馬學(xué)艷，徐 良，聞海波，金 武，徐 跑1,,，華 丹，顧若波1,,*

(1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)部淡水魚類遺傳育種與養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214081；2. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院，江蘇 無錫 214081；3. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，中美淡水貝類種質(zhì)資源保護(hù)及利用國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214081)

【研究意義】紫黑翼蚌(Potamilusalatus)也稱紫踵劈蚌、翼溪蚌，屬大型淡水貝類，分布于美國南北的湖泊和河流，主要在美國密西西比河、五大湖、墨西哥灣等流域。Hua等[1]對(duì)紫黑翼蚌培育珍珠試驗(yàn)表明：紫黑翼蚌能夠成功培育紫黑色珍珠，且光滑細(xì)膩，極富光澤。中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心2012年從美國引進(jìn)了一批人工繁育的紫黑翼蚌苗種，進(jìn)行人工馴養(yǎng)技術(shù)研究。通過近幾年的人工馴養(yǎng)，紫黑翼蚌親本成活率達(dá)80 %，初步建立了紫黑翼蚌人工繁育基礎(chǔ)種群，為進(jìn)一步開展人工繁育提供了重要條件和保障?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】紫黑翼蚌在北美洲為常見淡水蚌類，且資源量比較穩(wěn)定，與其他瀕危蛘類相比，其人工繁育、基礎(chǔ)生物學(xué)相關(guān)研究較少，僅見紫黑翼蚌繁殖周期[2-3]、天然寄主魚、野生紫黑翼蚌的人工馴養(yǎng)和育珠性能的初步評(píng)估[1,4]。紫黑翼蚌鉤介幼蟲需寄生到寄主魚上才能變態(tài)發(fā)育稱稚蚌，淡水石首魚被認(rèn)為是紫黑翼蚌唯一的天然寄主魚[4-7]。由于我國缺乏淡水石首魚，極大地制約著我國紫黑翼蚌苗種的人工繁育。近年來，研究者利用體外培養(yǎng)技術(shù)已對(duì)42個(gè)物種培養(yǎng)成功且獲得較高的變態(tài)率[8]，在國內(nèi)，聞海波等[9]對(duì)三角帆蚌鉤介幼蟲進(jìn)行了體外培養(yǎng)試驗(yàn)，并已取得了一定的進(jìn)展，馬學(xué)艷等[10]改進(jìn)了體外培養(yǎng)配方，顯著提高了褶紋冠蚌變態(tài)率?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】本課題組利用體外培養(yǎng)技術(shù)成功培育出紫黑翼蚌稚蚌，并獲得較高變態(tài)率，但稚蚌成活率較低，如何提高紫黑翼蚌稚蚌的成活和生長是我國發(fā)展淡水紫黑珍珠養(yǎng)殖業(yè)的關(guān)鍵技術(shù)之一?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本實(shí)驗(yàn)選取體外培養(yǎng)的紫黑翼蚌稚蚌，探究餌料、底質(zhì)與養(yǎng)殖密度對(duì)紫黑翼蚌稚蚌成活與生長的影響，評(píng)估和篩選出紫黑翼蚌適宜的餌料、底質(zhì)和養(yǎng)殖密度，從而提高紫黑翼蚌稚蚌成活率和生長速度，本研究結(jié)果將對(duì)紫黑翼蚌的苗種規(guī)?；庇哂兄匾笇?dǎo)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用紫黑翼蚌稚蚌是通過體外培養(yǎng)技術(shù)培育同一母蚌鉤介幼蟲所得的稚蚌，實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)在中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心實(shí)驗(yàn)室，根據(jù)張家康等[11]實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)養(yǎng)殖餌料選為微擬球藻(Nannochloropsisoculata)，其中藻1(機(jī)械破壁藻)購買于美國Reed Mariculture Inc，藻2(未破壁藻)購買于煙臺(tái)海融微藻養(yǎng)殖有限公司，2種藻均為濃縮藻液；實(shí)驗(yàn)所用底質(zhì)為黃泥和塘泥，黃泥為未施肥的花園土，塘泥取自池塘中淺水表層泥。使用前，分別取200 mL放入5 L水中，攪勻，過200目篩網(wǎng)備用。使用時(shí)攪拌均勻添加。實(shí)驗(yàn)用自動(dòng)養(yǎng)殖系統(tǒng)養(yǎng)殖稚蚌，養(yǎng)殖用池塘水經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，水溫控制在(24±1)℃，氣泵分管懸吊于養(yǎng)殖箱上方進(jìn)行增氧。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 餌料和底質(zhì)對(duì)稚蚌成活和生長的影響 取殼長(1.113±0.034)mm、殼高(0.640±0.038)mm的紫黑翼蚌稚蚌，設(shè)置A1、A2、A3 3個(gè)處理組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只稚蚌。將稚蚌分別放在養(yǎng)殖箱(45 cm×32 cm×16 cm)中培育，養(yǎng)殖水體為13 L，養(yǎng)殖箱置于循環(huán)保溫系統(tǒng)中，水溫控制在(24±1)℃，在養(yǎng)殖箱排水孔處安裝200目篩網(wǎng)，確保稚蚌在換水時(shí)不丟失。循環(huán)系統(tǒng)每天上午換水1次，換水后投喂藻類并添加底質(zhì)，其中A1組(塘泥、藻1)、A2組(黃泥、藻1)、A3組(塘泥、不投喂)，參考華丹等[12]實(shí)驗(yàn)結(jié)果，A1、A2組藻類投喂密度為2×105cells/mL。養(yǎng)殖30 d后，將稚蚌洗出放于培養(yǎng)皿中并在光學(xué)顯微鏡(Olympus CX41)下拍照、測量稚蚌殼長和殼高(0.001 mm)，統(tǒng)計(jì)成活率。計(jì)算殼長、殼高日生長率的公式。

