常文俊 閻寧 沈丸鈞 李雯 曾教科

摘 ?要 ?以‘無核黃皮果實為實驗材料，研究程序降溫（LTC）處理對黃皮果實貯藏品質(zhì)及采后生理的影響。將采后黃皮果實分別經(jīng)LTC I（12?℃，4 d）、LTC II（8?℃，4 d）、LTC III（12?℃，2 d后轉(zhuǎn)至8?℃，2 d）處理后，轉(zhuǎn)至低溫（3.0±0.5）℃貯藏12 d，每4 d測定各項品質(zhì)和生理指標。結(jié)果表明：與對照相比，程序降溫處理有效減輕了黃皮果實的褐變，促進了可溶性固形物（TSS）和維生素C含量的積累，促進了可滴定酸（TA）的降解，減少丙二醛（MDA）的積累，維持較高的超氧化物歧化酶（SOD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性，抑制過氧化物酶（POD）和多酚氧化酶（PPO）活性，同時保持較高的總酚和類黃酮含量，從而延緩了果實采后衰老速度，有利于減輕黃皮果實褐變和提高貯藏品質(zhì)，其中以LTC II處理的保鮮效果最為顯著。

關鍵詞 ?程序降溫;黃皮;貯藏品質(zhì);采后生理

中圖分類號 ?S666.6 ?????文獻標識碼 ?A

Abstract ?The effects of low temperature conditioning （LTC） on the storage quality and postharvest physiology of the fruits of wampee ‘Wuhe （Clausena lansium L.） were studied. The fruits were treated with LTC I （12?℃， 4 d）， LTC II （8?℃， 4 d） and LTC III （12?℃， 2 d to 8?℃， 2 d） and then stored at （3.0±0.5）℃ to investigate the effects on storage quality and postharvest physiology. Compared with the control， low temperature conditioning treatment delayed the browning of the fruits， improved total soluble solids （TSS） and vitamin C content， and inhibited the accumulation of malondialdehyde （MDA） content， maintained higher activities of superoxide dismutase （SOD） and phenylalanine ammonia lyase （PAL） activity， and lower activities of peroxidase （POD） and polyphenol oxidase （PPO） activity. Moreover， high total phenol content and antioxidat activity， high total phenolic and flavonoid content were maintained. Thereby the senescence of the fruits was delayed， and it is beneficial to reduce the browning of the fruits and improve the storage quality. In conclusion， LTC II treatment exhibited the best effect.

Keywords ?low temperature conditioning; wampee （Clausena lansium L.）; storage quality; postharvest physiology

DOI ?10.3969/j.issn.1000-2561.2019.06.021

黃皮（Clausena lansium L.）屬蕓香科黃皮屬，原產(chǎn)于我國華南地區(qū)，種質(zhì)資源豐富，在我國主要分布于廣東、廣西、福建、海南、四川、云南和臺灣等地區(qū)[1]。黃皮在我國華南地區(qū)已有1500多年的栽培歷史，是我國南方的一種特色果樹，具有健脾開胃、消痰化氣、潤肺止咳等功效，其果實營養(yǎng)豐富、風味獨特，深受消費者喜愛[2]。近年來，由于黃皮市場價格一路走高以及栽培技術的改進，黃皮種植規(guī)模在我國華南地區(qū)迅速擴大[3]。黃皮為非呼吸躍變型果實，其果肉柔軟多汁、果皮很薄，在采后過程中易遭受機械損傷，褐變或腐爛，品質(zhì)劣變迅速，2～3?d便失去商品價值[4-5]，其鮮果主要在原產(chǎn)地自產(chǎn)自銷。因此，黃皮果實采后的貯運保鮮技術研究對于黃皮產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

