]。本實(shí)驗(yàn)觀察針刺對(duì)EAE小鼠脊髓內(nèi)IBA-1、COX-2和血清TNF-α水平的影響，進(jìn)一步探究針刺治療EAE的作用機(jī)制。

1 ?實(shí)驗(yàn)材料

1.1 ?動(dòng)物

8～10周齡健康雌性C57BL/6小鼠36只，體質(zhì)量18～20 g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（京）2012-0001。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物房，溫度20～24 ℃，相對(duì)濕度40%～60%，明暗周期12 h，自由攝食飲水。

1.2 ?主要試劑與儀器

MOG35-55肽段，北京百諾威生物有限公司，批號(hào)NJP30376;完全弗氏佐劑（其中結(jié)核桿菌H37Ra終濃度為4 mg/mL），北京華菁科技有限公司，批號(hào)170597;百日咳毒素，北京百諾威生物有限公司，批號(hào)181236A1;氯化鈉注射液，華潤(rùn)雙鶴藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)201804025;醋酸潑尼松片，上海上藥信誼藥廠有限公司，批號(hào)017171002;TNF-α ELISA檢測(cè)試劑盒，聯(lián)科生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)EK2821/2;兔抗COX-2多克隆抗體，英國(guó)Abcam公司，貨號(hào)ab15191;兔抗AIF1/Iba1多克隆抗體，英國(guó)Abcam公司，貨號(hào)ab178847。一次性0.25 mm×0.25 mm無(wú)菌針灸針，中研太和，批號(hào)172731;離心機(jī)，德國(guó) Sartorius公司，型號(hào)Sigam1-14;光學(xué)顯微鏡，北京銳馳恒業(yè)儀器有限公司，型號(hào)CX23;石蠟切片機(jī)，沈陽(yáng)裕德電子儀器公司，型號(hào)SYD-S3050;酶標(biāo)儀，美國(guó)BioTeK公司，型號(hào)FLX800T。

2 ?實(shí)驗(yàn)方法

2.1 ?造模

將MOG35-55多肽用生理鹽水稀釋至10 mg/mL，再與完全弗氏佐劑按1∶1比例充分混合至油包水乳劑，制成完全抗原。小鼠乙醚麻醉并固定，進(jìn)行免疫造模。將配制好的完全抗原按0.1 mL/只在小鼠背部脊柱旁分4點(diǎn)皮下注射。于免疫后第0、2日腹腔內(nèi)注射500 ng/只百日咳毒素，建立小鼠EAE模型[9-11]。

2.2 ?模型評(píng)價(jià)

從第0日開(kāi)始，直到第28日實(shí)驗(yàn)取材為止，每日9：00-11：00依據(jù)Kono等[12]神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。0分為無(wú)明顯異常;1分為動(dòng)物尾部張力降低或無(wú)力，動(dòng)作笨拙，輕度步態(tài)不穩(wěn)定;2分為尾部無(wú)張力且后肢無(wú)力，可伴有中度步態(tài)異?；蜃藨B(tài)維持缺乏;3分為后肢力弱或癱瘓，可伴有輕度前肢無(wú)力及輕度麻痹;4分為肢體嚴(yán)重麻痹，甚至全身癱瘓，被動(dòng)翻身后不能復(fù)原;5分為瀕死狀態(tài)。癥狀在二者之間按0.5分計(jì)算。將評(píng)分1～4分的小鼠納入實(shí)驗(yàn)。

2.3 ?分組及干預(yù)

