張思玨

摘要 以銀杏為原料的制劑是現(xiàn)代植物藥的重要產(chǎn)品，占據(jù)較大的市場份額，此類產(chǎn)品的安全問題時(shí)有報(bào)道，其主要不良反應(yīng)是由銀杏成分中的銀杏酸引起的，解決問題的關(guān)鍵在于對除酸工藝的研究，提高現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制水平。通過國內(nèi)外文獻(xiàn)，總結(jié)銀杏酸的藥理毒理作用及脫酸方法研究進(jìn)展，旨在提高對銀杏葉酸的關(guān)注，提高銀杏葉提取物制劑的安全性。

關(guān)鍵詞銀杏酸;藥理;毒理;脫酸

銀杏屬于銀杏科裸子植物，是我國特有的珍貴樹種之一。國內(nèi)外對銀杏葉進(jìn)行較多的研究，銀杏葉提取物具有擴(kuò)張血管、調(diào)血脂、拮抗血小板活化因子、保護(hù)缺血損傷、抗炎及抗腫瘤等多種藥理作用[1]。但銀杏葉成分復(fù)雜，一般提取物中總黃酮醇苷類含量24% -32%，萜類內(nèi)酯成分6% - 9%，其余成分還有待更多的研究[2]。目前銷往市場的銀杏葉提取物，其提取方法大部分是用水提法或醇提法，但是同時(shí)被提取出來的還有大量的銀杏酸[3]，能引起銀杏葉制劑的不良反應(yīng)。本文從銀杏酸的藥理毒理、脫酸方法等方面作一綜述。

銀杏酸藥理研究

抗腫瘤作用：研究發(fā)現(xiàn)[4]，銀杏葉中主要成分銀杏酸能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。研究認(rèn)為[5]，銀杏酸性成分中的十七碳烯鏈水楊酸和銀杏黃素對機(jī)體能夠起到強(qiáng)抑制EB病毒和致癌啟動(dòng)因子活性的作用。藥理試驗(yàn)顯示，長鏈酚酸抗癌活性主要與烷基側(cè)鏈的長短和酚羥基有關(guān)，與羧基無關(guān)，這主要是因?yàn)榭刮⑸锘钚孕枰然?，且與側(cè)鏈不飽和程度有關(guān)，不飽和度越大其活性越強(qiáng)。研究表明，銀杏酸對人肺癌細(xì)胞、人乳腺癌細(xì)胞、人結(jié)腸腺癌細(xì)胞、人膀胱癌細(xì)胞和人卵巢腺癌細(xì)胞的生長均有不同程度的抑制作。

抗病毒作用：在對銀杏提取物藥理試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其對單純皰疹I(lǐng)型病毒和水皰性口炎病毒均無作用，但對柯薩奇B3病毒具有一定的抗病毒作用[6]。銀杏酚酸在體外能夠?qū)C(jī)體非細(xì)胞體系的人類免疫缺陷病毒（HIV）蛋白酶活性和人體細(xì)胞的HIV感染產(chǎn)生抑制作用。

抑菌殺菌作用：在對銀杏提取物藥理試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)銀杏酸類物質(zhì)對細(xì)菌、致病性真菌具有不同程度殺菌或抑菌作用，對變形桿菌、青霉菌、大腸埃希菌等均有抑制作用，其中對巨大芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的抑菌活性效果在各種病菌中最強(qiáng)。石啟田研究發(fā)現(xiàn)位于銀杏外種皮中的銀杏酸酚類物質(zhì)具有殺蟲活性，防治菜青蟲、蚜蟲、薊馬有良好效果，與其進(jìn)行對照的化學(xué)農(nóng)藥，兩者有相似的防治效果[7];王杰等從銀杏外種皮提取物中篩選出明顯具有抑菌活性的組分[8]。

抗炎抗過敏作用：動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，銀杏提取物銀杏酸還具有抗過敏性作用，其能夠起到的作用與地塞米松類藥物相類似，其可達(dá)到拮抗過敏介質(zhì)如組胺等引起的豚鼠回腸平滑肌的收縮反應(yīng)，此拮抗作用通常是通過抑制大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞顆粒釋放和小鼠被動(dòng)性皮膚過敏反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)的。并且銀杏酸結(jié)構(gòu)中抗過敏反應(yīng)程度與羧基結(jié)構(gòu)完整性具有一定的相關(guān)性。許麗麗等研究表明銀杏甲素能顯著抑制乙酸所致小鼠腹腔毛細(xì)管通透性增高、角義菜膠所致大鼠足腫脹以及二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹[9]。對機(jī)體炎癥早期的毛細(xì)血管滲透性增高，炎性滲出和水腫具有很好的抑制作用，其藥理作用與陽性對照組地塞米松相似。銀杏酸的毒理研究

細(xì)胞毒性：Hecker H（2002）等通過對銀杏葉提取物中銀杏酚酸的細(xì)胞毒素性質(zhì)進(jìn)行研究[10，11]。在銀杏酚酸（濃度≥30 mg/L）作用18h后，細(xì)胞HaCaT死亡率從6%上升到80%左右。進(jìn)行HaCaT細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，可能是由于溶酶體的酶受到抑制引起，所以形成髓鞘質(zhì)瘤。通過對LLC-MK2細(xì)胞進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)主要是由線粒體介導(dǎo)銀杏酚酸的細(xì)胞毒性。研究認(rèn)為原因可能是線粒體氧化磷酸化反應(yīng)的解偶聯(lián)作用。

