王江鳳 高美華 張娟

摘要：目的 ?探究冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血Th17細(xì)胞與IL-17水平變化的意義。方法 ?收集青島阜外心血管病醫(yī)院冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者200例，根據(jù)疾病類型分為心肌梗死（AMI）組（52例）、不穩(wěn)定型心絞痛（UA）組（68例）、穩(wěn)定型心絞痛（SA）組（80例），另外選取同期200例體檢者作為對(duì)照組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)患者Th17細(xì)胞頻率，ELISA法檢測(cè)各組血清中IL-17、CRP表達(dá)水平。結(jié)果 ?流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，各組Th17細(xì)胞的頻率表達(dá)均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且AMI組升高水平高于SA組和UA組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）; ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，各組IL-17及CRP表達(dá)水平均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且AMI組升高水平高于SA組和UA組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ?冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者血中Th17及IL-17水平的升高，可能是導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者板塊不穩(wěn)定的原因。

關(guān)鍵詞：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化;Th17;IL-17;CRP

中圖分類號(hào)：R541.4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.12.020

文章編號(hào)：1006-1959（2019）12-0064-03

Abstract：Objective ?To investigate the significance of changes in Th17 cells and IL-17 levels in peripheral blood of patients with coronary atherosclerosis. Methods ?A total of 200 patients with coronary atherosclerosis were enrolled in Qingdao Fuwai Cardiovascular Hospital. According to the disease type， they were divided into myocardial infarction （AMI） group （52 cases）， unstable angina （UA） group （68 cases）， stable angina pectoris. In the （SA） group （80 cases）， another 200 physical examination subjects were selected as the control group. The frequency of Th17 cells was detected by flow cytometry. The expression levels of IL-17 and CRP in serum of each group were detected by ELISA. Results ?The results of flow cytometry showed that compared with the control group， the frequency of Th17 cells in each group increased， the difference was statistically significant （P<0.05）， and the elevated level of AMI group was higher than that of SA group and UA group，the difference was statistically significant （P<0.05）. The results of ELISA showed that compared with the control group， the expression levels of IL-17 and CRP increased in each group， the difference was statistically significant （P<0.05）， and the AMI group increased. The level was higher than that of SA group and UA group，the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ?The elevated levels of Th17 and IL-17 in patients with coronary atherosclerosis may be responsible for plate instability in patients with coronary atherosclerosis.

Key words：Coronary atherosclerosis;Th17;IL-17;CRP

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化?。╟oronary atherosclerosis）是一種慢性炎癥性動(dòng)脈硬化性疾病，世界范圍內(nèi)病死率較高，在中國其發(fā)病人數(shù)顯著增加[1]。有研究發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞參與該病發(fā)生發(fā)展，過去研究大多發(fā)現(xiàn)Th1、Th2參與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化炎癥病理過程，認(rèn)為Th1細(xì)胞可促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展[2]。最新研究發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞也參與炎癥反應(yīng)，Th17細(xì)胞被視為炎癥反應(yīng)重要調(diào)節(jié)因子，IL-17作為TH17分泌的特征性細(xì)胞因子，參與多種炎癥性疾病的發(fā)展。TH17/IL-17在系統(tǒng)性紅斑狼[3，4]等免疫性疾病的研究較多，其在冠脈粥樣硬化中相關(guān)作用仍在研究。CRP作為一種敏感的炎癥和組織損傷標(biāo)志物，在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中扮演重要作用。大量臨床和基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)表明，CRP在冠脈硬化癥中發(fā)揮重要作用[5]。Th17與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，CRP在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化癥里的報(bào)道也漸增多，因此研究TH17、IL-17及CRP在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化癥的機(jī)制有重要意義。本文通過檢測(cè)Th17細(xì)胞在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者血清中的變化，探討TH17、IL-17、CRP與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化癥的關(guān)系，為臨床提供參考依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 ?收集2017年6月～2018年6月青島阜外心血管病醫(yī)院冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者200例，男122例，女78例。根據(jù)疾病類型分為心肌梗死（AMI）組、不穩(wěn)定型心絞痛（UA）組、穩(wěn)定型心絞痛（SA）組。其中AMI組52例，伴有突發(fā)性的胸前區(qū)疼痛，且持續(xù)時(shí)間>30 min，不緩解，心肌標(biāo)志物超過正常范圍，有典型心電圖波段變化或動(dòng)態(tài)改變;UA組68例，胸痛時(shí)有進(jìn)行性加重，伴有ST段一過性改變;SA組80例，休息或含化硝酸甘油可在幾分鐘內(nèi)緩解，日常活動(dòng)下心電圖無異常，發(fā)作時(shí)或行心電圖負(fù)荷試驗(yàn)有波段壓低，檢測(cè)心肌壞死標(biāo)志物未超過正常范圍;另外選擇同期排除冠狀動(dòng)脈病變的體檢者200例為對(duì)照組。各組年齡、性別、血壓、血糖、吸煙史、血脂情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），研究可比，見表1。

