膽石癥是胃腸道常見的疾病之一，可由年齡、懷孕、肥胖、糖尿病、血脂異常等因素共同作用引起[1-2]。膽石癥可分為單純性膽石癥和復(fù)雜性膽石癥，復(fù)雜性膽石癥患者的Calot三角充血明顯，常規(guī)手術(shù)治療時(shí)易出血，并可使醫(yī)源性膽道損傷的發(fā)生率升高，因此明確診斷膽石癥至關(guān)重要[3]。目前，臨床診斷膽石癥的常規(guī)方法為實(shí)驗(yàn)室檢查及超聲檢查[4-5]，但有研究報(bào)道其診斷復(fù)雜性膽石癥的準(zhǔn)確度較低[6]。因此，臨床急需更加敏感、準(zhǔn)確的標(biāo)志物以明確診斷復(fù)雜性膽石癥。

有研究表明，血清學(xué)指標(biāo)在診斷膽石癥方面具有較高的價(jià)值[7]。CXC趨化因子配體16(CXCL16)是CXCR16的配體，能抑制氧化的低密度脂蛋白降解。膽囊收縮素-18(CCK-18)是促進(jìn)膽囊收縮的生理激素之一，能直接影響膽囊收縮。氧化的低密度脂蛋白積聚及膽囊收縮異常均與膽石癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)膽石癥患者血清CXCL16和CCK-18的表達(dá)水平，分析兩者診斷復(fù)雜性膽石癥的效能，以期為臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年3月至2018年3月西安醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的63例膽石癥患者作為膽石癥組，所有患者均經(jīng)超聲及CT檢查確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)超聲及CT檢查確診為膽囊結(jié)石，伴或不伴繼發(fā)性膽總管結(jié)石；(2)不伴梗阻性黃疸。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有膽道腫瘤；(2)合并膽道感染；(3)合并急性或慢性病毒性肝炎；(4)入組前已接受過治療。另選取40例同期健康體檢者作為對(duì)照組。膽石癥組中男性25例，女性38例，年齡27～62歲，平均年齡(45.27±6.04)歲，體質(zhì)指數(shù)(BMI)為(25.07±3.55)kg/m2；對(duì)照組中男性17例，女性23例，年齡24～55歲，平均年齡(44.38±6.13)歲，BMI為(23.78±3.14)kg/m2。兩組性別、年齡、BMI的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有受試者均簽署知情同意書。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 觀察指標(biāo)

收集受試者的一般資料，包括性別、年齡、心率、BMI、高血壓史、糖尿病史、空腹血糖、既往手術(shù)史等。所有受試者禁食12 h，清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采用肝臟B超檢查患者肝硬化及腹腔積液情況。抽取受試者外周靜脈血5 mL，置于血清管中，室溫靜置約1 h，待血液自然凝固后，3 500 r/min低溫離心15 min，分離上層血清，置于-80 ℃冰箱待測(cè)。采用AU5800全自動(dòng)生物化學(xué)分析儀(購自美國(guó)貝克曼庫爾特公司)檢測(cè)血清中尿素氮、血尿酸、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平(采用貝克曼庫爾特公司的配套試劑)；采用己糖激酶法檢測(cè)患者的空腹血糖水平；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清CXCL16水平(試劑盒購自上?？道噬锟萍加邢薰?，批號(hào)M22616226)及CCK-18水平(試劑盒購自日本同仁化學(xué)有限公司，批號(hào)M21916219)。操作嚴(yán)格按照儀器及試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 膽石癥患者亞組劃分

63例膽石癥患者分為單純性膽石癥組(28例)和復(fù)雜性膽石癥組(35例)。復(fù)雜性膽石癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)膽囊嚴(yán)重纖維化或Calot三角粘連、瘢痕化，脂肪堆積，分離困難；(2)Calot前三角區(qū)及后三角區(qū)的界限不清，難以剝離；(3)膽囊嚴(yán)重炎性水腫或萎縮。符合其中1項(xiàng)可診斷為復(fù)雜性膽石癥[6]。本研究將伴膽總管結(jié)石患者劃分為復(fù)雜性膽石癥組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組的基線資料比較

兩組的性別、年齡、心率、BMI、高血壓史、糖尿病史、空腹血糖、血清尿素氮及血清尿酸相比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 兩組基線資料的比較

2.2 兩組的血清CXCL16、CCK-18表達(dá)水平比較

膽石癥組患者血清CXCL16及CCK-18的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組的血清CXCL16、CCK-18表達(dá)水平比較()

2.3 復(fù)雜性膽石癥組與單純性膽石癥組的血清CXCL16、CCK-18表達(dá)水平比較

復(fù)雜性膽石癥組患者血清CXCL16及CCK-18的表達(dá)水平明顯高于單純性膽石癥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.4 影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的單因素分析

單因素分析顯示，兩組患者在既往手術(shù)史、TC、HDL-C方面的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與單純性膽石癥組相比，復(fù)雜性膽石癥組中有肝硬化、腹腔積液的患者比例較高，且TG、LDL-C水平較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表3 兩組的血清CXCL16、CCK-18表達(dá)水平比較()

