王珍妮， 陳 麗， 龔唯鳴

細(xì)菌性肺炎是由各種致病菌引起的肺部炎癥性疾病，是臨床上的常見病和多發(fā)病[1-2]。新生兒在出生后不久，身體各項(xiàng)機(jī)能均未完善，易受到肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌等致病菌的侵襲，進(jìn)而表現(xiàn)為細(xì)菌性肺炎[3-4]?；純喊l(fā)病后表現(xiàn)為典型的咳嗽、氣促、喘息等呼吸系統(tǒng)癥狀，并伴有惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉等癥狀，對(duì)新生兒健康造成嚴(yán)重威脅，若不及時(shí)治療控制將影響患兒的正常發(fā)育[5]?，F(xiàn)有研究顯示，新生兒細(xì)菌性肺炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程與免疫系統(tǒng)有緊密關(guān)聯(lián)，其中自然殺傷細(xì)胞、淋巴細(xì)胞亞群等在細(xì)菌感染性肺炎發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用[6-7]。為了進(jìn)一步闡釋新生兒細(xì)菌性肺炎外周血自然殺傷細(xì)胞和淋巴細(xì)胞亞群與病程進(jìn)展的關(guān)聯(lián)，本研究以深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院近期收治的細(xì)菌性肺炎新生兒為研究對(duì)象，對(duì)其外周血自然殺傷細(xì)胞、淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選擇2017年1月-2019年1月本院收治的細(xì)菌性肺炎新生兒80例為研究對(duì)象納入觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均為新生兒，日齡≤28 d；②患兒經(jīng)胸部X射線檢查、細(xì)菌學(xué)檢查診斷確診為細(xì)菌感染性肺炎；③患兒有咳嗽、肺部濕啰音等典型的肺炎癥狀；④患兒家屬簽署知情同意書，研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患兒確診為其他類型的肺炎；②患兒入組前服用相關(guān)治療藥物影響檢測(cè)指標(biāo)的判斷；③患兒并發(fā)其他免疫系統(tǒng)疾病。另選同期在本院進(jìn)行健康體檢的新生兒50例為對(duì)照組。

1.2 檢測(cè)方法

觀察組、對(duì)照組入院時(shí)分別采集空腹靜脈血約3 mL，加入到含有EDTA的抗凝管中，在采血后的2 h內(nèi)完成測(cè)定。在試管中分別加入單克隆抗體CD16+、CD56+、CD59+、CD3+、CD4+、CD8+，室溫避光孵育20 min后，加入紅細(xì)胞溶解素2 mL溶解紅細(xì)胞約8 min，在TG-20G型高速離心機(jī)（常州金壇良友儀器有限公司）中離心，轉(zhuǎn)速5 000 r/ min離心10 min，用磷酸緩沖液（PBS）洗滌2次后加入0.5 mL含1%多聚甲醛PBS固定后采用FACSCAlibur型流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）進(jìn)行檢測(cè)。異硫氰酸（FITC） 熒光抗體CD16+、CD56+、CD59+、CD4+、CD8+、CD3+，全部購(gòu)于美國(guó)Pharmingen公司產(chǎn)品，均為小鼠抗人IgG 型抗 體。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)觀察組、對(duì)照組納入者的自然殺傷細(xì)胞包括CD16+、CD56+、CD59+以及淋巴細(xì)胞亞群包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比。并將觀察組患者按病程進(jìn)展情況分為：急性期患者47例，急性期為肺炎3 d以內(nèi)，氣促、有缺氧體癥，發(fā)熱，肺部細(xì)濕啰音及X線胸片病灶等；恢復(fù)期患者33例，恢復(fù)期通常肺炎病程5 d之后氣促、缺氧消退，發(fā)熱者熱退，肺部啰音轉(zhuǎn)粗或消失，X線胸片病灶在吸收等，比較急性期與恢復(fù)期患兒間自然殺傷細(xì)胞、淋巴細(xì)胞亞群等細(xì)胞水平差異。采用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)對(duì)兩組納入者的自然殺傷細(xì)胞與淋巴細(xì)胞亞群間的相關(guān)性進(jìn)行分析探 討。

1.4 數(shù)據(jù)分析方法

以SAS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以 [n( % ) ]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組間基線資料比較

觀察組中男4 3例、女3 7例；患兒日齡9～28 d，平均 （16.82±7.82）d；患兒病原菌分布：肺炎鏈球菌24例、金黃色葡萄球菌21例、肺炎克雷伯菌15例、流感嗜血桿菌11例、銅綠假單胞菌9例。對(duì)照組中男27例，女23例；日齡6～28 d，平均 （15.28±7.99）d。兩組性別、日齡等一般臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 各組間自然殺傷細(xì)胞水平比較

經(jīng)檢測(cè)顯示，觀察組患兒的自然殺傷細(xì)胞包括CD16+、CD56+、CD59+等細(xì)胞水平均低于對(duì)照組；觀察組急性期患兒的CD16+、CD56+、CD59+細(xì)胞水平均低于恢復(fù)期患兒，三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組間自然殺傷細(xì)胞水平比較Table 1 Levels of natural killer cell in peripheral blood in terms of disease status

