李世艷　魯佳　郭慶

摘要建立了全自動凝膠凈化-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法同時測定水果中鄰苯基苯酚、增效醚殘留量的方法，即臍橙、梨、菠蘿等3種水果樣品經(jīng)粉碎后，加入丙酮+二甲苯（體積比2：1）超聲波提取16min，經(jīng)全自動凝膠色譜系統(tǒng)（GPC）凈化、濃縮、定容后，用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測定鄰苯基苯酚、增效醚殘留量，并以環(huán)氧七氯為內(nèi)標(biāo)物進行定量。結(jié)果表明，該方法的相關(guān)系數(shù)均達到0.999以上，定量下限均小于0.02mg/kg;添加25、50、100μg/kg3個水平的鄰苯基苯酚和增效醚于臍橙、梨、菠蘿空白樣品中，加標(biāo)回收率范圍為80.2%～107.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.9%～2.9%。該測定方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，適用于水果中鄰苯基苯酚和增效醚殘留量的快速分析測定。

關(guān)鍵詞 水果;鄰苯基苯酚;增效醚;全自動凝膠色譜系統(tǒng)（GPC）;氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀

中圖分類號 S481*.8

文獻標(biāo)識碼 A

文章編號 1007-5739（2019）05-0103-03

鄰苯基苯酚（o-phenylphenol）又名2-羥基聯(lián)苯或2-苯基苯酚，為白色薄片或塊狀物或淡紅色粉末，微溶于水。鄰苯基苯酚是用途十分廣泛的有機化工產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于殺菌防腐領(lǐng)域！”。在農(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工方面，鄰苯基苯酚主要作為高效廣譜的殺菌防霉劑廣泛應(yīng)用于采收后的水果和蔬菜的防腐保鮮2-31，特別適用于柑橘類水果的防霉;而增效醚（piperonyl butoxide）可作為該類殺菌防霉劑的增效劑，是聯(lián)合國糧農(nóng)組織唯一認(rèn)可的高效無毒廣譜農(nóng)藥增效劑4。但是，過量使用該類殺菌防霉劑對人體有致癌性、致畸性，并可造成肝臟和腎臟嚴(yán)重受損，而在水果貯存、運輸過程中，常有過量加入殺菌劑的情況。因此，建立一種準(zhǔn)確、快速的檢驗方法意義重大。

本試驗采用全自動凝膠色譜系統(tǒng)（GPC）進行樣品前處理，凈化過程采用全自動批量處理，較大程度地減少了人為因素的影響，在提高檢測效率、降低檢測成本的同時，滿足鄰苯基苯酚、增效醚等殺菌防霉劑在果蔬中殘留量準(zhǔn)確快速批量檢測的需求。

1材料與方法

1.1材料與試劑

1.1.1材料。臍橙、梨、菠蘿（市售）。

1.1.2試劑。乙腈（色譜純）、丙酮（色譜純）、二甲苯（色譜純）、正己烷（色譜純）、乙酸乙酯（色譜純）、環(huán)己烷（色譜純）、鄰苯基苯酚標(biāo)準(zhǔn)品（99.8%，Dr.Ehrenstorfer?Gmb?H）、增效醚標(biāo)準(zhǔn)品（96.0%，Dr.Ehrenstorfer?Gmb?H）、環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)品（99.0%，Dr.Ehrenstorfer?Gmb?H）。

1.2儀器與設(shè)備

7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀[DB-1HS色譜柱（30mx0.25mm，0.25μm）]，美國安捷倫公司;XHF-D高速分散器（內(nèi)切式勻漿機），寧波新藝超聲設(shè)備有限公司;優(yōu)普超純水設(shè)備，美國Millipore公司;MTN-2800W氮吹儀，天津奧特賽恩斯儀器有限公司;RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，安徽盈海貿(mào)易有限公司;Vortex3000渦旋器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司;ME204E/02電子分析天平，梅特勒一托利多儀器（上海）有限公司;全自動凝膠色譜系統(tǒng)（GPC）。

