趙海忠 李良華 宋忠旭 孫 華 彭先文 梅書棋

湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/ 動(dòng)物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢430064

豬鏈球菌?。╯wine streptococcosis）是由多種致病性豬鏈球菌（Streptococcus suis）引起的一種細(xì)菌類疾病，臨床上可分為敗血癥型、腦膜炎型、關(guān)節(jié)炎型、淋巴結(jié)膿腫型等[1]。豬鏈球菌病一年四季均可發(fā)生，無明顯的發(fā)病季節(jié)，但天氣悶熱的夏秋季節(jié)為高發(fā)期，3～12 周齡的仔豬最易感，多呈地方性流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。筆者接診某規(guī)模化豬場(chǎng)保育豬疑似感染豬鏈球菌病臨床病例，結(jié)合發(fā)病情況、臨床剖檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)、PCR 檢測(cè)，診斷主要病原為豬鏈球菌感染，并進(jìn)行動(dòng)物致病性試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)，結(jié)合實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，采用針對(duì)性綜合防控措施，疫情得到有效控制，現(xiàn)將診治情況報(bào)道如下，供養(yǎng)殖實(shí)踐參考。

1 發(fā)病情況

2018年7月下旬，武漢某規(guī)?；i場(chǎng)5～6 周齡仔豬出現(xiàn)以關(guān)節(jié)腫脹（圖1）、跛行、運(yùn)動(dòng)障礙為主要臨床表現(xiàn)的臨床病例，發(fā)病率20%左右，病死率10%左右。病豬主要表現(xiàn)食欲下降，精神萎靡，皮膚充血、潮紅，共濟(jì)失調(diào)，體溫41.0～42.5 ℃，黏膜發(fā)紺，部分仔豬四肢內(nèi)側(cè)、腹下皮膚發(fā)紫，關(guān)節(jié)腫大，跛行，不能站立，觸壓有熱痛，驅(qū)趕時(shí)尖叫，部分病豬出現(xiàn)角弓反張等神經(jīng)癥狀，最后部分病豬衰竭死亡。

圖1 關(guān)節(jié)腫脹

2 臨床剖檢

選取具有典型臨床癥狀的病死豬3 頭進(jìn)行解剖，可見關(guān)節(jié)周圍水腫、滑膜腫脹充血、關(guān)節(jié)液混濁，出現(xiàn)化膿性炎癥。其中1 頭病例可見心包積液增多、呈淡淡的青色，肺臟邊緣有黃色纖維素性滲出物，肺間質(zhì)增寬，腎臟腫大，腸道水腫。分別無菌采集關(guān)節(jié)液、淋巴結(jié)、心臟、肝臟、脾臟、肺臟等病料3 份冷藏保存后立即送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

取3 份樣品，分別接種于鮮血瓊脂平板（含5%兔脫脂血）上，37 ℃溫箱培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)結(jié)果見圖2，觀察菌落形態(tài)，菌落呈圓形、表面光滑、中央隆起、邊緣整齊、透明、灰白色、針尖大的露珠狀小菌落，并產(chǎn)生明顯的β 型溶血。挑取典型菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，可見革蘭氏陽性、短鏈狀或單在的球菌。

圖2 豬鏈球菌培養(yǎng)結(jié)果

3.2 PCR 檢測(cè)

樣品經(jīng)過處理后通過常規(guī)PCR 擴(kuò)增鏈球菌（SS）基因，當(dāng)樣品中含有鏈球菌時(shí)會(huì)擴(kuò)增出294 bp的陽性片段，PCR 檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果見圖3。結(jié)果1#、2#樣品中擴(kuò)增出294 bp 的片段，檢出SS 陽性比例為66.7%。

圖3 電泳結(jié)果

3.3 動(dòng)物致病性試驗(yàn)

挑取單個(gè)菌落接種于THB 培養(yǎng)基中做增菌培養(yǎng)，37 ℃溫箱培養(yǎng)24 h，將1#、2#培養(yǎng)菌液混合后腹腔注射10 只SPF 級(jí)昆明小鼠，0.2 mL/只，另設(shè)10只小白鼠生理鹽水對(duì)照，同等條件下飼養(yǎng)觀察7 d，攻菌10 h 后試驗(yàn)組部分小鼠出現(xiàn)精神萎靡、行動(dòng)遲緩、食欲下降等臨床癥狀，試驗(yàn)結(jié)束共有6 只小鼠死亡，對(duì)照組10 只小鼠均健活。試驗(yàn)結(jié)果表明，該分離菌株具有較強(qiáng)的致病性。