2.3 各組間淋巴細(xì)胞亞群水平比較

觀察組患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于對(duì)照組，CD8+水平高于對(duì)照組；觀察組急性期患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于恢復(fù)期患兒，CD8+水平高于恢復(fù)期患兒，三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 各組間淋巴細(xì)胞亞群水平比較Table 2 Levels of lymphocyte subsets in peripheral blood in terms of disease status

2.4 相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，CD16+、CD56+、CD59+與CD3+、CD4+呈正相關(guān)，與CD8+呈負(fù)相關(guān)，見表3。

表3 自然殺傷細(xì)胞與淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis between natural killer cells and lymphocyte subsets

3 討論

新生兒由于剛出生不久，機(jī)體的各個(gè)臟器功能均處于未完善階段，此時(shí)機(jī)體的免疫系統(tǒng)未完全建立，易受到外界致病因素的侵襲出現(xiàn)各種感染性疾病，其中新生兒細(xì)菌性肺炎是常見的一種[8]。進(jìn)一步的研究揭示，新生兒細(xì)菌性肺炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程與免疫系統(tǒng)有緊密關(guān)聯(lián)，其中以自然殺傷細(xì)胞、淋巴細(xì)胞亞群等在細(xì)菌感染性肺炎發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用[9-10]。自然殺傷細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞組成成分，非特異性免疫系統(tǒng)的主要成員之一，在參與機(jī)體的抗腫瘤、抗病毒、抵御外來(lái)細(xì)菌侵襲、免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要的作用。自然殺傷細(xì)胞可通過(guò)自然殺傷、抗體依賴的細(xì)胞毒作用，并且通過(guò)分泌相應(yīng)的細(xì)胞因子對(duì)各種外界侵入的病毒、細(xì)菌等致病微生物進(jìn)行殺滅，抑制其在體內(nèi)的增殖[11-12]。自然殺傷細(xì)胞根據(jù)其表面標(biāo)志物不同可分為多個(gè)亞群，其中常見的有CD16+、CD56+、CD59+等，當(dāng)各個(gè)亞群的細(xì)胞呈現(xiàn)較高水平時(shí)，患者免疫系統(tǒng)對(duì)于外界致病物質(zhì)的清掃能力加強(qiáng)，而處于較低水平時(shí)，免疫系統(tǒng)識(shí)別功能和清除能力也大受影響[13-14]。T淋巴細(xì)胞也是機(jī)體免疫系統(tǒng)重要的組成部分，能夠參與機(jī)體的細(xì)胞免疫過(guò)程，主要是抗胞內(nèi)外致病物質(zhì)的感染、瘤細(xì)胞和異體細(xì)胞的侵襲等；其在體內(nèi)主要活躍的亞型結(jié)構(gòu)有CD3+、CD4+、CD8+等亞型[15-16]。

本研究對(duì)各組入選者的各項(xiàng)免疫細(xì)胞水平進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果顯示，觀察組患兒的自然殺傷細(xì)胞包括CD16+、CD56+、CD59+等細(xì)胞水平均低于對(duì)照組，觀察組急性期患兒的CD16+、CD56+、CD59+細(xì)胞水平均低于恢復(fù)期患兒，三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明細(xì)菌感染性肺炎的發(fā)生，患者體內(nèi)的自然殺傷細(xì)胞相比于正常人群處于較低水平，而患者在急性期與恢復(fù)期時(shí)的細(xì)胞水平也存在差異，提示自然殺傷細(xì)胞與細(xì)菌性肺炎的疾病進(jìn)展過(guò)程有一定關(guān)聯(lián)。隨著患兒自然殺傷細(xì)胞水平的升高，細(xì)菌性肺炎病變有好轉(zhuǎn)。在淋巴細(xì)胞亞群的觀察中，觀察組患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于對(duì)照組，CD8+水平高于對(duì)照組，觀察組急性期患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于恢復(fù)期患兒，CD8+水平高于恢復(fù)期患兒，三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同樣表明隨著淋巴細(xì)胞水平的升高，細(xì)菌性肺炎病變有好轉(zhuǎn)。在自然殺傷細(xì)胞與淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)性比較中，CD16+、CD56+、CD59+與CD3+、CD4+呈正相關(guān)性，與CD8+呈負(fù)相關(guān)性，提示自然殺傷細(xì)胞與淋巴細(xì)胞亞群間存在著密切的關(guān)聯(lián)，均參與并反映了新生兒細(xì)菌性肺炎的病程進(jìn)展情況。

綜上所述，細(xì)菌性肺炎新生兒體內(nèi)的免疫系統(tǒng)紊亂，外周血自然殺傷細(xì)胞和淋巴細(xì)胞亞群的變化與疾病的進(jìn)展恢復(fù)有密切關(guān)聯(lián)。因此，通過(guò)對(duì)細(xì)菌性肺炎患兒進(jìn)行免疫功能的監(jiān)測(cè)，對(duì)于疾病的進(jìn)展、療效評(píng)估有參考作用。