1.3測定方法

1.3.1樣品前處理。將所購水果樣品切碎混勻，制成勻漿，備用。

1.3.2提取。稱取20g試樣，置于200mL燒杯中，加入定量內(nèi)標(biāo)環(huán)氧七氯后，以40mL乙腈為提取溶液，7000r/min勻漿提取2min，加人2g氯化鈉，振搖10min，靜置分層后，將有機相全部轉(zhuǎn)移至100mL具塞錐形瓶中，殘渣以20mL乙腈重復(fù)提取1次，提取液合并，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，旋蒸濃縮至1mL左右。加入2mL乙酸乙酯-環(huán)已烷（體積比為1：1），再濃縮至1mL左右，反復(fù)3次。將最終濃縮液轉(zhuǎn)移至GPC系統(tǒng)配套進樣試管中，用乙酸乙酯環(huán)已烷（體積比為1：1）溶液洗滌蒸餾瓶數(shù)次，合并洗滌溶液至試管中，定容至5mL。

1.3.3凈化。全自動凝膠滲透色譜系統(tǒng)凈化：試樣由5mL試樣杯注入凝膠滲透色譜柱，泵流速5.0mL/min，以乙酸乙酯-環(huán)已烷（體積比1：1）溶液洗脫，棄去0～8min流分，收集8～16min流分，16～20min沖洗GPC柱。將收集的流分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至約1mL，氮吹至干，以正已烷定容至1mL，待上機測試。

1.3.4色譜條件。DB-1HS色譜柱（30mx0.25mm，0.25μm）石英毛細管柱;進樣口溫度290C;質(zhì)譜檢測器（MSD）;載氣為高純氦氣（純度>99.999%），流速為1mL/min;不分流進樣，1.5min后打開分流閥和隔墊吹掃閥，進樣量1μL。升溫程序：初始溫度60C，保持0.5min;以209C/min升溫至300C，保持6min。

離子化方式為電子轟擊（EI）;離子化能量為70eV;離子源溫度230C;傳輸線溫度為GC-MS接口溫度280C;溶劑延遲3min;全掃描范圍為45～550amu。選擇離子檢測：鄰苯基苯酚（170），增效醚（176），環(huán)氧七氯（353）。

1.3.5工作標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及檢出限的確定。分別準(zhǔn)確稱取1mg鄰苯基苯酚、增效醚和環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，以乙腈稀釋定容，則為100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，然后置于4C保存。臨用前準(zhǔn)確移取鄰苯基苯酚、增效醚標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成20、40.6080、100μg/mL并分別加人環(huán)氧七氯，使其濃度均為50μg/mL，供色譜分析使用。在1.3.4色譜條件下，分別進樣3次，以濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，目標(biāo)物平均峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值Y為縱坐標(biāo)，繪制工作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算得出線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

1.3.6方法回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的測定。分別選擇未檢出鄰苯基苯酚和增效醚的臍橙、梨、菠蘿樣液作為空白基質(zhì)，按1.3.1制樣后，進行3種水平的標(biāo)準(zhǔn)添加回收試驗。即在制備好的樣液中按照25、50、100μgkg的濃度梯度分別加入鄰苯基苯酚和增效醚，同時加入內(nèi)標(biāo)物環(huán)氧七氯，使其濃度均為50μug/mL，以1.3.2、1.3.3、1.3.4的方法進行提取、凈化和上機測定峰面積，每個樣品測定液重復(fù)測定5次，分別計算加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，目標(biāo)物平均峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比Y為縱坐標(biāo)，繪制工作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得出鄰苯基苯酚和增效醚的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和定量下限，結(jié)果見表1。

結(jié)果表明，鄰苯基苯酚、增效醚在20～100μg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，其峰面積和質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，同時，通過逐漸降低分析物濃度的方法推算信噪比S/N=10時的定量下限，測得鄰苯基苯酚和增效醚的定量下限均低于0.02mg/kg。

鄰苯基苯酚、增效醚和內(nèi)標(biāo)物環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)品的選擇離子流圖譜見圖1?？梢钥闯觯彵交椒?、增效醚和內(nèi)標(biāo)物環(huán)氧七氯的保留時間分別為6.754、12.705、10.450min。

2.2回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

由表2可以看出，分別添加25、50、100μg/kg3個水平的鄰苯基苯酚和增效醚于臍橙、梨、菠蘿空白樣品中，加標(biāo)回收率范圍為80.2%～107.8%（n=5），相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.9%～2.9%（n=5）。由此可說明，該測定方法的回收率和精密度良好。

