葉妮 馬金昀 程曉東

摘要 目的：觀察黃芪多糖（APS）對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞體外定向分化的調(diào)控作用。方法：建立C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系及分化模型，設(shè)置APS干預(yù)組及PBS對(duì)照組。誘導(dǎo)分化4 d后，通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色的方法檢測(cè)2組細(xì)胞中神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白巢蛋白（Nestin）、星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）、少突膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白髓鞘堿性蛋白（MBP）及神經(jīng)元的標(biāo)志性蛋白神經(jīng)元特異性核心抗原（NeuN）的表達(dá)水平。結(jié)果：與PBS對(duì)照組比較，APS干預(yù)組細(xì)胞的Nestin及GFAP蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)，MBP及NeuN蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。APS下調(diào)了分化模型中的細(xì)胞Nestin蛋白的表達(dá)水平;APS下調(diào)了GFAP蛋白的表達(dá)水平，上調(diào)了MBP及NeuN蛋白的表達(dá)水平。結(jié)論：APS可抑制C17.2神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞的定向分化，促進(jìn)向少突膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元的定向分化，APS可抑制C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的干性維持，促進(jìn)其進(jìn)入分化狀態(tài)，有可能成為治療神經(jīng)退行性疾病的潛在藥物。

關(guān)鍵詞 神經(jīng)干細(xì)胞;定向分化;黃芪多糖;少突膠質(zhì)細(xì)胞;神經(jīng)元;星形膠質(zhì)細(xì)胞;神經(jīng)退行性疾病;體外研究

Abstract Objective：To observe regulatory effects of Astragalus Polysaccharide（APS）on directional differentiation of C17.2 neural stem cells in vitro.Methods：Cultivation system and differentiation model of C17.2 neural stem cells were established in vitro.APS intervention group and PBS control group were set up.Immunofluorescence staining was used to detect expression levels of Nestin，GFAP，MBP and NeuN，the simbolic marker proteins of neural stem cells，astrocytes，oligodendrocytes and neurons，so as to explore the regulatory effects of APS on directional differentiation of C17.2 neural stem cells.Results：Compared with the PBS control group，the expression levels of Nestin and GFAP proteins in the APS intervention group were down-regulated while the expression levels of MBP and NeuN proteins were up-regulated.The differences were statistically significant（P<0.05）.APS down-regulated the expression level of Nestin protein in the differentiation model，which meant it could inhibit the stemness maintenance of C17.2 neural stem cells and lead them to enter the differentiation state.APS down-regulated the expression level of GFAP protein，and up-regulated the expression levels of MBP and NeuN proteins，which meant it could promote C17.2 neural stem cells to differentiate into oligodendrocytes and neurons directionally，and inhibit them to differentiate into astrocytes.Conclusion：APS can effectively regulate the directional differentiation of C17.2 neural stem cells in vitro，which suggests that it might be a potential drug for the treatment of neurodegenerative diseases.

Key Words Neural stem cells; Directional differentiation; Astragalus polysaccharides; Oligodendrocytes; Neurons; Astrocytes; Neurodegenerative diseases; Study in vitro