殼長日生長率=(終末殼長-初始?xì)らL)/生長天數(shù)×100 %

殼高日生長率=(終末殼高-初始?xì)じ?/生長天數(shù)×100 %

1.2.2 2種不同處理微擬球藻對(duì)稚蚌成活和生長的影響 取殼長(2.230±0.041)mm、殼高(1.236±0.037)mm的紫黑翼蚌稚蚌，設(shè)置B1、B2兩個(gè)處理組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只稚蚌。其中B1組投喂藻1，B2組投喂藻2，兩組投喂密度為2×105cells/mL，以黃泥為底質(zhì)。養(yǎng)殖方式同1.2.1所述。養(yǎng)殖30 d后，將稚蚌洗出并在光學(xué)顯微鏡(Olympus CX41)下拍照、測量稚蚌殼長和殼高(0.001 mm)，統(tǒng)計(jì)稚蚌成活率，計(jì)算殼長、殼高日生長率，計(jì)算方法同1.2.1。

1.2.3 不同養(yǎng)殖密度對(duì)稚蚌成活和生長的影響 取殼長(4.245±0.152)mm，殼高(2.368±0.054)mm紫黑翼蚌稚蚌，設(shè)置C1、C2、C3 3個(gè)處理組，養(yǎng)殖密度分別為150、300、450只，每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

表1 藻類投喂和底質(zhì)對(duì)紫黑翼蚌稚蚌成活和生長的影響

注：同列中標(biāo)有不同小寫字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05),標(biāo)有相同小寫字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05)。下同。

Note: The means with different letters within the same column are significant differences at the 0.05 probability level, and the means with the same letters within the same column are not significant differences, the same as below.