C57BL/6小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組、激素組和針刺組，每組9只，均常規(guī)飼養(yǎng)。正常組小鼠不做處理，其余小鼠均行EAE造模，造模當(dāng)日記為第0日。小鼠造模后第14日起每日14：00-16：00進(jìn)行干預(yù)。正常組和模型組小鼠每日抓取、固定1次，給予生理鹽水0.1 mL/10 g灌胃，連續(xù)15 d;激素組進(jìn)行激素沖擊療法，將醋酸潑尼松片溶于生理鹽水，濃度為0.6 mg/mL，將小鼠固定后每日給予醋酸潑尼松藥液0.1 mL/10 g灌胃，連續(xù)15 d;針刺組針刺“大椎”（第7頸椎與第1胸椎之間，背部正中，直刺2～3 mm）、雙側(cè)“腎俞”（第2腰椎下兩旁，向脊柱方向斜刺2～3 mm）、雙側(cè)“足三里”（膝關(guān)節(jié)外側(cè)，腓骨小頭下0.3 cm處，直刺2～3 mm），每日針刺1次，留針15 min，共15次。第28日，小鼠眼球采血0.8～1 mL，取脊髓置于-80 ℃冰箱保存待檢。

2.4 ?指標(biāo)檢測(cè)

每日進(jìn)行小鼠神經(jīng)功能評(píng)分;用ELISA試劑盒檢測(cè)小鼠血清TNF-α含量;用兔抗COX-2多克隆抗體、兔抗AIF1/Iba1多克隆抗體和免疫組化檢測(cè)小鼠脊髓COX-2、IBA-1陽(yáng)性表達(dá)平均光密度（MOD）。

3 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，組間比較采用方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 ?結(jié)果

4.1 ?針刺對(duì)模型小鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響

第0日，小鼠神經(jīng)功能評(píng)分均為0分;第12日模型組小鼠開(kāi)始出現(xiàn)輕度動(dòng)作笨拙、步態(tài)不穩(wěn)癥狀，神經(jīng)功能評(píng)分為（0.11±0.22）分，其余組別未有變化;模型組第20日時(shí)評(píng)分達(dá)到峰值（3.11±0.42）分，之后評(píng)分逐漸減少;針刺組小鼠第16日出現(xiàn)尾部張力降低或無(wú)力，動(dòng)作笨拙等神經(jīng)功能異常癥狀，神經(jīng)功能評(píng)分為（0.89±0.33）分，第24日神經(jīng)功能評(píng)分最高（2.06±0.30）分，之后評(píng)分有所下降;激素組小鼠第16日出現(xiàn)尾部張力降低或無(wú)力，輕度步態(tài)不穩(wěn)，神經(jīng)功能評(píng)分為（0.44±0.30）分，第24日評(píng)分達(dá)到峰值（1.67±0.35）分。結(jié)果見(jiàn)表1。

4.2 ?針刺對(duì)模型小鼠脊髓環(huán)氧合酶-2、鈣離子接頭蛋白-1表達(dá)的影響

與正常組比較，模型組小鼠脊髓COX-2、IBA-1陽(yáng)性表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組比較，針刺組和激素組小鼠脊髓COX-2、IBA-1陽(yáng)性表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與針刺組比較，激素組小鼠脊髓COX-2、IBA-1陽(yáng)性表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

4.3 ?針刺對(duì)模型小鼠血清腫瘤壞死因子-α含量的影響

與正常組比較，模型組小鼠血清TNF-α含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組比較，針刺組和激素組小鼠血清TNF-α含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與針刺組比較，激素組小鼠血清TNF-α含量無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3。

4.4 ?免疫組化染色結(jié)果

COX-2、IBA-1主要存在于EAE模型小鼠脊髓胞漿內(nèi)，表現(xiàn)為黃色或棕黃色顆粒。正常組小鼠脊髓細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，染色均勻，細(xì)胞染色多為藍(lán)色，胞漿內(nèi)可見(jiàn)少量COX-2、IBA-1黃色顆粒。與正常組比較，模型組小鼠脊髓胞漿內(nèi)黃色顆粒明顯增多，細(xì)胞體積增大，形態(tài)呈不規(guī)則狀，COX-2、IBA-1含量明顯增加;與模型組比較，針刺組和激素組小鼠脊髓胞漿內(nèi)黃色顆粒有所減少，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，COX-2、IBA-1含量降低;與針刺組比較，激素組小鼠脊髓胞漿內(nèi)黃色顆粒較少，染色較淺，正常細(xì)胞數(shù)量較多，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)整。結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

