漆子鈺 周育真 艾葉 彭東輝

摘要：[目的]篩選春蘭組培各階段的最佳培養(yǎng)條件，建立優(yōu)良的春蘭快繁體系，為春蘭大規(guī)模生產(chǎn)開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。[方法]以春蘭‘黃梅’ב黃荷’F無菌播種形成的根狀莖為試驗(yàn)材料，通過基本培養(yǎng)基（1/2MS、改良1/2MS、HyponexⅡ）和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（6-BA、NAA、TDZ、IBA）等因子不同組合，圍繞增殖、分化、生根等階段建立其再生體系，并對(duì)培育出的組培苗進(jìn)行移栽練苗。[結(jié)果]增殖最適培養(yǎng)基為3.0g·LHyponexⅡ+0.5mg·L6-BA+3.0mg·LNAA+1.0g·L活性炭（AC）+30.0g·L白砂糖（Su）+7.0g·L瓊脂（Ag），生長(zhǎng)速度和增殖系數(shù)分別為7.31和6.02;分化最適培養(yǎng)基為2.0mg·L6-BA+0.3mg·LNAA+30.0g·LSu+7.0g·LAg，分化率、芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)和株高分別為90.00%、5.44個(gè)和2.53cm;生根最適培養(yǎng)基為1.5mg·LIBA+2.0g·L蛋白胨+1.0g·LAC+25.0g·LSu+7.0g·LAg，生根率、生根數(shù)和平均根長(zhǎng)分別為100.00%、8.03條和3.00cm;春蘭組培苗練苗移栽60d后存活率達(dá)96.53%。[結(jié)論]新型基本培養(yǎng)基HyponexⅡ（3.0g·L）對(duì)春蘭增殖培養(yǎng)有高效促進(jìn)作用，高水平的IBA（1.5mg·L）有利于春蘭組培苗生根壯苗。

關(guān)鍵詞：春蘭;增殖培養(yǎng);分化培養(yǎng);生根培養(yǎng)

中圖分類號(hào)：S682.31文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-0384（2019）09-1032-08

0引言

（研究意義）春蘭Cymbidium goeringii為蘭科Orchidaceae蘭屬Cymbidium的多年生草本植物，是我國蘭科植物（國蘭）中資源最豐富、分布最廣的種類之一，一般于早春開花，花姿優(yōu)美，氣質(zhì)優(yōu)雅，備受國人喜愛，有“天下第一香”和“花中君子”的稱號(hào);然而，高昂的售價(jià)與新品種培育周期漫長(zhǎng)等問題一直制約著春蘭的規(guī)?；l(fā)展，長(zhǎng)期以來國內(nèi)春蘭的商品市場(chǎng)主要依賴日本、臺(tái)灣等地的返銷苗，該類苗與原生苗相比存在著成活率差、倒苗等問題。目前蘭花快速繁殖的主要途徑是通過組織培養(yǎng)技術(shù)，因此如何借用組織培養(yǎng)技術(shù)培育開品好、生長(zhǎng)周期快的本土優(yōu)良新品種提升產(chǎn)品自信、豐富春蘭市場(chǎng)是解決這一問題最有效的方法。（前人研究進(jìn)展）近年來關(guān)于國蘭雜交種的組培技術(shù)已有不少報(bào)道，常見于‘宋梅’ב集圓’、‘宋梅’ב韓國桃花’和‘春綠蘭’ב虎雪蘭’等;前人對(duì)國蘭組培研究的基本培養(yǎng)基多使用MS培養(yǎng)基，后期興起的Hyponex培養(yǎng)基為蘭花組培提供了更為簡(jiǎn)便的配制方法，多見于蝴蝶蘭、墨蘭等研究中。（本研究切入點(diǎn)）目前關(guān)于春蘭‘黃梅’ב黃荷’F的研究尚未見報(bào)道，同時(shí)Hyponex對(duì)國蘭生長(zhǎng)影響的報(bào)道較少，尤其針對(duì)春蘭組培的研究?jī)H在簡(jiǎn)報(bào)中出現(xiàn);此外，本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)，不同品種的春蘭對(duì)組培條件的需求仍然存在差異，缺少科學(xué)完整且適用于工廠規(guī)?；a(chǎn)的技術(shù)理論，為此，本試驗(yàn)對(duì)春蘭‘黃梅’ב黃荷’F根狀莖及其組培苗的增殖、分化、生根培養(yǎng)和煉苗移栽的關(guān)鍵影響因子進(jìn)行了相關(guān)研究。（擬解決的關(guān)鍵問題）本試驗(yàn)選取了穩(wěn)定性強(qiáng)及市場(chǎng)上易獲取的基本培養(yǎng)基（MS和Hypo-nexⅡ）、細(xì)胞分裂素（6-BA和TDZ）、生長(zhǎng)素（NAA和IBA）和有機(jī)添加劑（蛋白胨）為春蘭‘黃梅’ב黃荷’F組培各階段尋找最佳培養(yǎng)條件，旨在建立優(yōu)良、高效的春蘭快繁體系，形成規(guī)?；N植，從而提高春蘭在我國花卉市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)力。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