近年來，黃皮采后保鮮技術主要有采后低溫處理[6]、熱處理[7]、植物生長物質(zhì)[8]、施保功[9]、1-MCP[10]和MAP[11]等。低溫貯藏是延緩園藝產(chǎn)品采后成熟、抑制采后病害發(fā)生的常用手段。程序降溫（LTC）即將果實置于較低的低溫下鍛煉一段時間，再放入低溫冷庫貯藏，以增強果實抵抗逆境的能力，延長果實貯藏壽命。程序降溫處理可有效提高枇杷果實TSS含量，降低腐爛率和褐變指數(shù)，從而較好的保持其果實品質(zhì)[12]。程序降溫處理能有效減少‘黃冠梨脂肪氧合酶（LOX）和多酚氧化酶（PPO）的活性，抑制組織中丙二醛（MDA）含量的升高，提高貯藏品質(zhì)[13]。此外，程序降溫處理在水蜜桃[14]、‘紅寶石葡萄[15]、牛油果[16]等上均有大量研究，然而鮮少見有關于程序降溫用于黃皮果實貯藏保鮮的報道。

本研究以海南主栽品種‘無核黃皮為實驗材料，將采后黃皮進行不同程序降溫處理后再轉(zhuǎn)移到低溫（3.0±0.5）℃下貯藏，通過測定黃皮果實的品質(zhì)指標和生理指標，探討程序降溫處理對黃皮果實褐變的調(diào)控作用，為提高黃皮果實的貯藏保鮮效果提供依據(jù)，同時也為相關技術的推廣應用提供理論支撐。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 材料與試劑 ?實驗鮮果采自海南省?？谑杏琅d鎮(zhèn)黃皮果園，品種為‘無核黃皮。在商業(yè)采收期采收，黃皮帶枝采后立即運回實驗室，剔除病果、機械損傷果，選用形狀、大小、外觀顏色相對一致的黃皮果實，剪留0.5 cm左右的果柄為實驗材料。

試劑：氫氧化鈉、酚酞、95%乙醇、草酸、抗壞血酸、2，6-二氯酚靛酚、碳酸氫鈉、硫代巴比妥酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、愈創(chuàng)木酚、30%過氧化氫、甲硫氨酸、氮藍四唑、EDTA-Na2、核黃素、福林酚試劑、碳酸鈉、沒食子酸、兒茶素、DPPH、無水甲醇、硼酸、硼砂、L-苯丙氨酸等。以上試劑均為國產(chǎn)（西隴化工股份有限公司）分析純。

1.1.2 ?儀器與設備 ?TGL16M型高速冷凍離心機，鹽城市凱特實驗儀器有限公司;T6新世紀紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司;N-1α型手持數(shù)字折光儀，日本愛拓ATAGO公司;BS224S電子天平，Starorius公司;IMS-20制冰機，常熟市雪科電器有限公司。

1.2 ?方法

1.2.1 ?實驗處理 ?本實驗共分為4個處理：（1）對照組（CK）：果實低溫（3.0±0.5）℃貯藏;（2）程序降溫處理I（LTC I）：果實在12?℃貯藏4?d后轉(zhuǎn)到低溫（3.0±0.5）℃貯藏;（3）程序降溫處理II（LTC II）：果實在8?℃貯藏4?d后轉(zhuǎn)到低溫（3.0±0.5）℃貯藏;（4）程序降溫處理III（LTC III）：果實在12?℃貯藏2?d后轉(zhuǎn)到8?℃貯藏2?d再轉(zhuǎn)到低溫（3.0±0.5）℃貯藏。測定時間為16?d，每隔4 d測定1次。每個處理設3個生物學重復，每個生物學重復8個果。

1.2.2 ?指標測定 ?失重率：采用稱重法測定[17]。褐變指數(shù)：采用分級法測定[18]，每處理隨機選取50個果實觀察。褐變程度分為5級：1級果，褐變面積<1/4;2級果，褐變面積≥1/4且<1/2;3級果，褐變面積≥1/2且<3/4;4級果，褐變面積≥3/4;5級果：褐變面積=1。褐變指數(shù)=∑（各級果實數(shù)×對應級數(shù)）/（觀察果實總數(shù)×最高級數(shù)）× 100。