1.2標(biāo)本收集 ?冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者均于發(fā)病后6 h內(nèi)采集肘部靜脈血5 ml，體檢者于早上10點(diǎn)前采集肘部靜脈血5 ml，離心后分離取上清凍存與-80℃冰箱供后續(xù)實(shí)驗(yàn)用。

1.3相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) ?高血壓參照《中國高血壓防治指南》2018修訂版：在未使用降壓藥物的情況下 SBP≥140 mmHg 和（或）DBP≥90 mmHg。糖尿病參照最新糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)：一個(gè)隨機(jī)的靜脈血漿葡萄糖濃度≥11.1 mmol/L或空腹血糖濃度≥7.0 mmol/L（全血≥6.1 mmol/L）或餐后2h血糖濃度≥11.1 mmol/ L與75 g 2 h后無水葡萄糖在口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）。血脂異常：TG>1.8 mmol/L，CHO>5.69 mmol/L，HDL>1.55 mmol/L，LDL>3.12 mmol/L。

1.4實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 ?全自動(dòng)生化分析儀P800（德國羅氏診斷有限公司）、AU580全自動(dòng)生化分析儀（美國貝克曼集團(tuán)有限公司）、MK3酶標(biāo)儀（美國Thermo）、流式細(xì)胞儀（美國BD公司）。總膽固醇（CHOL）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、尿酸（UA）試劑盒、葡萄糖（GLU）測(cè)定試劑盒，試劑盒購自上海羅氏;血清IL-17、CRP ELISA試劑盒購自武漢基因美公司;Intracellular Fixation&Permeabilization Buffer Set、抗人CD4FITC抗體、抗鼠CD4FITC抗體、抗人IL-17A-PE抗體、抗鼠IL-17A-PE抗體購自美國eBioscience公司。

1.5方法 ?①采用全自動(dòng)生化分析儀P800檢測(cè)標(biāo)本中CHOL、HDL-C、LDL-C、UA、GLU表達(dá)水平，按試劑盒說明書設(shè)定各項(xiàng)指標(biāo)參數(shù);②FCM 檢測(cè)外周血中TH17細(xì)胞頻率，將待檢血清50 μl及Th17抗體15 μl加入流式管內(nèi)混勻后避光條件下孵育20 min，隨后加入500 μl溶血素繼續(xù)孵育10 min，再加入500 μl PBS混勻，2000 rpm 離心5 min，棄上清，用300 μl PBS重懸細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)Th17細(xì)胞百分比;③細(xì)胞因子IL-17、CRP檢測(cè)：取待測(cè)標(biāo)本血清，采用雙抗體夾心法參照相應(yīng)試劑盒說明書操作，使用MK3酶標(biāo)儀在450 nm下測(cè)定吸光度（OD值），并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中IL-17、CRP濃度。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 ?應(yīng)用Prism 5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)比較采用F檢驗(yàn)，P<0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

與對(duì)照組比較，各組Th17細(xì)胞的頻率表達(dá)均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且AMI組升高水平高于SA組和UA組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）; ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，各組IL-17及CRP表達(dá)水平均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且AMI組升高水平高于SA組和UA組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3討論

冠心病是一種血管冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變導(dǎo)致的血管管腔狹窄繼而引起心肌缺血壞死誘發(fā)的心臟疾病。該病以嚴(yán)重的胸痛、心律失常、心衰為典型臨床特征[6]。依據(jù)心電圖ST段抬高分為兩大類[7]， 該病目前起病急，因此尋找更快更合適的血清學(xué)指標(biāo)，及時(shí)給予干預(yù)治療，具有重要意義。近年來，不少學(xué)者提出炎癥學(xué)說，炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化的所有階段起著關(guān)鍵作用[8， 9]。

Th細(xì)胞協(xié)調(diào)免疫應(yīng)答的主要手段之一是產(chǎn)生細(xì)胞因子?，F(xiàn)已明確定義[10]的有分泌的Th1細(xì)胞亞群、Th2細(xì)胞亞群，最新研究發(fā)現(xiàn)Th17作為一種新型T細(xì)胞分子，與炎癥性疾病，過敏性疾病有重要關(guān)系。IL-17主要來自于Th17的分泌，其不光能夠分泌IL-6、IL-8，還能水解蛋白酶，另一方面也能募集中性粒細(xì)胞，一定程度上參與炎癥過程[11]。外周血中高水平的IL-17在急性冠脈綜合征患者表達(dá)，這也就說明IL-17在冠脈硬化性疾病中有著重要作用。本次研究顯示，與對(duì)照組比較，各組TH17及IL-17表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），SA組TH17及IL-17表達(dá)水平均升高，UA組TH17及IL-17表達(dá)水平均升高，AMI組TH17及IL-17表達(dá)水平均升高，且AMI組升高水平高于SA組，AMI組升高水平高于UA組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這些也與之前文獻(xiàn)所提到的結(jié)果相一致，這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步說明TH17、IL-17在冠狀動(dòng)脈硬化疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