中圖分類(lèi)號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.10.012

神經(jīng)干細(xì)胞（Neural Stem Cell，NSC）是指一類(lèi)可以自我更新，主要分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元細(xì)胞，廣泛存在于胚胎及成年哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中[1]。由于具有多向分化的潛能，神經(jīng)干細(xì)胞自1992年發(fā)現(xiàn)以來(lái)便備受關(guān)注，有望成為治療神經(jīng)退行性疾?。∟eurodegenerative Diseases，ND）的種子細(xì)胞[2]。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，在體外自然分化狀態(tài)下，神經(jīng)干細(xì)胞絕大多數(shù)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞，分化為神經(jīng)元的比例次之，最小一部分分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞[3]。在ND的動(dòng)物模型體內(nèi)移植研究中也發(fā)現(xiàn)，移植的神經(jīng)干細(xì)胞往往不能有效分化為目標(biāo)細(xì)胞群[4]。因此，適當(dāng)調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化，促進(jìn)目標(biāo)細(xì)胞的再生，或可成為治療ND的有效手段。C17.2神經(jīng)干細(xì)胞是美國(guó)哈佛大學(xué)Snyder教授將V-myc基因轉(zhuǎn)入到小鼠小腦原代神經(jīng)干細(xì)胞中，而構(gòu)建的永生化細(xì)胞系。它具有神經(jīng)干細(xì)胞的所有特征，是用來(lái)研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞再生的理想工具[5]。巢蛋白（Nestin）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial Fibrillary Acidic Protein，GFAP）、髓鞘堿性蛋白（Myelin Basic Protein，MBP）、神經(jīng)元特異性核心抗原（Neuron Specific Nuclear Protein，NeuN）分別是公認(rèn)的神經(jīng)干細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元的標(biāo)志性蛋白[6-8]。本研究通過(guò)檢測(cè)Nestin、GFAP、MBP、NeuN蛋白的表達(dá)水平，探討中藥黃芪的主要活性成分——黃芪多糖（Astragalus Polysaccharide，APS）對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞體外定向分化的調(diào)控作用。565BAB24-E58C-4B62-BC45-301E26F8074C

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞株 C17.2神經(jīng)干細(xì)胞由上海交通大學(xué)納米生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供。

1.1.2 藥物 黃芪多糖（UV≥98%）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。黃芪多糖粉末用PBS緩沖液配成5 mg/mL母液，0.22 μm濾器過(guò)濾后4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 試劑與儀器 DMEM高糖培養(yǎng)基、馬血清、青鏈霉素、胰蛋白酶購(gòu)自美國(guó)Gibco公司;胎牛血清、磷酸鹽緩沖液（PBS）購(gòu)自美國(guó)HyClone公司;一抗：Nestin小鼠單抗（ab11306）、GFAP山羊多抗（ab53554）、MBP兔多抗（ab40390）、NeuN兔多抗（ab128886）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司;熒光二抗：山羊抗小鼠IgG-Cy3（115-165-003）、兔抗山羊IgG-Cy3（305-165-003）、山羊抗兔IgG-Cy3（111-165-003）購(gòu)自美國(guó)Jackson公司;多聚甲醛、Triton-X、牛血清白蛋白（BSA）、DAPI水溶液、抗淬滅封片劑等為國(guó)產(chǎn)。熒光顯微鏡購(gòu)自德國(guó)Leica公司。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 實(shí)驗(yàn)設(shè)置黃芪多糖干預(yù)組及PBS對(duì)照組。參照Li等[9]的方法建立C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系及分化模型。增殖培養(yǎng)液：84%DMEM高糖+10%胎牛血清+5%馬血清+1%雙抗。分化培養(yǎng)液：98.5%DMEM高糖+0.5%胎牛血清+1%雙抗。培養(yǎng)條件：37 ℃，5%CO2。體外培養(yǎng)體系的建立：使用增殖培養(yǎng)液以2×103/cm2的密度將細(xì)胞接種至培養(yǎng)瓶，待細(xì)胞長(zhǎng)到底部80% ～90%融合度時(shí)按1∶ 5比例傳代。分化模型的建立：取體外培養(yǎng)體系中處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，使用增殖培養(yǎng)液將細(xì)胞以2×103/cm2的密度接種至鋪有專(zhuān)用細(xì)胞爬片的6孔板，培養(yǎng)24 h后吸棄原培養(yǎng)液，換分化培養(yǎng)液。每2天換新的分化培養(yǎng)液，培養(yǎng)4 d以建立分化模型。

1.2.2 給藥方法 依據(jù)文獻(xiàn)查閱和本實(shí)驗(yàn)室的前期研究結(jié)果，將黃芪多糖的作用濃度設(shè)定為0.1 mg/mL[10-11]。黃芪多糖干預(yù)組使用分化培養(yǎng)液將黃芪多糖母液稀釋至0.1 mg/mL;PBS對(duì)照組在分化培養(yǎng)液中加入與黃芪多糖母液等體積的PBS。誘導(dǎo)分化4 d后，進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光染色，檢測(cè)Nestin、GFAP、MBP及NeuN蛋白的表達(dá)水平，該實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 取體外培養(yǎng)體系中C17.2神經(jīng)干細(xì)胞，使用增殖培養(yǎng)液將細(xì)胞以2×103/cm2的密度接種至鋪有專(zhuān)用細(xì)胞爬片的6孔板。培養(yǎng)48 h后，進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白Nestin、星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白GFAP、少突膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白MBP及神經(jīng)元的標(biāo)志性蛋白NeuN的表達(dá)水平，以鑒定該細(xì)胞處于未分化狀態(tài)。