5 ?討論

多發(fā)性硬化發(fā)作時(shí)，參與的主要免疫細(xì)胞有T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。中樞神經(jīng)脫髓鞘病變，刺激小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)，生成大量炎癥因子，隨著病情進(jìn)展，外周T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、炎癥因子等通過(guò)血腦屏障，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生大量促炎因子，炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致過(guò)度炎癥反應(yīng)，損傷神經(jīng)髓鞘，影響神經(jīng)功能[13-14]。此外，小膠質(zhì)細(xì)胞還可呈遞抗原給T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，加重炎癥反應(yīng)、神經(jīng)損傷[15]。EAE動(dòng)物造模機(jī)制與多發(fā)性硬化相似，與炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，動(dòng)物血腦屏障被破壞，產(chǎn)生炎癥因子進(jìn)入中樞神經(jīng)，誘導(dǎo)發(fā)生過(guò)度炎癥反應(yīng)，造成神經(jīng)炎性、脫髓鞘病變[16]。

COX-2是花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素的限速酶，通常COX-2分泌很少或不分泌，炎癥反應(yīng)時(shí)明顯增多。EAE小鼠COX-2 mRNA表達(dá)水平明顯升高，COX-2通過(guò)PI3K-Akt、JNK1/2等炎癥相關(guān)信號(hào)通路促進(jìn)炎癥反應(yīng)，并誘導(dǎo)產(chǎn)生其他炎癥因子，通過(guò)血腦屏障，激活小膠質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，攻擊神經(jīng)髓鞘，加重中樞神經(jīng)損傷[17-20]。敲低lincRNA-Cox2可促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞自噬、抑制巨噬細(xì)胞激活，使小膠質(zhì)細(xì)胞處于靜息狀態(tài)，減輕炎癥損傷，減少EAE發(fā)病，改善EAE臨床癥狀[21]。小膠質(zhì)細(xì)胞受炎癥刺激活化變形時(shí)會(huì)產(chǎn)生IBA-1、TNF-α，二者均可促進(jìn)炎癥因子釋放，形成炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，加重炎癥反應(yīng)[22-23]。此外，巨噬細(xì)胞在神經(jīng)系統(tǒng)受到炎癥刺激時(shí)活化，也會(huì)產(chǎn)生IBA-1，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[24]。