以2015年9月取自福建連城蘭花股份有限公司的春蘭‘黃梅’ב黃荷’F無菌播種形成的根狀莖為試驗(yàn)材料。試驗(yàn)于福建農(nóng)林大學(xué)下安園林植物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1增殖培養(yǎng) 采用L（3）正交試驗(yàn)研究不同基本培養(yǎng)基、6-BA和NAA對(duì)春蘭根狀莖增殖培養(yǎng)的影響（表1），所有處理附加1.0g·L活性炭（AC）+30.0g·L白砂糖（Su）+7.0g·L瓊脂（Ag），pH 5.6-5.8。選取長(zhǎng)1.5-2.0cm的健壯根狀莖（五分支）接人上述增殖培養(yǎng)基中。試驗(yàn)每組接種10瓶，每瓶接種5個(gè)材料，2次重復(fù)。光照時(shí)間12h'd，培養(yǎng)溫度（26±2）℃，散射光培養(yǎng)，120d后統(tǒng)計(jì)根狀莖的生長(zhǎng)速度和增殖系數(shù)。

生長(zhǎng)速度=（增殖后根狀莖質(zhì)量-接種時(shí)根狀莖質(zhì)量）/接種時(shí)根狀莖質(zhì)量（1）

增殖系數(shù)=接種根狀莖上新增側(cè)枝數(shù)/接種根狀莖數(shù)（新增根狀莖長(zhǎng)度>0.5cm）（2）

1.2.2分化培養(yǎng) 以1/2MS培養(yǎng)基（30.0g·LSu，7.0g·LAg，pH 5.6～5.8）為基本培養(yǎng)基，針對(duì)NAA（0.3和0.5mg·L）、6-BA（0.0，1.0，2.0和3.0mg·L）和TDZ（0.0，0.5，1.0和1.5mg·L）配置培養(yǎng)基探索其對(duì)春蘭根狀莖分化的影響（表2）。材料選取、接種方式同1.2.1。光照時(shí)間12h·d，培養(yǎng)溫度26±2℃，前30d散射光培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)入500-1500lx光強(qiáng)下培養(yǎng)，120d后統(tǒng)計(jì)根狀莖的分化率和芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)。

分化率=分化根狀莖個(gè)數(shù)/接種根狀莖數(shù)×100% （3）

芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)=誘導(dǎo)出的芽個(gè)數(shù)/分化根狀莖數(shù) （新芽>0.5cm） （4）

1.2.3IBA和蛋白胨對(duì)組培苗生根的培養(yǎng) 以1/2MS為基本培養(yǎng)基，對(duì)IBA（0.5、1.0和1.5mg·L）和蛋白胨（1.0、2.0和3.0g·L）進(jìn)行全因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)（表3），所有處理附加1.0g·LAC+25.0g·LSu+7.0g·LAg（pH 5.6-5.8），研究其對(duì)株高（6±2）cm組培苗（無根）生根的影響。每組接種10瓶，每瓶接種3株，重復(fù)2次。光照時(shí)間12h·d，培養(yǎng)溫度（26±2）℃，光強(qiáng)500-1000k，120d后統(tǒng)計(jì)根狀莖的生根率和生根數(shù)。

生根率=生根株數(shù)/接種株數(shù)×100% （5）

生根數(shù)=生根根條數(shù)/生根株數(shù)

（每條根長(zhǎng)度>0.5cm） （6）

1.2.4煉苗移栽 選取生長(zhǎng)健壯、葉色正常，株高（10±2）cm，根皮色白中帶綠、無黑色、畸形、變異的組培苗為試驗(yàn)材料，清凈根部培養(yǎng)基，在陰涼處晾干2d，移栽至樹皮（2-3cm）和火燒石等體積混合的基質(zhì)中，60d后觀察生長(zhǎng)狀態(tài)并統(tǒng)計(jì)成活率.