取出6孔板，吸棄培養(yǎng)液，用4 ℃預(yù)冷的PBS清洗1次。4%多聚甲醛室溫固定30 min后，PBS清洗3次。0.3%Triton-X破膜10 min，PBS清洗3次。1%BSA封閉1 h，吸棄BSA。加入95%PBS+5%胎牛血清稀釋的一抗工作液，稀釋比例：Nestin（1∶ 100）、GFAP（1∶ 200）、MBP（1∶ 180）、NeuN（1∶ 200），4 ℃孵育過(guò)夜。PBS替代一抗工作液作為陰性對(duì)照。次日早晨吸棄一抗工作液，PBS清洗3次，加入95%PBS+5%胎牛血清稀釋的二抗工作液，稀釋比例均為1∶ 1 000，室溫避光孵育1 h。吸棄二抗工作液，PBS清洗3次后，加入DAPI水溶液，室溫避光孵育10 min，PBS清洗3次。將細(xì)胞爬片從6孔板中取出，滴加少量抗淬滅封片劑后蓋于載玻片上，熒光顯微鏡下觀察。每張細(xì)胞爬片隨機(jī)取5個(gè)無(wú)重疊的高倍鏡（200倍）視野拍照，記錄陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及總細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，先行正態(tài)分布及方差齊性檢驗(yàn)，服從正態(tài)分布且方差齊者，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);不服從正態(tài)分布或方差不齊者，采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞鑒定 經(jīng)細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，處于體外培養(yǎng)體系的C17.2神經(jīng)干細(xì)胞幾乎全部表達(dá)Nestin蛋白，占（98.62±3.51）%，極少表達(dá)GFAP、MBP、NeuN蛋白，表明此時(shí)C17.2細(xì)胞處于未分化狀態(tài)，可以用于下游分化實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)圖1。

2.2 黃芪多糖對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞干性維持的影響 經(jīng)細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，分化模型中的PBS對(duì)照組細(xì)胞表達(dá)的Nestin蛋白水平較在體外培養(yǎng)體系有所下調(diào)。分化模型中的黃芪多糖干預(yù)組細(xì)胞表達(dá)的Nestin蛋白水平較PBS對(duì)照組進(jìn)一步下調(diào)，PBS對(duì)照組中表達(dá)Nestin蛋白的細(xì)胞占（19.38±6.50）%，黃芪多糖干預(yù)組中表達(dá)Nestin蛋白的細(xì)胞占（11.09±4.32）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。黃芪多糖下調(diào)了分化模型中的細(xì)胞表達(dá)Nestin蛋白的水平。見(jiàn)圖2。

2.3 黃芪多糖對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞定向分化的影響 經(jīng)細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，分化模型中的黃芪多糖干預(yù)組細(xì)胞表達(dá)的GFAP蛋白水平較PBS對(duì)照組明顯下調(diào)，PBS對(duì)照組中表達(dá)GFAP蛋白的細(xì)胞占（43.22±12.21）%，黃芪多糖干預(yù)組中表達(dá)GFAP蛋白的細(xì)胞占（8.00±2.72）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。黃芪多糖下調(diào)了分化模型中的細(xì)胞表達(dá)GFAP蛋白的水平。見(jiàn)圖3。

2.4 黃芪多糖對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞向少突膠質(zhì)細(xì)胞定向分化的影響 經(jīng)細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，分化模型中的黃芪多糖干預(yù)組細(xì)胞表達(dá)的MBP蛋白水平較PBS對(duì)照組明顯上調(diào)，PBS對(duì)照組中表達(dá)MBP蛋白的細(xì)胞占（6.55±3.26）%，黃芪多糖干預(yù)組中表達(dá)MBP蛋白的細(xì)胞占（28.73±8.95）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。黃芪多糖上調(diào)了分化模型中的細(xì)胞表達(dá)MBP蛋白的水平。見(jiàn)圖4。565BAB24-E58C-4B62-BC45-301E26F8074C