致敏性、致突變、神經(jīng)毒性：何靜仁的研究表明[12，13]，銀杏酸可以促進(jìn)B細(xì)胞增殖分化成IgE抗體產(chǎn)牛細(xì)胞，同時(shí)通過誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)T細(xì)胞分裂的增殖，增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)細(xì)胞免疫應(yīng)答，作為變應(yīng)原增強(qiáng)機(jī)體的敏感性。楊劍婷等的研究指出，銀杏酸的致敏機(jī)制可能是抑制變態(tài)反應(yīng)、細(xì)胞毒性、酶活性等[14]。銀杏酸和相關(guān)的烷基酸可引起精子染色體斷裂導(dǎo)致胚胎突變。

銀杏酸分離祛除方法

對銀杏酸進(jìn)行脫酸的方法主要有微波輔助提取、有機(jī)溶劑提取法、樹脂提取、超聲輔助提取和超臨界二氧化碳萃取等。尹秀蓮等研究顯示銀杏酸的脫酸方法中超聲萃取，萃取過程中會(huì)受設(shè)備的限制[15]，不利于大規(guī)模生產(chǎn)。超臨界流體萃取方法整個(gè)萃取過程中工藝成本過高，因其設(shè)備投入較大;有機(jī)溶劑萃取法在萃取過程中會(huì)損害人員、設(shè)備、環(huán)境，而且其能源需求高、工藝選擇性差，使得生產(chǎn)成本增加;樹脂提取應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)更加普遍。

有機(jī)溶劑提取法：用丙酮進(jìn)行提取，對其萃取使用有機(jī)溶劑、脫脂等一系列工藝處理，使烷基酚酸< 10μg/g（特別可達(dá)到<1μg/g）。

樹脂提?。呵乜≌芡ㄟ^對不同大孔樹脂（D 101、DA 201、DM 301、DS 401）進(jìn)行研究[16]，，使用靜態(tài)與動(dòng)態(tài)相結(jié)合的方法，以銀杏酸的吸附率、解析率為指標(biāo)，優(yōu)化大孔樹脂純化銀杏酸的工藝參數(shù)。結(jié)果表明，大孔吸附樹脂DA 201對銀杏酸的吸附為快速平衡型，銀杏酸粗提取液上樣濃度0.45 mg/mL，靜態(tài)吸附時(shí)間4h，動(dòng)態(tài)上樣流速l mL/min，洗脫劑乙醇濃度95%，洗脫速度l mL/min，銀杏酸吸附容量59.00 mg/g，解析率98.46%，銀杏酸純度83.4%。以銀杏葉提取物中銀杏酸含量為指標(biāo)，對比LX-202、LX-9、HDP 5000、ADS-7、ADS-8等5種大孔樹脂對銀杏酸的洗脫效果及靜態(tài)吸附效果。最終結(jié)果顯示，脫除銀杏酸效果最佳的是HDP 5000樹脂。

超臨界二氧化碳萃?。荷騽偟妊芯恐胁捎贸R界二氧化碳萃取技術(shù)[17]。采用壓力30 MPa，采用硅膠為載體，8%甲醇作為改性劑，溫度55℃進(jìn)行萃取。結(jié)果表明超臨界二氧化碳萃取對銀杏酸的選擇性和回收率效果顯著。王志強(qiáng)等利用Agilent 1100高效液相色譜儀對甲醇回流萃取和SC-C02萃取的銀杏酸進(jìn)行含量測定[18]。結(jié)果顯示萃取銀杏外種皮中銀杏酸采用SC-CO2萃取法，不僅環(huán)境污染小，而且萃取率和萃取純度較高，操作過程簡便，無溶劑殘留，比傳統(tǒng)的溶劑萃取法優(yōu)異，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。

微波輔助提?。豪顫蓸s等采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)分析，探討了料液比、提取溫度、提取時(shí)間、乙醇濃度對銀杏中銀杏酸脫除率的影響[19]，并優(yōu)化了提取工藝。結(jié)果表明，微波輔助脫除銀杏酸的最佳工藝條件為提取溫度60℃，以濃度75%的乙醇為提取劑，料液比（m：V）1：35，提取時(shí)間55 min，在此條件下，銀杏酸脫除率可達(dá)0.191 8‰。其與樹脂提取法進(jìn)行比較提取率略低，但可以顯著縮短提取時(shí)間。

超聲輔助提?。簞⒖》逋ㄟ^響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化得到銀杏酚酸的提取工藝為超聲溫度55.6℃，超聲時(shí)間40 min，液料比1：3（g：g），此時(shí)銀杏酚酸提取量最大值0.167 8 mg/mL。

蒸煮及干燥處理：劉俊峰研究了蒸煮處理及干燥處理對銀杏酚酸和銀杏黃酮的影響，結(jié)果顯示蒸煮溫度、時(shí)間以及料液比3種因素與銀杏酚酸脫除率呈顯著相關(guān)。在熱風(fēng)處理的試驗(yàn)過程中可以將銀杏黃酮損失控制在< 10%，3種銀杏酚酸的脫除效率明顯受到熱風(fēng)處理溫度和時(shí)間的影響，并且在處理溫度80℃、處理時(shí)間9h的條件下，可完全脫除白果新酸，并降低十七烷基一烯銀杏酸和白果酸的含量。

我國為銀杏產(chǎn)出大國，然而銀杏制品我國的國際市場份額很低，因此，我們要學(xué)習(xí)國外植物藥發(fā)展經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)一步加強(qiáng)開工作。充分利用我國得天獨(dú)厚的銀杏樹資源，對全國各地銀杏葉資源加以合理評定，合理利用;重視研究工藝，關(guān)注制劑安全，根據(jù)不同的銀杏葉制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為盡快達(dá)到國際標(biāo)準(zhǔn)，不懈地進(jìn)行工藝改進(jìn)。

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