以黃泥為底質(zhì)，藻1作為餌料，投喂密度為2×105cells/mL。養(yǎng)殖方式參照1.2.1。具體養(yǎng)殖30 d后，統(tǒng)計(jì)稚蚌成活率，測量殼長、殼高，計(jì)算日生長率，計(jì)算方法同1.2.1。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。采用One-way ANOVA 單因素方差分析法。在Excel 2007繪制相關(guān)圖表。

2 結(jié)果與分析

2.1 餌料和底質(zhì)對(duì)稚蚌成活和生長的影響

如表1所示：以池塘底泥為底質(zhì)，投喂組(A1)的成活率最高，為96.67 %±1.92 %，以池塘底泥為底質(zhì)，不投喂藻類餌料組(A3)的成活率最低，為86.67 %±1.93 %；以黃泥為底質(zhì)，投喂組(A2)的殼長和殼高的日生長率最高，分別為9.588 %±0.587 %和9.041 %±0.552 %；單因素方差分析表明：A1、A2、A3組的成活率無顯著性差異(P> 0.05)；A1、A2組殼長、殼高(殼長、殼高日生長率)顯著高于A3組(P< 0.05)；A1、A2組殼長、殼高(殼長、殼高日生長率)無顯著性差異(P> 0.05)。

2.2 2種不同處理微擬球藻對(duì)稚蚌成活和生長的影響

如表2所示：B1組成活率為100.00 %，B2組為98.90 %±1.10 %。單因素方差分析表明： B1和B2組的成活率無顯著性差異(P> 0.05)；B1、B2組的殼長、殼高、日生長率無顯著性差異(P> 0.05)。

2.3 不同養(yǎng)殖密度對(duì)稚蚌成活和生長的影響

如表3所示：C1、C2、C3組成活率都為100 %。C1組的殼長日生長率最高，為19.107 %±0.429 %；C3組的殼長日生長率最低，為14.942 %±0.170 %；C2組的殼高日生長率最高，為10.410 %±0.303 %；C3組的殼高日生長率最低，為8.693 %±0.161 %。單因素方差分析表明：C1、C2、C3組的成活率無顯著性差異(P> 0.05)；C1與C2組的殼長、殼高、日生長率無顯著性差異(P> 0.05)，顯著高于C3組(P> 0.05)。

3 討 論

3.1 底質(zhì)對(duì)貝類成活和生長的影響

底質(zhì)在底棲貝類成活和生長過程中扮演著十分重要的角色，合適的底質(zhì)往往會(huì)給貝類提供一個(gè)優(yōu)良的生長環(huán)境。許章程等[13]在研究棲息底質(zhì)對(duì)縊蟶(Sinonovaculaconstrict)稚貝生長和成活的影響中，選用了粉砂+泥、粉砂、砂、無泥砂、泥質(zhì)砂、泥、砂質(zhì)泥7種底質(zhì)做試驗(yàn)，其結(jié)果表明了不同底質(zhì)對(duì)縊蟶稚貝生長和成活有影響；華丹等[12]探究了底泥、細(xì)沙、石灰石及無底質(zhì)條件下對(duì)Villosairis稚蚌的成活及生長影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)底泥更適合作為V.iris稚蚌的底質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)比較了黃泥和塘泥對(duì)紫黑翼蚌稚蚌成活與生長的影響，結(jié)果顯示以黃泥和塘泥為底質(zhì)對(duì)紫黑翼蚌稚蚌的成活及生長發(fā)育無顯著影響，筆者推測：不同蚌類對(duì)底質(zhì)具有選擇性，底質(zhì)主要的作用是為稚蚌的生長提供良好的生長環(huán)境，減少敵害生物的影響，從而有利于稚蚌的成活和生長。

