刁全平，郭 華，李鐵純，回瑞華，侯冬巖

(鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，遼寧 鞍山 114007)

香菇(Lentinus edodes,Shiitake)為擔(dān)子菌綱傘菌目口蘑科香菇屬，又稱(chēng)香蕈、冬菇、花菇等，富有營(yíng)養(yǎng)，香味濃郁，具有藥用及滋補(bǔ)養(yǎng)生作用，是著名的藥食兩用真菌[1-3]。研究表明，香菇中含有多種活性生物成分，具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、抗菌抗病毒、抗氧化、降血糖等生理功能[4]。維生素E又名生育酚，具有促使血管擴(kuò)張、抗凝血、抗氧化、清除自由基的功能，人體不能自行合成，只能必須從食物中攝取[5-7]。目前，關(guān)于香菇中維生素E的測(cè)定尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，本文建立HPLC法測(cè)定香菇中維生素E的含量，為香菇的綜合利用及開(kāi)發(fā)提供一定的技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

1525型HPLC儀，配2996型二極管陣列檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司)，AL-204 電子天平(梅特勒-托利多)，KQ-250E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

甲醇為色譜純，乙腈、二氯甲烷、正己烷為分析純，維生素E對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院)。干香菇購(gòu)自鞍山云豐菇業(yè)食品有限公司。

將甲醇、乙腈、二氯甲烷按照體積比1∶1∶1配成混合溶劑。

1.2 色譜條件[8]

色譜柱為 Kromasil C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm i.d.大連化學(xué)物理研究所)；流動(dòng)相為甲醇；流速為1.0 mL/min；柱溫30 ℃；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm；進(jìn)樣量為10 μL。

1.3 供試液的制備

干香菇粉碎，過(guò)40目篩，作為樣品。精確稱(chēng)取2 g置于錐形瓶中，加入正己烷40 mL浸泡4 h，超聲提取10 min，氣浴恒溫振蕩器震蕩30 min后，過(guò)濾，重復(fù)提取3次?；厥杖軇瑲?jiān)没旌先軇┤芙夂蠖ㄈ?，作為供試液?/p>

1.4 對(duì)照品溶液的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱(chēng)取維生素E對(duì)照品40.2 mg于10 mL容量瓶中，用混合溶劑溶解并定容，作為維生素E儲(chǔ)備液。精密移取0.1、0.4、0.7、1.0、1.2、1.4 mL儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，加入溶劑并定容。按照步驟1.2色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在4.02～56.28 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為A=179546c+380.22，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9983。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品色譜圖

見(jiàn)圖1、2。

圖1 維生素E對(duì)照品色譜圖

圖2 樣品色譜圖

2.2 樣品測(cè)定結(jié)果

步驟1.3制備的供試液經(jīng)HPLC測(cè)定，樣品中維生素E的含量為0.0495 mg/g。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

對(duì)儀器精密度進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定濃度為40.20 μg/mL的對(duì)照品溶液，重復(fù)6次，測(cè)定結(jié)果計(jì)算RSD，見(jiàn)表1。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)

由表1可知，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.508%，說(shuō)明精密度良好。

2.4 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱(chēng)取香菇2 g三份，分別加入一定量的維生素E對(duì)照品，按照步驟1.3制備供試品溶液，HPLC測(cè)定其含量，計(jì)算實(shí)驗(yàn)回收率，結(jié)果如表2所示。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)

由表2可知，實(shí)驗(yàn)回收率在96.66%～102.8%范圍內(nèi)，平均回收率為98.88%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)回收率較高。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將制備的樣品供試液，每小時(shí)進(jìn)樣一次，連續(xù)6 h，HPLC測(cè)定維生素E的含量，結(jié)果如表3所示。

由表3可知，維生素E在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

3 討論

本文采用超聲輔助有機(jī)溶劑提取法對(duì)香菇中維生素E進(jìn)行提取，并建立了HPLC測(cè)定香菇中維生素E含量的方法。該方法結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)單，可用于香菇的質(zhì)量監(jiān)測(cè)，同時(shí)又可以對(duì)香菇的深加工提供一定的技術(shù)支持。