可溶性固形物含量：用PAL-1手持式折射儀（日本）測試果肉的可溶性固形物含量[17]，每組重復3次，結(jié)果以百分比（%）計，取平均值。

可滴定酸含量：采用氫氧化鈉滴定法測定[19]，以檸檬酸為折算系數(shù)。

維生素C含量：采用2，6-二氯靛酚滴定法[20]。

丙二醛含量：采用硫代巴比妥酸法測定[17-19]。

超氧化物歧化酶（SOD），過氧化物酶（POD），多酚氧化酶（PPO），苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的測定參考文獻[17-19]。

總酚含量：采用福林酚法[21]測定，結(jié)果以沒食子酸當量計。

類黃酮含量：采用鹽酸-甲醇法[17]測定，結(jié)果以蘆丁當量計。

1.3 ?數(shù)據(jù)處理

采用Excel軟件處理數(shù)據(jù)，并用SPSS 20軟件進行統(tǒng)計分析，用Duncan法分析差異顯著性。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?程序降溫處理對黃皮果實失重率和褐變的影響

失重和褐變是黃皮果實采后品質(zhì)劣變的2個主要癥狀。由圖1可知，隨著貯藏時間的延長，黃皮的失重率整體呈上升趨勢。與對照相比，LTC I

和LTC III處理的果實失重率迅速上升，且極顯著高于對照組（P<0.01），LTC II處理的與對照相比無顯著性差異。說明LTC II較LTC I和LTC III有顯著的抑制失重率上升的效果。在整個貯藏期內(nèi)，黃皮的褐變指數(shù)均呈上升趨勢，且對照組褐變指數(shù)始終高于LTC處理組。貯藏前8 d，黃皮果實的褐變指數(shù)變化不明顯，貯藏第8天后，褐變指數(shù)迅速上升。與對照相比，LTC II的褐變指數(shù)最小，其次是LTC I和LTC III。說明程序降溫處理對黃皮果實褐變具有較好的抑制效果，且LTC II處理的效果最好。

2.2 ?程序降溫處理對黃皮果實TSS和TA的影響

可溶性固形物（TSS）和可滴定酸（TA）是果蔬重要的品質(zhì)指標。由圖2可知，黃皮采后貯藏過程中，TSS含量整體呈上升趨勢。貯藏8 d后，程序降溫處理顯著高于對照組（P<0.05），貯藏后期，LTC II的TSS含量顯著高于LTC I和LTC III，而LTC I和LTC III之間無顯著差異。說明程序降溫處理能顯著提高黃皮果實的TSS含量，其中LTC II處理的效果最好。

如圖2所示，采后黃皮貯藏過程中，對照和LTC I的TA含量呈先上升后下降的趨勢，且LTC I的TA含量顯著高于對照組（P<0.05），LTC III的TA含量無明顯變化，LTC II的TA含量在貯藏前期無明顯變化，在貯藏第8天后迅速下降，且顯著低于其他處理組（P<0.05）。說明LTC II能顯著降低黃皮的TA含量，尤以LTC II處理最為顯著。

2.3 ?程序降溫處理對黃皮果實MDA和維生素C的影響

MDA是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一，是植物衰老生理和抗性生理的一個常用指標。由圖3可知，隨著貯藏時間的延長，黃皮果實MDA含量不斷積累，對照組果實的MDA含量始終高于LTC處理組。貯藏第8天后，LTC處理組果實的MDA含量變化趨于平緩，LTC I處理和LTC II處理在整個貯藏過程中MDA含量一直維持較低水平，且二者無顯著性差異。說明LTC處理能顯著抑制黃皮果實MDA含量的積累，延緩果實的衰老，延長貯藏期。其中LTC II處理效果最好，其次是LTC I處理。