成活率=成活的株數(shù)/移栽株數(shù)×100% （7）

1.2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 使用Excel 2010計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和Least-Significant Difference（LSD）多重比較，水平0.01

2結(jié)果與分析

2.1基本培養(yǎng)基、6-BA和NAA對(duì)根狀莖增殖的影響

接種時(shí)根狀莖上無明顯凸起（圖1-A），培養(yǎng)15d后有明顯萌動(dòng)，新萌動(dòng)的根狀莖向下扎入培養(yǎng)基中（圖1-B），培養(yǎng)120d時(shí)根狀莖數(shù)量明顯增多，且新生根狀莖亦會(huì)出現(xiàn)分支現(xiàn)象（圖1-C）。

由表4可知：比較生長(zhǎng)速度和增殖系數(shù)指標(biāo)中各因素R值，均表明基本培養(yǎng)基的影響高于6-BA和NAA，6-BA對(duì)生長(zhǎng)速度的影響大于NAA，NAA對(duì)增殖系數(shù)的影響大于6-BA。

通過極差分析得出：最有利于根狀莖生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為3.0g·LHyponexⅡ+0.5mg·L6-BA+3.0mg·LNAA（即處理9）;有利于提高根狀莖增殖系數(shù)的培養(yǎng)基為：1/2MS+0.3mg·L6-BA+5.0mg·LNAA。方差分析表明：基本培養(yǎng)基（P=0.000<0.01）和6-BA（P=0.005<0.01）對(duì)春蘭根狀莖生長(zhǎng)速度的影響極顯著，NAA的影響不顯著;基本培養(yǎng)基（P=0.009<0.01）對(duì)春蘭增殖系數(shù)的影響極顯著，6-BA和NAA的影響不顯著。

進(jìn)一步用LSD多重比較不同水平的基本培養(yǎng)基和6-BA對(duì)根狀莖生長(zhǎng)速度的影響：3.0g·LHyponexⅡ與1/2MS（P=0.000<0.01）、改良1/2MS （P=0.000<0.01）之間差異極顯著，后兩者之間差異不顯著;0.1mg·L6-BA與0.5mg·L6-BA差異極顯著（P=0.005&lt;0.01），0.3mg·L6-BA與其他2個(gè)濃度之間差異不顯著。進(jìn)一步用LSD多重比較不同水平的基本培養(yǎng)基對(duì)根狀莖增殖系數(shù)的影響：1/2MS和3.0g·LHyponexⅡ?qū)υ鲋诚禂?shù)差異極顯著（P=0.002<0.01），改良1/2MS與前兩者之間差異不顯著。由此可見：缺少微量元素的1/2MS對(duì)根狀莖增殖培養(yǎng)無明顯促進(jìn)作用;HyponexⅡ?qū)Ρ?/2MS更有利于春蘭根狀莖的增殖培養(yǎng);1/2MS更有利于促進(jìn)春蘭根狀莖的分支生長(zhǎng);6-BA濃度的升高有利于春蘭根狀莖的誘導(dǎo)。

2.2NAA、6-BA和TDZ對(duì)根狀莖芽分化的影響

接種時(shí)1.5-2.0cm的根狀莖上無明顯的芽點(diǎn)凸起（圖1-D），培養(yǎng)30d后誘導(dǎo)出肉眼可見的向上生長(zhǎng)的芽（圖1-E），培養(yǎng)120d時(shí)根狀莖上形成了葉片2片以上的春蘭小苗（圖1-F）。

由表5可知：有6-BA參與的處理中，0.3mg·L水平的NAA比0.5mg·L水平分化率更高;有TDZ參與的處理中，1.0mg·LTDZ更有利于提高分化率。芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)最多的是處理2（5.44個(gè)），其次為處理3（4.90個(gè)），處理9的芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)最少（3.09個(gè)），12個(gè)處理中0.3mg·LNAA的芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)普遍比0.5mg·LNAA更多，有TDZ參與的處理中，1.0mg·LTDZ更有利于提高芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)。1.0mg·L6-BA時(shí)株高保持了較高高度，處理7達(dá)2.77cm，處理1達(dá)2.70cm，處理6的株高最低（1.06cm），隨著6-BA或者TDZ的濃度升高，株高隨之降低。