2.5 黃芪多糖對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化的影響 經(jīng)細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，分化模型中的黃芪多糖干預(yù)組細(xì)胞表達(dá)的NeuN蛋白水平較PBS對(duì)照組明顯上調(diào)，PBS對(duì)照組中表達(dá)NeuN蛋白的細(xì)胞占（7.79±3.29）%，黃芪多糖干預(yù)組中表達(dá)NeuN蛋白的細(xì)胞占（16.36±5.02）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。黃芪多糖上調(diào)了分化模型中的細(xì)胞表達(dá)NeuN蛋白的水平。見(jiàn)圖5。

3 討論

神經(jīng)退行性疾?。∟eurodegenerative Diseases，ND）是指一類(lèi)由慢性進(jìn)行性中樞神經(jīng)組織退行性變而引起的疾病，包括以神經(jīng)元變性、死亡為特征的阿爾茨海默病（Alzheimer Disease，AD）、帕金森?。≒arkinson Disease，PD）、腦卒中（Stroke）等，以及以少突膠質(zhì)細(xì)胞死亡為特征的多發(fā)性硬化（Multiple Sclerosis，MS）、脊髓損傷（Spinal Cord Injury，SCI）、佩梅?。≒elizaeus-Merzbacher Disease，PMD）等[12]。目前，臨床上治療ND的藥物僅可以有限地延緩神經(jīng)退變進(jìn)程，不能有效地修復(fù)死亡的細(xì)胞[13]。如何在不同病理特征的ND中，獲得大量缺失的細(xì)胞，已成為神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。近年的研究發(fā)現(xiàn)，ND中均伴有星形膠質(zhì)細(xì)胞的異常激活和增殖，它們可分泌大量的炎性反應(yīng)遞質(zhì)，促進(jìn)疾病的發(fā)展，以及形成致密的膠質(zhì)瘢痕，阻礙抗炎細(xì)胞因子修復(fù)病灶[14]。適度地抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的產(chǎn)生，促進(jìn)神經(jīng)元或少突膠質(zhì)細(xì)胞的再生，便可以有效地治療ND。20世紀(jì)90年代，發(fā)育生物學(xué)證明，星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元均由神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育分化而來(lái)[2]。在成年健康腦中，神經(jīng)干細(xì)胞處于相對(duì)靜止的狀態(tài);在疾病狀態(tài)下，神經(jīng)干細(xì)胞被激活，根據(jù)微環(huán)境的誘導(dǎo)而增殖、遷移、分化為缺失的細(xì)胞，以修復(fù)病灶[15]。在ND動(dòng)物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，此時(shí)激活的神經(jīng)干細(xì)胞大多分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞，分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞或神經(jīng)元的比例很低，這與體外研究的結(jié)論一致[3-4]。本研究也發(fā)現(xiàn)，體外低血清培養(yǎng)可誘導(dǎo)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞自然分化。因此，適度調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化，便可促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞或神經(jīng)元的再生，同時(shí)又可抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度增殖，這已成為治療ND的新思路。

