李飛翔

摘要：為較全面的認(rèn)識(shí)遲緩愛(ài)德華氏菌及其引發(fā)的魚(yú)類(lèi)遲緩愛(ài)德華氏菌病，有效的鑒定、防治與控制遲緩愛(ài)德華氏菌的感染，對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌生物學(xué)特性及其致病力、鑒定方法、免疫控制等方面做如下綜述。

關(guān)鍵詞：遲緩愛(ài)德華氏菌病;生物學(xué)特性;鑒定方法;致病力;免疫控制

中圖分類(lèi)號(hào)：S941.42+9 ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

遲緩愛(ài)德華氏菌是魚(yú)類(lèi)的細(xì)菌性致病菌之一，許多魚(yú)類(lèi)會(huì)受到該菌感染并造成大量死亡。為比較全面地認(rèn)識(shí)遲緩愛(ài)德華氏菌及其造成的魚(yú)類(lèi)遲緩愛(ài)德華氏菌病，有效地預(yù)防和控制該病菌的感染，現(xiàn)對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌感染癥狀、致病力、診斷以及免疫控制等方面做如下介紹：

1 ?生物學(xué)特性

遲緩愛(ài)德華氏菌為短桿菌，有鞭毛，無(wú)莢膜，也不形成芽孢。生長(zhǎng)溫度為15℃～42℃，最適為37℃;適宜pH為5.5～9.0，但以pH為7.2較好;鹽度為0%～4%。研究發(fā)現(xiàn)，在普通瓊脂培養(yǎng)基上，25 ℃條件下，該菌培養(yǎng)24 h能形成隆起、灰白色、形狀為圓形并帶有光澤、呈半透明狀態(tài)的菌落，直徑約為0.5～1.0 mm。

2 ?魚(yú)類(lèi)感染癥狀

遲緩愛(ài)德華氏菌感染斑點(diǎn)叉尾鮰后，魚(yú)體出現(xiàn)顏色不正常的、凸出的腫脹區(qū)域，如果刺穿，則會(huì)產(chǎn)生惡臭，明顯可見(jiàn)肛門(mén)出血和眼睛不透明。鰓、腎、肝和脾以及在腸（較少）中觀(guān)察到小的白色結(jié)節(jié)，這些結(jié)節(jié)被細(xì)菌包裹。研究發(fā)現(xiàn)，感染愛(ài)德華氏菌的牙鲆可見(jiàn)腸道脫垂于肛門(mén)外，腹腔內(nèi)有大量濃液狀腹水，但腸道內(nèi)無(wú)腹水，肝和腎肥大并伴有出血癥狀[1]。大菱鲆急性感染該病菌時(shí)，病魚(yú)會(huì)出現(xiàn)下頜和鰓蓋邊緣發(fā)紅，鰭基部以及腹部皮下充血。腎臟出現(xiàn)腫大、潰瘍、出血，嚴(yán)重時(shí)整個(gè)腎臟呈膿樣壞死或灰白色;脾臟時(shí)有腫大，失血呈粉紅色[2]。

3 ?致病性

遲緩愛(ài)德華氏菌是愛(ài)德華氏菌屬中唯一能夠感染人的致病菌，危害極大，可引起人的腸胃炎、腹瀉等，還可以引起腦膜炎和敗血癥等較為嚴(yán)重的疾病。劉春等[3]發(fā)現(xiàn)，遲緩愛(ài)德華氏菌的分離菌株Z1接種感染透明四帶無(wú)須鯉和斑馬魚(yú)，當(dāng)遲緩愛(ài)德華氏菌液達(dá)到1×106 cfu/mL的濃度時(shí)，能使他們的死亡率分別達(dá)到80%和90%。

4 ?遲緩愛(ài)德華氏菌的鑒定

4.1 ?血清學(xué)

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）具有特異性強(qiáng)、敏感性高、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，以遲緩愛(ài)德華氏菌WY28作為抗原，獲得效價(jià)較高的多克隆抗體，建立遲緩愛(ài)德華氏菌的快速檢測(cè)法ELISA[4]。將該方法進(jìn)行規(guī)范化后具有簡(jiǎn)便、靈敏等特性，與腸桿菌科其他細(xì)菌參考菌株無(wú)交叉反應(yīng)，具良好的特異性。