方差分析表明：NAA對(duì)春蘭根狀莖的分化率（P=O.000<0.01）、芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)（P=0.000<0.01）和株高（P=0.001<0.01）的影響極顯著;6-BA（p=0.000<0.01）對(duì)株高的影響極顯著，對(duì)分化率和芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)的影響不顯著;TDZ對(duì)根狀莖的分化率（P=0.000<0.01）和株高（P=0.000<0.01）的影響極顯著，對(duì)芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)不顯著。

處理1、2和3的芽分化效果都較好，但高濃度的6-BA（3.0mg·L）不利于組培苗株高的伸長(zhǎng);處理2的分化率較處理1低8%，芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)平均多出1.37個(gè)芽，株高上無明顯差異;考慮需高效的分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)組培苗轉(zhuǎn)接至生根壯苗培養(yǎng)，分析可知12組處理中處理2培養(yǎng)基最適合誘導(dǎo)芽的分化。

2.3IBA和蛋白胨對(duì)組培苗生根的影響

接種時(shí)組培苗底部豎向插入培養(yǎng)基適當(dāng)深度，培養(yǎng)120d時(shí)組培苗底部的假鱗莖周邊新生出若干的肉質(zhì)根，同時(shí)葉片適當(dāng)?shù)纳扉L(zhǎng)變壯（圖1-G）。

由表6可知：隨著IBA濃度升高，生根率呈逐漸升高的趨勢(shì)，處理8的生根率（100.00%）和生根數(shù)（8.03條）都表現(xiàn)最好。方差分析表明：IBA對(duì)生根率（P=0.031<0.05）和生根數(shù)（P=0.036<0.05）影響顯著，對(duì)平均根長(zhǎng)（P=0.006<0.01）影響極顯著;蛋白胨對(duì)生根率、生根數(shù)和平均根長(zhǎng)影響不顯著;IBA和蛋白胨對(duì)平均根長(zhǎng)（P=0.000<0.01）影響極顯著，對(duì)生根率和生根數(shù)影響不顯著。

進(jìn)一步用LSD多重比較IBA的3個(gè)不同水平對(duì)生根率的影響：0.5mg·L和1.5mg·L之間差異顯著（P=0.006<0.01），1.0mg·L和前兩者之間差異不顯著.進(jìn)一步用LSD多重比較IBA的3個(gè)不同水平對(duì)生根數(shù)的影響：0.5mg·L和1.5mg·L之間差異顯著（P=0.027<0.05），1.0mg·L和前兩者之間差異不顯著。進(jìn)一步用LSD多重比較IBA的3個(gè)不同水平對(duì)平均根長(zhǎng)的影響：0.5mg·L和1.0mg·L（P=0.004<0.01）、1.5mg·L（P=0.001<0.01）之間差異極顯著，后兩者之間差異不顯著。表明在一定范圍內(nèi)，IBA濃度的升高有利于提高春蘭組培苗的生根率、生根數(shù)和根長(zhǎng)的生長(zhǎng)。