2.3提取溶劑的選擇

增效醚、鄰苯基苯酚呈中性至弱極性，均具有親脂憎水特性，根據(jù)相似相容原則，常用丙酮、二甲苯、正已烷、乙腈等有機溶劑提取水果中此類物質(zhì)。由圖2可以看出，乙腈的提取效果最差，二甲苯、丙酮、正已烷以及丙酮+二甲苯（體積比2：1）提取效果均較好，但丙酮提取液中由于溶出雜質(zhì)較多，致使凈化用時長，圖譜雜峰較多，影響分析結(jié)果，故選擇丙酮+二甲苯（體積比2：1）作為提取溶劑。

2.4提取方法的選擇

本試驗選擇未檢出鄰苯基苯酚和增效醚的臍橙樣品作為空白基質(zhì)，通過加標(biāo)量為50μg/kg的樣品回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差考察高速分散勻漿提取法、超聲波輔助提取法和振蕩提取法的提取效果。

由表3可以看出，在滿足精密度要求的前提下，相比于超聲波輔助提取法和振蕩提取法，高速分散勻漿法具有回收率高、耗時短的優(yōu)點。但是在實際檢測中，超聲波輔助提取法可以批量處理樣品，且其回收率也相對較高，故選擇超聲波輔助提取法作為最佳提取方法。

2.5提取時間的選擇

選擇超聲波清洗器工作頻率40kHz、電功率500W，分別超聲4、8、12、16、20、24、28min提取臍橙樣品中鄰苯基苯酚和增效醚。由圖3可以看出，樣品中增效醚回收率在提取12min時基本達到峰值，鄰苯基苯酚回收率在提取16min時基本達到峰值，且隨著超聲時間延長二者的回收率變化不大。因此，選擇超聲提取16min最為合理。

2.6全自動凝膠滲透凈化

水果中含有一定量的有機酸、色素、多糖類、蛋白質(zhì)和脂肪，在提取時不可避免地會將這些物質(zhì)提取出來，而這些物質(zhì)在氣相色譜分析時會聚集在儀器進樣口和襯管上，對進樣口及襯管造成污染，同時一些雜質(zhì)可能影響色譜分析的準(zhǔn)確度。

在現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢測方法《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法》（GB23200.8-2016）中使用Envi-18柱、2Envi-Carb活性炭柱、3Sep-PakNH2固相萃取柱進行樣品提取液的凈化。反復(fù)試驗發(fā)現(xiàn)，該方法采用的凈化方法操作繁瑣，且由于各小柱串聯(lián)使用不方便，導(dǎo)致樣品凈化耗時長、目標(biāo)物回收率低等問題。

凝膠滲透色譜（gel?permeation?chromatography，簡稱GPC）技術(shù)是國際公認(rèn)的農(nóng)藥殘留分析過程中有效的凈化手段一，其對于含大分子油脂、色素的樣品凈化十分有效，并且易于實現(xiàn)自動化操作，可以以大縮短樣品前處理時間和減輕繁雜的人工處理過程。

3結(jié)論與討論

本試驗選用臍橙、梨、菠蘿等3種水果為研究對象，確定其鄰苯基苯酚、增效醚的殘留量快速檢測方法為：樣品經(jīng)粉碎后，加人丙酮+二甲苯（體積比2：1）超聲波提取16min，經(jīng)全自動凝膠色譜系統(tǒng)（GPC）凈化，濃縮、定容后，用氣相色譜質(zhì)譜儀測定鄰苯基苯酚、增效醚殘留量，并以環(huán)氧七氯為內(nèi)標(biāo)物進行定量。結(jié)果表明，該方法的相關(guān)系數(shù)均達到0.999以上，定量下限均小于0.02mg/kg;添加25、50、100μug/kg3個水平的鄰苯基苯酚和增效醚于臍橙、梨、菠蘿空白樣品中，加標(biāo)回收率范圍為80.2%～1078%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.9%～2.9%。該方法經(jīng)過對前處理技術(shù)的改進，優(yōu)化了提取環(huán)節(jié)，縮短了提取時間，并且重現(xiàn)性良好，能夠滿足水果中鄰苯基苯酚和增效醚殘留量的快速分析測定。

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