多發(fā)性硬化屬中醫(yī)學(xué)“風(fēng)痱”“痿證”“痹證”范疇，多有外感史，邪毒外襲，素體虧虛，無(wú)力抗邪而發(fā)病，或內(nèi)生邪毒阻滯脈絡(luò)，痰瘀內(nèi)生，蘊(yùn)集于髓腦，清陽(yáng)不升，濁陰不降，筋脈失養(yǎng)，久而成疾[25]。病位在腦、脊髓，與腎、脾、胃相關(guān)，證屬腎精虧虛，后天不足，髓腦失養(yǎng)。腎為后天之本，腎生髓，腎精虧虛，化髓無(wú)源，髓?？仗?，腦失髓養(yǎng)而發(fā)。腎精不足，損及腎陽(yáng)，腎陽(yáng)虧虛，鼓動(dòng)無(wú)力，精髓無(wú)力上呈，髓腦失養(yǎng)加重。本研究選穴為腎俞（雙側(cè)）、大椎。腎俞屬足太陽(yáng)膀胱經(jīng)，為腎臟背腧穴?！鞍螂鬃闾?yáng)之脈，起于目?jī)?nèi)毗，上額，交巔……其直者，從巔入絡(luò)腦”（《靈樞·經(jīng)脈》）。針刺雙側(cè)腎俞可補(bǔ)腎益髓，助陽(yáng)化髓，補(bǔ)益髓腦，亦可疏通膀胱經(jīng)脈，促進(jìn)髓、腦精微物質(zhì)循環(huán)。足三里屬足陽(yáng)明胃經(jīng)，是胃經(jīng)的合穴。臨床素有“治痿獨(dú)取陽(yáng)明”，陽(yáng)明經(jīng)多氣多血，針刺足三里可補(bǔ)益氣血，濡養(yǎng)經(jīng)筋。脾胃位于中焦，針刺足三里可補(bǔ)益中焦、固護(hù)后天、濡養(yǎng)先天。大椎屬督脈，是督脈與手足三陽(yáng)經(jīng)的交會(huì)穴，為“諸陽(yáng)之會(huì)”。督脈為“陽(yáng)經(jīng)之?！?，主一身之陽(yáng)氣，行于背部正中，上至風(fēng)府，入屬于腦，腦、脊髓精液通過(guò)督脈相溝通，針刺大椎，可振一身之陽(yáng)氣，助腎髓上行于腦[26]。此外，針刺大椎，升發(fā)陽(yáng)氣，還可抵抗邪毒，驅(qū)邪外出。針刺腎俞（雙側(cè)）、大椎可補(bǔ)腎益髓、升陽(yáng)化髓，驅(qū)邪外出，治療多發(fā)性硬化具有良好的效果。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組較正常組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分、血清TNF-α含量及脊髓COX-2、IBA-1表達(dá)均明顯升高;針刺與激素治療后明顯降低EAE小鼠神經(jīng)功能評(píng)分，延遲EAE發(fā)作，且EAE小鼠血清TNF-α含量、脊髓COX-2、IBA-1表達(dá)均明顯降低;激素組較針刺組在改善小鼠神經(jīng)功能評(píng)分及脊髓組織COX-2、IBA-1陽(yáng)性表達(dá)方面效果更明顯。

綜上，對(duì)EAE小鼠采用激素沖擊或針刺治療，均可降低EAE模型小鼠COX-2、IBA-1、TNF-α水平，降低EAE神經(jīng)功能評(píng)分，說(shuō)明激素沖擊、針刺治療均可延遲、減輕EAE小鼠神經(jīng)損傷。雖然與針刺治療相比，激素沖擊療法降低EAE小鼠神經(jīng)功能評(píng)分及降低脊髓COX-2、IBA-1表達(dá)效果更佳，但激素沖擊治療不良反應(yīng)大。所以，針刺EAE小鼠“腎俞”“足三里”“大椎”可安全有效地抑制中樞神經(jīng)炎癥反應(yīng)，延遲、減輕神經(jīng)功能損傷，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化，降低炎癥反應(yīng)，保護(hù)脊髓神經(jīng)，治療多發(fā)性硬化。今后將進(jìn)一步深入研究，明確針刺治療EAE小鼠作用靶點(diǎn)、信號(hào)傳導(dǎo)通路及其對(duì)基因表達(dá)的影響。

參考文獻(xiàn)：

[1] SIMPSON S， TAYLOR B V， VAN DER MEI I. The role of epidemiology in us research：past successes， current challenges and future potential[J]. Multiple Sclerosis Journal，2015，21（8）：969-977.

[2] 邱雪梅，劉學(xué)，何小鵑，等.實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同部位病理變化比較[J].遼寧中醫(yī)雜志，2017，44（9）：1972- 1974.

[3] 辛隨成.針刺治療38例多發(fā)性硬化周?chē)窠?jīng)損傷的肌電圖變化[C]//中國(guó)針灸學(xué)會(huì)臨床分會(huì)全國(guó)第十九屆針灸臨床學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.北京：中國(guó)針灸學(xué)會(huì)，2011：10.

[4] 易錦，劉燕青，李倩，等.電針對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠急性期腦組織IFN-γ、IL-4含量的影響[J].武警醫(yī)學(xué)，2009，20（11）：991- 993.

[5] 劉燕青.電針治療對(duì)EAE模型大鼠血清TNF-α、IL-10含量的影響[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2009.