2.4煉苗移栽

春蘭組培苗在樹皮（2-3cm）和火燒石等體積混合的基質(zhì)中移栽60d后，存活率達(dá)96.53%（圖1-H）。

3討論與結(jié)論

3.1 討論

3.1.1增殖的影響 增殖培養(yǎng)在蘭花組培中是至關(guān)重要的一環(huán)，有研究表明春蘭對(duì)培養(yǎng)基中無機(jī)鹽濃度要求較低，若長(zhǎng)時(shí)間繼代培養(yǎng)1/2MS較合適，近年來對(duì)春蘭組織培養(yǎng)廣泛使用的基本培養(yǎng)基多為MS;有研究指出春蘭、蕙蘭、建蘭適合培養(yǎng)在低水平的無機(jī)鹽和氨態(tài)氮培養(yǎng)基中，若長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)以1/2MS為宜，寒蘭、墨蘭則適合培養(yǎng)在高水平的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中。在前人的研究基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)了多因素共同作用對(duì)根狀莖增殖的影響，對(duì)低水平的無機(jī)鹽（1/2MS）進(jìn)行了改良，結(jié)果表明缺少微量元素對(duì)春蘭根狀莖的增殖未起到促進(jìn)作用;目前關(guān)于Hyponex對(duì)春蘭根狀莖增殖影響的研究報(bào)道較少，在鄭艷艷對(duì)墨蘭‘奇花’的研究中表明，當(dāng)MS和Hyponex同時(shí)添加2.0mg·LBA+0.1mg·LNAA+1.0g.L蛋白胨時(shí)，HyponexΙ和HyponexⅡ混合使用時(shí)的增殖效果優(yōu)于MS培養(yǎng)基;本試驗(yàn)結(jié)果顯示HyporlexⅡ的參與對(duì)比MS、6-BA和NAA起到了明顯的促進(jìn)作用，甚至大過植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在增殖階段的優(yōu)勢(shì)，但若缺少合適的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配合，根狀莖多短小似桑葚狀聚集在一起。由此可知，春蘭根狀莖對(duì)無機(jī)鹽、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的選擇與濃度之間具有緊密聯(lián)系，Hyponex作為基本培養(yǎng)基時(shí)需要配合適當(dāng)?shù)闹参锷L(zhǎng)調(diào)節(jié)劑引導(dǎo)根狀莖伸長(zhǎng)。

一般在增殖繼代培養(yǎng)階段，生長(zhǎng)素（NAA、IBA等）與細(xì)胞分裂素（BA、TDZ等）的所需量成反比，即生長(zhǎng)素相對(duì)較多，細(xì)胞分裂素相對(duì)需求較少，同時(shí)也要注意生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素之間的平衡關(guān)系。孫芳對(duì)‘如意素’ב集園’的研究表明當(dāng)0.5mg·L6-BA+2.0mg·LNAA時(shí)為最佳增殖培養(yǎng)基，增殖系數(shù)為5.25，當(dāng)IBA替代NAA即0.1mg·L6-BA+2.0mg·LIBA時(shí)增殖系數(shù)為4.38;劉幸佳對(duì)‘宋梅’的研究表明當(dāng)0.1mg·L6-BA與1.0mg·LIBA或5.0mg·LNAA搭配時(shí)為最佳增殖培養(yǎng)基，增殖系數(shù)均為5.8;牛田對(duì)‘金荷鼎’與‘赤蕙’的研究表明當(dāng)0.5mg·L6-BA+1.0mg·LNAA時(shí)為最佳增殖培養(yǎng)基，增殖系數(shù)為5.67。在前人的研究基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)根據(jù)規(guī)律選取了低濃度6-BA搭配高濃度NAA對(duì)春蘭進(jìn)行增殖培養(yǎng)研究，最高增殖系數(shù)可達(dá)7.40;在實(shí)際生產(chǎn)中蘭花根狀莖的生長(zhǎng)速度與增殖系數(shù)是同樣重要的一項(xiàng)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，因此對(duì)比前人研究，本試驗(yàn)增加了生長(zhǎng)速度的評(píng)判因子，本研究結(jié)果顯示，春蘭根狀莖在3.0g·LHyponexⅡ+0.5mg·L6-BA+3.0mg·LNAA（處理9）中生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于其他處理，增殖系數(shù)處于中間值，在保障一定增殖系數(shù)的條件下，生長(zhǎng)速度快的處理可解決春蘭在組培快繁期間培養(yǎng)周期長(zhǎng)的問題，即可實(shí)現(xiàn)一年內(nèi)2次轉(zhuǎn)接增至3次，此配方不僅提高了增殖系數(shù)，同時(shí)縮短了增殖培育時(shí)間。此外，結(jié)合本試驗(yàn)多重比較的結(jié)果針對(duì)該雜交春蘭增殖階段可繼續(xù)嘗試6-BA濃度高于0.5mg·L的研究。