2.5 影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的多因素分析

將單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素，包括肝硬化、腹腔積液、TG、LDL-C、CXCL16及CCK-18納入多因素Logistic回歸分析。賦值情況如下，肝硬化(有為1，無為0)；腹腔積液(有為1，無為0)；TG(≥2.34 mmol/L為1，<2.34 mmol/L為0)；LDL-C(≥2.76 mmol/L為1，<2.76 mmol/L為0)；CXCL16(≥3.76 ng/mL為1，<3.76 ng/mL為0)；CCK-18(≥45.38 ng/L為1，<45.38 ng/L為0)；膽石癥嚴(yán)重程度(復(fù)雜性膽石癥為1，單純性膽石癥為0)。結(jié)果顯示肝硬化、腹腔積液、LDL-C、CXCL16、CCK-8與單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥密切相關(guān)。見表5。

表4 影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的單因素分析

表5 影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的多因素分析

2.6 血清CXCL16、CCK-18診斷復(fù)雜性膽石癥的效能分析

單指標(biāo)診斷復(fù)雜性膽石癥時(shí)，CXCL16診斷的AUC大于CCK-18(Z=0.036，P=0.972)。CXCL16與CCK-18聯(lián)合檢測(cè)診斷復(fù)雜性膽石癥的模型為：F=-13.368+2.171CXCL16+0.123CCK-18。CXCL16與CCK-18聯(lián)合檢測(cè)診斷復(fù)雜性膽石癥的效能高于兩者單獨(dú)診斷(Z=2.152，P=0.031；Z=2.476，P=0.013)。見表6、圖1。

表6 血清CXCL16、CCK-18單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷復(fù)雜性膽石癥的效能分析

注：“—”表示無數(shù)據(jù)

圖1血清CXCL16、CCK-18單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷復(fù)雜性膽石癥的ROC曲線

3 討論

CXCL16是一種膜結(jié)合蛋白，可與磷脂酰絲氨酸和氧化型低密度脂蛋白的清除因子結(jié)合，抑制氧化的低密度脂蛋白降解，誘發(fā)膽囊結(jié)石[8-9]。相關(guān)研究指出，CXCL16在膽石癥患者中的表達(dá)水平升高，且與患者的臨床病理特征存在聯(lián)系[10]。CCK-18是由十二指腸和空腸黏膜Ⅰ細(xì)胞釋放的一種調(diào)節(jié)膽囊收縮運(yùn)動(dòng)的肽類激素，能與膽囊平滑肌上的受體結(jié)合誘導(dǎo)膽囊排空，當(dāng)CCK-18分泌增加時(shí)，膽囊的收縮功能受到抑制，進(jìn)而引發(fā)膽石癥[11]。以往研究表明，CCK-18在膽石癥患者中的表達(dá)水平明顯高于正常人群，提示其與膽石癥的發(fā)生關(guān)系密切[12]。本研究通過檢測(cè)膽石癥患者血清CXCL16、CCK-18的表達(dá)水平，分析兩者與膽石癥嚴(yán)重程度的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示，膽石癥患者血清CXCL16及CCK-18的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，結(jié)果與以往研究相符[6,8]，提示CXCL16及CCK-18可能與膽石癥的發(fā)生存在聯(lián)系。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，復(fù)雜性膽石癥患者的血清CXCL16及CCL-18表達(dá)水平高于單純性膽石癥患者，提示血清CXCL16及CCK-18可能與單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥有關(guān)。此外，本研究采用單因素及多因素Logistic回歸方法分析影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的相關(guān)因素，結(jié)果顯示肝硬化、腹腔積液、LDL-C、CXCL16、CCK-8與單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥密切相關(guān)。有研究報(bào)道，肝硬化患者的胃腸激素水平下降，可促進(jìn)膽石癥進(jìn)展[13-14]。腹腔積液易導(dǎo)致患者膽囊壁增厚甚至纖維化，進(jìn)一步加重膽囊結(jié)石嚴(yán)重程度[15]。CXCL16通過抑制LDL-C的代謝，導(dǎo)致脂質(zhì)代謝物在膽囊積聚，形成結(jié)石。CCK-18水平升高，可使胰腺消化酶分泌受到抑制，促進(jìn)膽石癥進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示，血清CXCL16、CCK-18單獨(dú)診斷復(fù)雜性膽石癥的AUC均大于0.8，表明血清CXCL16、CCK-18單獨(dú)診斷復(fù)雜性膽石癥的效能均較高。此外，本研究顯示血清CXCL16與CCK-18聯(lián)合檢測(cè)診斷復(fù)雜性膽石癥的AUC為0.950，顯著大于單指標(biāo)檢測(cè)，表明兩者聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷復(fù)雜性膽石癥的效能。

綜上所述，膽石癥患者的血清CXCL16及CCK-18表達(dá)水平明顯升高，兩者均參與膽石癥的進(jìn)展過程，檢測(cè)血清CXCL16及CCK-18的表達(dá)水平有助于診斷復(fù)雜性膽石癥。