表2 不同來源微擬球類對(duì)紫黑翼蚌稚蚌成活和生長的影響

表3 不同養(yǎng)殖密度對(duì)紫黑翼蚌稚蚌成活和生長的影響

3.2 藻類對(duì)貝類成活和生長的影響

國內(nèi)外有不少學(xué)者對(duì)蚌科物種進(jìn)行過食性分析，藻類被認(rèn)為是稚蚌不可或缺的食物。Tantichodok等[14]認(rèn)為淡水蚌類的餌料一般是由藻類、浮游動(dòng)物、細(xì)菌以及底泥等組成；Meghann等[15]對(duì)北美帽蚌(Epioblasmacapsaeformis)的食性研究發(fā)現(xiàn)藻類占其食物組成的90 %左右；張家康等[11]對(duì)三角帆蚌稚蚌的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)表明：在微擬球藻、小球藻、卵囊藻、四尾柵藻四種藻中，微擬球藻養(yǎng)殖效果最好，投喂餌料比不投喂餌料組成活率高、生長快，本實(shí)驗(yàn)采用微擬球藻對(duì)紫黑翼蚌稚蚌進(jìn)行養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，投喂組殼長殼高顯著大于不投喂組，表明在紫黑翼蚌稚蚌的培育過程中使用微擬球藻對(duì)其生長有顯著的促進(jìn)作用。

微擬球藻屬于褐藻門，大眼藻綱，單珠藻科，其富含不飽和脂肪酸(特別是EPA)是很好的水產(chǎn)餌料，有助于魚蝦等水產(chǎn)品的生長。微擬球藻的細(xì)胞壁有兩層，內(nèi)層是纖維類組成，外層由藻膠組成。細(xì)胞壁內(nèi)還含有褐藻糖膠為碳水化合物，它能使褐藻形成粘液質(zhì)，使外面的藻體免于干燥。在實(shí)驗(yàn)中B1、B2組中使用了藻1和藻2兩種不同處理方式的微擬球藻，結(jié)果表明兩組的殼長、殼高無顯著性差異，筆者推測微擬球藻的細(xì)胞壁不影響紫黑翼蚌稚蚌對(duì)該藻類的消化和吸收，在紫黑翼蚌的人工培育過程中，可使用國內(nèi)生產(chǎn)的微擬球藻投喂稚蚌，提高稚蚌成活率和生長率，降低餌料成本。

3.3 養(yǎng)殖密度對(duì)水產(chǎn)苗種成活和生長的影響

在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，養(yǎng)殖密度對(duì)水產(chǎn)品的成活和生長有著顯著影響，是實(shí)際生產(chǎn)中最為重要養(yǎng)殖技術(shù)參數(shù)之一。何毛賢等[16]對(duì)馬氏珠母貝選育的稚貝群體生長存活發(fā)現(xiàn)高密度組(200只/籠)的生長較低密度組(30、40、50只/籠)慢，認(rèn)為籠養(yǎng)密度過大會(huì)引起水流流速減緩導(dǎo)致水流不通暢，以及餌料爭奪等問題，從而影響貝體的生長存活；蕭云樸等[17]對(duì)蝦夷扇貝不同養(yǎng)殖密度實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示隨養(yǎng)殖密度的提高，殼高、體質(zhì)量等參數(shù)不斷下降，養(yǎng)殖密度對(duì)其影響顯著；本實(shí)驗(yàn)比較了不同的養(yǎng)殖密度下對(duì)紫黑翼蚌稚蚌的成活和生長的影響，結(jié)果顯示：C1、C2組無顯著性差異，C3組的殼長、殼高顯著低于C1、C2組，推測在實(shí)驗(yàn)水體13L中，適宜的養(yǎng)殖密度為300只左右，密度升高，稚蚌生長緩慢的原因，可能是：①養(yǎng)殖密度增大，稚蚌攝食的餌料較少;②隨著放養(yǎng)密度的增加，水體氨氮濃度、亞硝酸鹽濃度顯著升高，溶解氧濃度則隨幼蟲密度的增大呈現(xiàn)下降的趨勢，養(yǎng)殖密度會(huì)影響水質(zhì)從而影響幼蟲的存活和生長，具體原因有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來證實(shí)。