黃芪多糖是中藥黃芪的主要活性成分之一，也是主要發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的成分[16]。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用，在體內(nèi)可有效緩解MS的動(dòng)物模型——實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎（EAE）小鼠的神經(jīng)功能障礙，抑制脊髓脫髓鞘，抑制外周和中樞免疫系統(tǒng)中過(guò)度的炎性反應(yīng);在體外可有效抑制脂多糖誘導(dǎo)的BV-2神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，抑制炎性反應(yīng)遞質(zhì)的分泌[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖可以促進(jìn)大鼠原代神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，并保護(hù)其免受缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷[17-18]。在PD、腦缺血、腦出血以及缺血后再灌注的動(dòng)物模型研究中，黃芪多糖被證明還有抑制神經(jīng)元凋亡的作用[19-22]。然而，其對(duì)于神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化是否具有調(diào)控作用，能否促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞或神經(jīng)元的再生，至今仍不清楚。研究采用Nestin、GFAP、MBP、NeuN分別作為神經(jīng)干細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元的標(biāo)志性蛋白，通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色的方法檢測(cè)其表達(dá)水平，探討黃芪多糖對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞體外定向分化的調(diào)控作用。本研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖在0.1 mg/mL的濃度下可有效調(diào)控C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化。黃芪多糖干預(yù)后，分化模型中的細(xì)胞表達(dá)Nestin蛋白水平明顯下調(diào)，表明此時(shí)神經(jīng)干細(xì)胞已不能維持其產(chǎn)生與親代細(xì)胞相同的子代細(xì)胞的能力，失去了干細(xì)胞的特征，而進(jìn)入分化狀態(tài)。已分化的細(xì)胞中有（28.73±8.95）%分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞，（16.36±5.02）%分化為神經(jīng)元，分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞的比例下降至（8.00±2.72）%，與PBS對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明黃芪多糖可以抑制C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的干性維持，促進(jìn)其進(jìn)入分化狀態(tài)，促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的再生，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的產(chǎn)生。

綜合分析ND的發(fā)病機(jī)制、少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元再生的相關(guān)分子信號(hào)以及黃芪多糖的作用特點(diǎn)，以下機(jī)制可能參與了黃芪多糖調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化過(guò)程。1）抗氧化應(yīng)激。ND患者均伴有明顯的中樞神經(jīng)系統(tǒng)氧化還原失衡現(xiàn)象，而少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元對(duì)活性氧物質(zhì)（Reactive Oxygen Species，ROS）、活性氮物質(zhì)（Reactive Nitrogen Species，RNS）及各級(jí)代謝產(chǎn)物尤為敏感，極易引起死亡和變性[23]。有研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖在四氯化碳誘導(dǎo)的肝炎大鼠模型中，有明顯的抗氧化應(yīng)激作用[24]。因此，抗氧化應(yīng)激可能是其發(fā)揮調(diào)控作用的機(jī)制之一。2）調(diào)節(jié)神經(jīng)免疫反應(yīng)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)過(guò)度的免疫反應(yīng)是ND的另一病理特點(diǎn)，例如在AD和MS患者腦中都存在神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞、T細(xì)胞的異常激活，它們可形成強(qiáng)大的免疫級(jí)聯(lián)，互相活化，分泌大量的炎性反應(yīng)遞質(zhì)和炎性趨化因子，引發(fā)少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的大面積凋亡[25]。黃芪多糖已被證明有顯著的調(diào)節(jié)神經(jīng)免疫反應(yīng)的作用，例如它可以有效抑制脂多糖誘導(dǎo)神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，抑制炎性反應(yīng)遞質(zhì)白細(xì)胞介素-1β、腫瘤壞死因子-α、核因子-κB的分泌[11，26]。因此，調(diào)節(jié)神經(jīng)免疫反應(yīng)或成為黃芪多糖調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的潛在機(jī)制之一。3）調(diào)控神經(jīng)發(fā)育相關(guān)的信號(hào)通路。有研究證明，TGF-β/Smad、Sonic Hedgehog、Notch、Wnt/β-catenin、MAPK等是參與胚胎時(shí)期神經(jīng)組織發(fā)育的主要信號(hào)通路[27]。具體地，TGF-β/Smad等通路主要影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育，Sonic Hedgehog等通路主要影響少突膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)，Wnt/β-catenin等通路主要影響神經(jīng)元的生長(zhǎng)。黃芪多糖有可能是通過(guò)調(diào)節(jié)這些信號(hào)通路的活性，從而促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的再生，抑制了星形膠質(zhì)細(xì)胞的產(chǎn)生。565BAB24-E58C-4B62-BC45-301E26F8074C

本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)黃芪多糖可有效地調(diào)控C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化，有可能成為治療ND的潛在藥物。在此基礎(chǔ)上，本研究將進(jìn)一步探討黃芪多糖調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的細(xì)胞分子機(jī)制，以及完善動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，以期能為臨床上治療ND提供新的方法。

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（2018-09-06收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）565BAB24-E58C-4B62-BC45-301E26F8074C