維生素C是果實重要的營養(yǎng)指標之一，也是

衡量果實抗氧化衰老能力的因素之一。圖3表明，在采后貯藏過程中，黃皮果實的維生素C含量整體呈現(xiàn)上升趨勢。LTC II處理的維生素C含量一直維持較高水平，貯藏第8天后，LTC I處理黃皮果實的維生素C含量迅速上升，并達到最高，對照組和LTC III處理黃皮果實的維生素C含量上升緩慢，且兩者間無顯著差異。貯藏12 d后，LTC I處理和LTC II處理黃皮果實的維生素C含量顯著高于對照組（P<0.05）;貯藏第16天，LTC I處理和LTC II處理黃皮果實的維生素C含量分別是22.62、21.79 mg/g，分別比對照組高1.92、1.09 mg/g。說明LTC I處理和LTC II處理能顯著提高采后貯藏過程中黃皮的維生素C含量，維持果實較高的營養(yǎng)成分。

2.4 ?程序降溫處理對黃皮果實SOD和PAL的影響

SOD是一種重要的抗氧化酶，是清除自由基的首要物質(zhì)，具有抗衰老的特殊效果。由圖4可知，采后黃皮果實的SOD活性整體呈上升趨勢，且LTC II處理組黃皮果實的SOD活性始終顯著高于對照（P<0.05）。貯藏前期，LTC I處理和LTC III處理黃皮果實的SOD活性上升迅速，第12天達到高峰，之后迅速下降。對照組和LTC II處理黃皮果實的SOD活性在貯藏0～8 d迅速上升，之后趨于平緩，并于第16天達到最高。說明采后LTC處理有利于維持較高的果實SOD活性，延緩果實的成熟與衰老。

PAL是植物體內(nèi)次生代謝的關鍵酶和限速酶。由圖4可知，采后黃皮果實的PAL活性整體呈上升趨勢，且LTC處理組黃皮果實的PAL活性始終顯著高于對照組（P<0.05）。LTC III處理黃皮果實的PAL活性于第12天達到高峰，之后迅速下降，第16天與對照物組無顯著差異。LTC I處理和LTC III處理黃皮果實的PAL活性一直保持較高水平，第16天時，LTC II處理和LTC I處理黃皮果實的PAL活性分別比對照組高0.13、0.10 U/（g·min）。說明采后LTC處理能有效是提高果實PAL活性，提高黃皮果實的抗性，延長采后貯藏期。

2.5 ?程序降溫處理對黃皮果實POD和PPO活性的影響

POD是一種氧化還原酶，是果蔬褐變過程的重要酶之一。由圖5可知，采后黃皮果實的POD活性整體呈上升趨勢。貯藏前期，各處理組間無顯著性差異。第4天后，對照組黃皮果實的POD活性顯著高于LTC處理組（P<0.05）。第16天，

LTC I處理黃皮果實的POD活性最低，其次是LTC II處理和LTC III處理，分別比對照組低5.03、1.92、1.40 U/（g·min）。說明采后LTC處理均能顯著抑制黃皮果實的POD活性，延緩黃皮果實的成熟與衰老。

PPO是引起果蔬酶促褐變的主要酶類，可催化果蔬多酚物質(zhì)氧化生成褐色化合物，嚴重影響果蔬的外觀品質(zhì)[22]。由圖5可知，PPO活性在整個貯藏期間呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，且LTC處理組顯著低于對照組。貯藏第8天對照組PPO活性出現(xiàn)峰值1.37 U/（g·min），LTC III處理出現(xiàn)峰值為1.06 U/（g·min），二者差異顯著（P<0.05）;LTC I處理的黃皮PPO活性高峰出現(xiàn)在第4天，最大值為1.2 U/（g·min）;LTC II處理的PPO活性高峰出現(xiàn)在第12天，為1.0 U/（g·min），之后緩慢下降。貯藏第16天，LTC處理與對照組無顯著差異。說明貯藏前期LTC處理能顯著抑制黃皮果實的PPO活性，且LTC II處理的抑制效果最顯著。