4.2 ?分子方法

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法（LAMP）擴(kuò)增遲緩愛(ài)德華氏菌溶血素基因片段的方法對(duì)于鑒定遲緩愛(ài)德華氏菌是較為簡(jiǎn)便的。因?yàn)長(zhǎng)AMP法操作非常簡(jiǎn)單，可在一個(gè)小試管內(nèi)就能完成所有檢測(cè)，并且可以通過(guò)肉眼觀(guān)察顏色變化進(jìn)行判斷，最重要的是所需儀器價(jià)格便宜，具有很高的經(jīng)濟(jì)性[5]。然而，LAMP法也有一些不足之處，比如引物設(shè)計(jì)較為復(fù)雜，而且一旦發(fā)生非特異性擴(kuò)增，試管內(nèi)顏色沒(méi)有變化，難以辨別。

通過(guò)設(shè)計(jì)遲緩愛(ài)德華氏菌gyrB基因的特異性引物也可檢測(cè)遲緩愛(ài)德華氏菌，此種方法的特點(diǎn)是：快速、靈敏、特異高。王燕等[6]通過(guò)總結(jié)菌株在形態(tài)與生理生化特征及16S rDNA同源性等方面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分離得到了遲緩愛(ài)德華氏菌（WY28菌株）。直到現(xiàn)在，生理生化特征鑒定以及16S rDNA和gyrB基因序列分析也是作為確定遲緩愛(ài)德華氏菌的重要依據(jù)。雖然PCR方法操作簡(jiǎn)化，靈敏度提高，檢測(cè)時(shí)間也較短，但是它對(duì)試驗(yàn)儀器要求較高。因此，該方法在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中受到了限制。

5 ?疾病控制

5.1 ?疫苗的開(kāi)發(fā)

疫苗免疫是預(yù)防魚(yú)類(lèi)病害的重要手段之一。實(shí)驗(yàn)證明，使用病魚(yú)體內(nèi)分離的遲緩愛(ài)德華氏菌菌株制備的滅活疫苗能較有效保護(hù)大菱鲆免受遲緩愛(ài)德華氏菌強(qiáng)毒株的感染[6]。這種弱毒疫苗通過(guò)浸泡、口服等途徑效刺激機(jī)體系統(tǒng)免疫應(yīng)答，進(jìn)而發(fā)揮免疫保護(hù)作用[7]。此外，鞭毛蛋白可作為魚(yú)類(lèi)疫苗的潛在佐劑，對(duì)開(kāi)發(fā)魚(yú)類(lèi)疫苗產(chǎn)品具有重要作用。

5.2 ?免疫增強(qiáng)劑

免疫增強(qiáng)劑包括維生素C、免疫多糖等，它能起到增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用。研究證明，飼料中添加維生素C能有效降低感染遲緩愛(ài)德華氏菌半滑舌鰨的紅細(xì)胞氧化損傷程度[8]。在飼料中添加多糖免疫佐劑能提高大菱鲆的SOD活性和血清溶菌酶活性等免疫指標(biāo)。總之，在在飼料中添加免疫增強(qiáng)劑可提高魚(yú)類(lèi)的抗病能力。

參考文獻(xiàn)

[1] 張曉君， 戰(zhàn)文斌， 陳翠珍，等. 牙鲆遲鈍愛(ài)德華氏菌感染癥及其病原的研究[J]. 水生生物學(xué)報(bào)， 2005， 29（1）：31-37.

[2] 王印庚， 秦蕾， 張正，等. 養(yǎng)殖大菱鲆的愛(ài)德華氏菌病[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)， 2007， 31（4）：487-495.

[3] 劉春， 李凱彬， 王慶，等. 斑馬魚(yú)遲緩愛(ài)德華氏菌的鑒定、致病性及藥物敏感性[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2013， 32（3）：105-111.

[4] 白方方， 蘭建新， 王燕，等. 遲緩愛(ài)德華氏菌間接ELISA快速檢測(cè)法[J]. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)， 2009， 16（4）：619-625.

[5] Savan R， Igarashi A， Matsuoka S， et al.Sensitive and rapid detection of Edwardsiellosis in fish by a loop-mediated isothermal amplification method.[J].Applied & Environmental Microbiology， 2004， 70（1）：621-624.

[6] 王燕， 張曉華， 呂俊超，等. 養(yǎng)殖大菱鲆病原菌遲緩愛(ài)德華氏菌的分離鑒定及其疫苗研制[J]. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)， 2009， 16（3）：394-403.

[7] 付天增， 郝金婷， 李寧求，等. 遲緩愛(ài)德華菌菌蛻疫苗對(duì)羅非魚(yú)注射和口服免疫的效果分析[J]. 水生生物學(xué)報(bào)， 2016， 40（6）：1158-1165.

[8] 黃亞冬， 孫朦朦， 竇艷君，等. 飼料維生素C含量對(duì)半滑舌鰨抵抗遲緩愛(ài)德華氏菌感染的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)， 2015， 27（10）：3263-3269.