CRP是由肝臟合成的一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，主要作用于淋巴細(xì)胞膜表面受體，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增生，進(jìn)一步抑制T淋巴細(xì)胞增生分化[12]， 在正常人血清中能檢測(cè)到的含量很少，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)感染、損傷、炎癥或者腫瘤等情況時(shí)，其含量明顯升高。CRP與急性冠狀動(dòng)脈粥樣硬化癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[13]。研究發(fā)現(xiàn)，CRP作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)粘附分子，從而釋放炎性介質(zhì)，進(jìn)一步加劇脂質(zhì)的沉積，最終加重疾病進(jìn)展。本研究中結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，SA組CRP表達(dá)水平升高，UA組CRP表達(dá)水平升高， AMI組CRP表達(dá)水平升高，UA組CRP表達(dá)水平低于AMI組，且高于對(duì)照組，可說明CRP在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化中起到促進(jìn)作用。

綜上所述，本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TH17、IL-17和CRP在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化癥發(fā)生發(fā)展中起到重要作用，或可導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者斑塊的不穩(wěn)定性，然而其更為具體的機(jī)制需要后期進(jìn)一步研究。

最后，感謝青島阜外心血管病醫(yī)院為本次研究提供數(shù)據(jù)支持！

參考文獻(xiàn)：

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì).中國心血管病預(yù)防指南[J].中華心血管病雜志，2011，5（1）：263-279.

[2]Alie N，Eldib M，F(xiàn)ayad ZA，et al.Inflammation，Atherosclerosis，and Coronary Artery Disease： PET/CT for the Evaluation of Atherosclerosis and Inflammation[J].Clinical Medicine Insights Cardiology，2014，8（Suppl3）：13-21.

[3]Elshabrawy HA，Chen Z，Volin MV，et al.The pathogenic role of angiogenesis in rheumatoid arthritis[J].Angiogenesis，2015，18（4）：433-448.

[4]Geiler T，Lorenz HM，Kalden JR，et al.Pathogenesis of rheumatoid arthritis[J].Journal of Physiology，2018，92（6）：347-353.

[5]Kim SW，Kang HJ，Bae KY，et al.Interactions between pro-inflammatory cytokines and statins on depression in patients with acute coronary syndrome[J].Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2017，80（3）：250-254.

[6]Motoyama S，Ito H，Sarai M，et al.Reply：Plaque Characterization by Coronary Computed Tomography Angiography and Association With Acute Coronary Syndrome[J].Journal of the American College of Cardiology，2016，67（4）：459-460.

[7]Yee J，Rajpurohit N，Khan MA，et al.Review of Acute Coronary Syndromes： Diagnosis and Management of ST-Elevation Myocardial Infarction[J].South Dakota Journal of Medicine，2015，68（2）：357-361.

[8]Maracle CX，Agca R，Helder B，et al.AB0265 Non-Canonical NF-κB Signaling in Microvessels of Atherosclerotic Lesions in Coronary Arteries Is Associated with Inflammatory Cell Infiltration and Myocardial Infarction[J].Annals of the Rheumatic Diseases，2016，75（ 2）：990-999.

[9]Smits NC，Kobayashi T，Srivastava PK，et al.HS3ST1 genotype regulates antithrombin's inflammomodulatory tone and associates with atherosclerosis[J].Matrix Biology，2017，63（12）：69-90.

[10]Yamane H，Paul WE.Cytokines of the γ（c）family control CD4+T cell differentiation and function[J].Nat Immunol，2012，13（11）：1037-1044.

[11]Zihui W，Iresha S，Henry D，et al.Differential Phenotypes of Tissue-Infiltrating T Cells during Angiotensin II-Induced Hypertension in Mice[J].Plos One，2014，9（12）：1-21.

[12]Daigo K，Inforzato A，Barajon I，et al.Pentraxins in the activation and regulation of innate immunity[J].Immunological Reviews，2016，274（1）：202-217.

[13]Mirza AJ，Taha AY，Khdhir BR.Risk factors for acute coronary syndrome in patients below the age of 40 years[J].Egyptian Heart Journal，2018，70（4）：233-235.

收稿日期：2019-2-13;修回日期：2019-3-13

編輯/成森