2.6 ?程序降溫處理對黃皮果實總酚和類黃酮的影響

多酚類物質(zhì)具有較強的抗氧化能力和多種有益的生理功能，能有效清除自由基，延緩果蔬褐變或衰老[23-24]。如圖6所示，對照組黃皮果實總酚含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，于第8天達到高峰。LTC處理組黃皮果實總酚含量在貯藏過程中不斷積累，LTC II處理黃皮果實總酚含量顯著高于其他處理組（P<0.05）。第16天，LTC I處理、LTC II處理和LTC III處理組黃皮總酚含量分別比對照高0.27、0.36和0.26?mg/g。說明LTC處理能顯著提高黃皮果實的總酚含量，延緩果實衰老。其中LTC II處理為最佳。

類黃酮是植物重要的一類次生代謝產(chǎn)物，具有清除自由基，延緩果實衰老的效果。由圖6所示，采后黃皮果實的類黃酮含量整體呈現(xiàn)上升趨勢，且各處理間存在顯著差異（P<0.05）。LTC II處理黃皮果實的類黃酮含量一直保持最高水平，且顯著高于其他處理。第16天，LTC II處理黃皮果實的類黃酮含量分別比LTC I處理、LTC III處理和對照組高0.02、0.04和0.07 mg/g。說明LTC處理有利于采后黃皮果實類黃酮含量的積累，延緩果實衰老褐變。尤以LTC II處理效果最顯著。

3 ?討論

采后果實的衰老進程可以通過控制溫度來加以調(diào)節(jié)[25]，5?℃低溫是果蔬貯藏環(huán)境中的重要因素，低溫可抑制果蔬采后呼吸作用和內(nèi)源乙烯的生成，有利于保持生理代謝及營養(yǎng)物質(zhì)的相對穩(wěn)定。但并非溫度越低越好，一般生長在高溫多濕環(huán)境中的果品，由于形成了對低溫的敏感性，在低溫環(huán)境中容易造成代謝失調(diào)和細胞傷害，導致果實抗病性和耐藏性下降，造成嚴重褐變和品質(zhì)劣變[26]。

本研究發(fā)現(xiàn)，程序降溫處理可有效提高采后黃皮果實TSS含量，降低褐變指數(shù)，從而較好的保持其果實品質(zhì)，這與陳棟等[27]用程序降溫處理大五星枇杷果實，降低果實腐爛率，減少水分散失，減輕褐變，延長果實的貨架期的結(jié)果相似。孫維芝[28]研究表明，程序降溫加速了白玉枇杷貯藏期間可溶性固形物的上升和可滴定酸的下降，這與本研究結(jié)果相一致。楊青珍等[29]研究表明，程序降溫處理‘徐香獼猴桃果實顯著減少膜脂過氧化產(chǎn)物丙二醛的積累和抑制細胞膜透性的增加，保持較高的超氧化物歧化酶活性，這與本研究程序降溫處理顯著抑制黃皮果實MDA的積累，提高黃皮果實SOD和PAL等抗氧化相關酶活性的結(jié)果相一致。程序降溫是逐漸適應低溫的冷鍛煉過程。黃皮果實在逐漸適應低溫過程中，可能啟動了果實的防御系統(tǒng)，有助于提高果實的抗性。這在甘薯[30]、‘南國梨[31]和茄子[32]等果蔬中得到證實。

綜上所述，程序降溫處理可有效減少采后黃皮果實水分的散失，減輕果實褐變程度，提高可溶性固形物和維生素C含量，并抑制丙二醛的積累，提高抗氧化酶活性，同時保持較高的總酚和類黃酮含量，從而延緩果實采后衰老，有利于提高貯藏品質(zhì)，延長貯藏期。其中，以LTC II處理的效果最佳，LTC I、LTC III次之。

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