3.1.2芽分化的影響 影響根狀莖芽分化的因素是比較復(fù)雜的，除去生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的作用，還與活性炭和外援添加物有著密不可分的關(guān)系。王永清等研究表明高水平6-BA（2.0mg·L）與低水平NAA（0.5mg·L）有利于春蘭芽的分化，高水平NAA（2.0mg·L）有利于根的誘導(dǎo);在前人的研究基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)僅針對(duì)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（NAA、6-BA、TDZ）進(jìn)行了探討：0.3mg·LNAA的分化效果整體優(yōu)于0.5mg·L，研究中最低水平的6-BA（1.0mg·L）和NAA（0.3mg·L）分化率最高（98%），但在規(guī)模化生產(chǎn)中分化階段考慮的不僅僅是分化率，需同時(shí)考慮芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)和株高等評(píng)判因子，綜合考慮較優(yōu)組合為2.0mg.L6-BA+0.3mg.LNAA。本試驗(yàn)還對(duì)TDZ進(jìn)行了探討，目前關(guān)于TDZ對(duì)春蘭根狀莖分化培養(yǎng)階段的影響未見報(bào)道，多集中在國蘭的增殖培養(yǎng)階段，劉映雯對(duì)蓮辦蘭的研究結(jié)果表明TDZ高效的細(xì)胞分裂活性在其芽分化階段優(yōu)于6-BA，在本研究中在同為細(xì)胞分裂素的TDZ替代6-BA的情況下，高濃度的TDZ（0.5-1.5mg·L）不利于春蘭的分化，這可能是不同蘭屬在芽分化階段對(duì)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的需求有著一定的差異，在實(shí)際應(yīng)用過程中應(yīng)根據(jù)不同品種不同階段進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，同時(shí)在后期的研究中可適當(dāng)降低TDZ濃度對(duì)春蘭分化繼續(xù)進(jìn)行探討。

3.1.3生根的影響 IBA是組培植物生根壯苗的關(guān)鍵。李玉萍利用正交試驗(yàn)對(duì)比了IBA、NAA和BA對(duì)‘宋梅’ב韓國桃花’生根的影響，其研究結(jié)果表明對(duì)平均根數(shù)的影響大小為IBA>NAA>BA，同時(shí)表明不添加或低濃度的有機(jī)質(zhì)對(duì)雜交蘭幼根生長(zhǎng)更有利;卜朝陽的研究也表明了在0.1mg·L6-BA+0.5mg·LNAA的基礎(chǔ)上，添加0.2mg.LIBA更有利于蝴蝶蘭生根。本試驗(yàn)經(jīng)過120d的培養(yǎng)，結(jié)果表明IBA有利于春蘭生根培養(yǎng)，且高水平IBA（1.5mg.L）對(duì)春蘭根部生長(zhǎng)更有利;該研究結(jié)果與魏韓英對(duì)春蘭‘宋梅’生根的研究結(jié)果相反，其認(rèn)為在添加0.1mg·L6-BA+0.5/1.0/2.0mg·LIBA的全因素處理中，低濃度IBA（0.5mg.L）生根效果最好，這可能是因?yàn)榻档蜔o機(jī)鹽濃度改變了植物體內(nèi)的滲透壓，從而影響了植物體的代謝。本研究結(jié)果顯示蛋白胨濃度對(duì)春蘭組培苗生根的影響很小，這可能由于培養(yǎng)基中氮源已經(jīng)充足，1.0-3.0g·L水平的蛋白胨不是春蘭生根的關(guān)鍵。

3.2結(jié)論

本試驗(yàn)從不同基本培養(yǎng)基（MS和Hyponex）、細(xì)胞分裂素（6-BA和TDZ）、生長(zhǎng)素（NAA和IBA）和有機(jī)添加劑（蛋白胨）對(duì)春蘭‘黃梅’ב黃荷’雜交根狀莖組培快繁各階段進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：增殖最適培養(yǎng)基為3.0g·LHyponexⅡ+0.5mg·L6-BA+3.0mg.L NAA+1.0g·LAC+30.0g.LSu+7.0g·LAg，生長(zhǎng)速度和增殖系數(shù)分別為7.31和6.02;分化最適培養(yǎng)基為2.0mg·L6-BA+0.3mg·LNAA+30.0g.LSu+7.0g.LAg，分化率、芽誘導(dǎo)個(gè)數(shù)和株高分別為90.00%、5.44個(gè)和2.53cm;生根最適培養(yǎng)基為1.5mg·LIBA+2.0g·L蛋白胨+1.0g.LAC+25.0g.LSu+7.0g.LAg，生根率、生根數(shù)和根長(zhǎng)分別為100.00%、8.03條和3.00cm;練苗移栽60d后存活率達(dá)96.53%。