[6] SASAKI T， KITAGAWA K， YAMAGATA K， et al. Amelioration of hippocampal neuronal damage after transient forebrain ischemia in cyclooxygenase-2-deficient mice[J]. J Cereb Blood Flow Metab， 2004，24（1）：107-113.

[7] 胡景霞，宋文剛，白波.小膠質(zhì)細(xì)胞的活化在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎中的作用[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27（12）：1367-1369， 1374.

[8] 陳成春，黃濤，金建華.腦挫傷后腫瘤壞死因子α表達(dá)水平變化的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志，2006，24（1）：90-92.

[9] 燕偉平，秦新月，黃琦，等.實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎小鼠中IL-27對(duì)CCL5表達(dá)的影響[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36（13）：1408-1412.

[10] 婉維，陳克研，魏政立，等.MOG誘導(dǎo)小鼠EAE模型的建立及相關(guān)免疫指標(biāo)的變化[J].解剖科學(xué)進(jìn)展，2018，24（4）：382-385.

[11] 張新燕.建立C57BL/6小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型的影響因素及雷帕霉素治療的探索[D].蘭州：蘭州大學(xué)，2018.

[12] KONO D H， URBAN J L， HORVATH S J， et al. Two minor determinants of myelin basic protein induce experimental allergic encephalomyelitis in SJL/J mice[J]. J Exp Med，1988，168（1）：213-227.

[13] 葉妮，李國(guó)陵，程曉東.神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞在EAE脫髓鞘和髓鞘再生中的作用機(jī)制進(jìn)展[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2018，34（4）：602-608.

[14] 楊帆，顏光濤，李濤.多發(fā)性硬化相關(guān)T細(xì)胞免疫機(jī)制的研究進(jìn)展[J].免疫學(xué)雜志，2013，29（5）：452-456.

[15] 梁湘輝，朱文浩，高穎.小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)多發(fā)性硬化發(fā)病的機(jī)制研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，24（27）：3067-3071.

[16] 徐晨晨，孟強(qiáng).多發(fā)性硬化的免疫機(jī)制進(jìn)展及潛在治療靶點(diǎn)[J/OL].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)[2018-10-07].https：//doi.org/10.13406/j.cnki. cyxb.001794.

[17] 林福虹，鄭榮遠(yuǎn)，王沛，等.2-BFI對(duì)EAE小鼠iNOS和COX-2 mRNA表達(dá)的影響[J].中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，2011，18（1）：27-31.

[18] 朱文浩，劉璐，高穎.益腎達(dá)絡(luò)飲對(duì)EAE小鼠p-JNK1/2，JNK1/2，COX-2的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（17）：101-105.

[19] KAWABATA A. Prostaglandin E2 and pain—an update[J]. Biol Pharm Bull，2011，34（8）：1170-1173.

[20] ELISABETTA P， BARBARA M. Microglia and neuroprotection：from in vitro studies to therapeutic applications[J]. Progress in Neurobiology，2010，92（3）：293-351.

[21] 薛振毅.lincRNA-Cox2調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞自噬和實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎機(jī)制研究[D].天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2017.

[22] 江茜，王英，夏陽(yáng)陽(yáng)，等.臭牡丹對(duì)SNI誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性痛大鼠脊髓和背根神經(jīng)節(jié)COX-2表達(dá)的作用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2018，29（5）：1058- 1060.

[23] GAUTAM S， BOKYUNG S， HARAT B. Nuclear factor-κB activation： from bench to bedside[J]. Experimental Biology and Medicine， 2008，233（1）：21-31.

[24] SASAKI Y， OHSAEA K， KANAZAWA H， et al. Iba1 is an actin-cross- linking protein in macrophages/microglia[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications，2001，286（2）：292-294.

[25] 安成爀.針刺對(duì)EAE大鼠IL-17、NO影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[26] 鄭澤泉，林興棟.督脈、三焦與多發(fā)性硬化的關(guān)系[J].四川中醫(yī)， 2017，35（1）：32-33.

（收稿日期：2018-09-19）

（修回日期：2018-10-08;編輯：華強(qiáng)）