3.4 藥敏試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，將1#、2#菌株增菌培養(yǎng)后菌液用生理鹽水稀釋為1×105/mL，取0.2 mL 稀釋后菌液于血清瓊脂平板上，用玻璃棒將其涂布均勻，然后用無菌鑷子將藥敏紙片貼在已接種被檢菌株的平板上，2 片之間的距離1～2 cm 為宜，置于37 ℃溫箱培養(yǎng)18 h，分別測(cè)定抑菌環(huán)的直徑，分析菌株對(duì)各藥物的敏感性，藥敏性試驗(yàn)結(jié)果見表1。結(jié)果表明，分離的菌株對(duì)阿莫西林、氨芐西林、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢噻呋高度敏感；對(duì)慶大霉素、林可霉素、四環(huán)素、復(fù)方新諾明、大觀霉素、鏈霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、多粘菌素B、磺胺嘧啶耐藥。

4 診斷結(jié)果

根據(jù)發(fā)病豬的臨床癥狀、病理剖檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)和PCR 檢測(cè)結(jié)果，確診該場(chǎng)患病仔豬為豬鏈球菌感染。

表1 鏈球菌藥敏性試驗(yàn)結(jié)果

5 綜合防控

5.1 對(duì)癥治療

治療首選頭孢類藥物，頭孢噻呋5 mg/kg+安乃近2 mL+地塞米松3 mL，肌注，1 次/d，連用3 d。嚴(yán)重病例及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)液（復(fù)合維生素B 1 mL+Vc 1 mL+地塞米松1 mL+5%葡萄糖氯化鈉注射液40～60 mL），同時(shí)在飼料中添加藥物，每噸分別添加30%阿莫西林180 g+50%復(fù)方黃芪多糖250 g+電解多維1 000 g；增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高豬群健康水平。

5.2 免疫接種

全群緊急普免豬鏈球菌三價(jià)滅活疫苗1 頭份，豬鏈球菌常規(guī)免疫程序采取“普免”和“跟胎免疫”相結(jié)合，6月底全群季節(jié)性普免三價(jià)滅活疫苗1 頭份；母豬產(chǎn)前5 周免疫三價(jià)滅活疫苗1 頭份；仔豬28日齡免疫三價(jià)滅活疫苗1 頭份。

5.3 生物安全防范

及時(shí)隔離發(fā)病豬舍，將病豬集中于隔離欄治療，并每天帶豬消毒，對(duì)無治療價(jià)值仔豬盡早淘汰處理。病死豬及時(shí)進(jìn)行無害化處理，消除傳染源，加強(qiáng)消毒管理，對(duì)于發(fā)病期間豬所使用的食槽及飼養(yǎng)管理用具以及病豬和帶菌豬的排泄物、分泌物進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，切斷傳播途徑，防止進(jìn)一步傳染與擴(kuò)散。發(fā)病單元清空后，及時(shí)清洗消毒，干燥后再用甲醛熏蒸，空欄7 d 以上。

5.4 精細(xì)化飼養(yǎng)管理

首先，改善飼養(yǎng)環(huán)境，加強(qiáng)豬舍內(nèi)通風(fēng)換氣，保持舍內(nèi)環(huán)境溫濕度在豬只適宜范圍內(nèi)，營(yíng)造舒適豬舍小環(huán)境；其次，提供優(yōu)質(zhì)全價(jià)飼料，確保仔豬營(yíng)養(yǎng)均衡，以提高機(jī)體的免疫力與抗病力；最后，做好豬群管理，實(shí)行全進(jìn)全出和批次化生產(chǎn)，降低飼養(yǎng)密度。

6 討 論

1）病因初步分析。高溫高濕、氣溫驟變、飼養(yǎng)密度過大等因素造成仔豬抵抗力降低，誘發(fā)豬鏈球菌病。營(yíng)造舒適豬舍小環(huán)境，降低飼養(yǎng)密度，提供優(yōu)質(zhì)飼料，及時(shí)進(jìn)行藥物保健，提高豬群的免疫力，可有效降低豬鏈球菌病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

2）豬鏈球菌的耐藥特性呈上升趨勢(shì)。近年來，由于抗生素大量使用及濫用，產(chǎn)生了大量的耐藥菌株，疾病臨床控制難度越來越大。本研究發(fā)現(xiàn)，鏈球菌分離菌株對(duì)10 種臨床常用藥物全部耐藥，其耐藥程度相當(dāng)嚴(yán)重，豬鏈球菌耐藥已成為全球性問題[3]。李文嫻等[4]報(bào)道2017年河南省8 株豬鏈球菌對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星高度敏感，但本次試驗(yàn)鏈球菌分離菌株對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星均產(chǎn)生了耐藥，應(yīng)引起養(yǎng)殖場(chǎng)的高度重視。在臨床防治豬鏈球菌病時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果篩選出高敏感藥物，有針對(duì)性地合理、科學(xué)、規(guī)范用藥。