呂曉艷，肖賀欣，王 言，朱長吉，王 瑩

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林長春 130021)

感染性疾病是兒童發(fā)病率最高的一類疾病，其中以呼吸系統(tǒng)感染性疾病發(fā)病率最高，占兒科門診總數(shù)60%以上，肺炎患兒占兒科住院患者的60%居首位，嚴(yán)重威脅兒童健康[1]。兒童呼吸道感染性疾病主要由細(xì)菌、病毒或支原體等病原體入侵呼吸道引起，其發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后均與患兒機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。由流式細(xì)胞術(shù)檢測的淋巴細(xì)胞亞群分析已廣泛應(yīng)用于臨床，在免疫功能評估方面起到不可或缺的作用。淋巴細(xì)胞亞群是機(jī)體免疫防御體系中的重要組成部分，可反映機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫水平，其變化與感染性疾病類型和程度有關(guān)[2-3]。因此淋巴細(xì)胞亞群的檢測對判斷患兒病情、指導(dǎo)臨床治療以及判斷預(yù)后等方面都有極為重要的意義。本研究回顧性調(diào)查了兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化，并探討了CD4+/ CD8+T細(xì)胞比值(T4/T8)在兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病中的輔助診斷價值，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取吉林大學(xué)第二醫(yī)院2018年1-10月兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病患者121例作為感染組，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)結(jié)合臨床癥狀以及影像學(xué)、病原體分離、血常規(guī)、血清學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行分析，符合 《兒科學(xué)》[4]上呼吸道感染、支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)研究前兩周內(nèi)未使用任何免疫調(diào)節(jié)藥物;(3)病歷資料完善，診斷明確。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)自身免疫疾病或免疫缺陷病;(2)合并其他部位感染；(3)心肝腎功能嚴(yán)重異常;(4)過敏性體質(zhì)和家族史;(5)嚴(yán)重營養(yǎng)不良患兒。年齡范圍為0～13歲，平均年齡5.8歲，其中男68例、女53例，包括上呼吸道感染36例，支氣管炎33例，毛細(xì)支氣管炎14例，肺炎38例。再選擇同期健康體檢兒童19例作為對照組，其中男9例、女10例，平均年齡5.2歲。比較感染組與對照組患兒年齡、性別等一般資料，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究屬于回顧性研究，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，符合醫(yī)學(xué)倫理要求。

1.2儀器與試劑

1.2.1淋巴細(xì)胞亞群分析 采用美國貝克曼公司 CytoFLEX 流式細(xì)胞儀?？贵w為美國貝克曼公司四色鼠抗人單克隆流式抗體(CD45/CD4/CD8/CD3和CD45/CD19/CD56/CD3)。溶血素、鞘液、清洗液均采用貝克曼公司原裝配套試劑。

1.2.2WBC計(jì)數(shù) 采用Sysmex公司的 XN-2000全血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測WBC絕對計(jì)數(shù)。試劑均采用Sysmex原裝配套試劑。質(zhì)量控制采用常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控方法。

1.2.3C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測 采用免疫散射比濁法檢測CRP水平，所用儀器和試劑為美國貝克曼公司Immage800全自動分析儀及原廠配套試劑。質(zhì)量控制采用常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控方法。

1.3方法 回顧性觀察和記錄納入的呼吸系統(tǒng)感染性疾病患兒、體檢健康兒童一般資料及血常規(guī)、CRP、細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定、病原菌分布狀況和淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果。淋巴細(xì)胞亞群的檢測：清晨抽取研究對象2 mL外周血置于肝素抗凝真空管中，要求在48 h內(nèi)進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群檢測。取流式上樣管，分別向試管中加入抗體10 μL，再加入肝素抗凝血100 μL，避光孵育20 min后加入溶血劑500 μL，孵育20 min后加溶血劑10 min，離心、洗滌、定容后立即上機(jī)，流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群檢測，4 h內(nèi)檢測完畢。

2 結(jié)果

2.1兒童常見呼吸系統(tǒng)感染性疾病外周血淋巴細(xì)胞亞群的比較 與對照組比較，感染組總 T 細(xì)胞(CD3+)百分比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)； CD4+T細(xì)胞 (CD3+CD4+)、T4 /T8、NK 細(xì) 胞(CD3-CD16+CD56+)百分比降低，CD8+T細(xì)胞百分比(CD3+CD8+)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與對照組比較，感染組B 細(xì)胞(CD3-CD19+)百分比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。根據(jù)臨床診斷結(jié)果將感染組分為4組：上呼吸道感染組，支氣管炎組，毛細(xì)支氣管炎組、肺炎組。與對照組比較，毛細(xì)支氣管炎組、肺炎組CD3+T細(xì)胞百分比增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而上呼吸道感染組及支氣管炎組CD3+T細(xì)胞百分比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4個疾病組與對照組比較，CD4+T細(xì)胞均有不同程度的降低，而CD8+T細(xì)胞百分比均增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺炎組B細(xì)胞百分比高于對照組(P<0.05)，其余3個疾病組與對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。NK細(xì)胞百分比在支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、及肺炎組均明顯降低。見表1。

表1 兒童呼吸道感染性疾病各組外周血淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果(%)

注：與對照組比較，*P<0.05；與上呼吸道感染組比較，#P<0.05；與支氣管炎組比較，△P<0.05；與毛細(xì)支氣管炎組比較，&P<0.05

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.2CRP、WBC與T4/T8比值3項(xiàng)指標(biāo)的水平比較及ROC曲線分析 與對照組相比，兒童呼吸系統(tǒng)感染組CRP、WBC值明顯增高，T4/T8比值顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。繪制3項(xiàng)指標(biāo)用于兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病的ROC曲線， CRP、WBC、T4/T8比值曲線下面積分別為0.754、0.759、0.696，當(dāng)CRP的cut-off值為2.20 mg/L時，靈敏度、特異度分別為74.8,55.6；當(dāng)WBC的cut-off值為6.85×109/L時，靈敏度、特異度分別為66.5%、61.1%；當(dāng)T4/T8的cut-off值為1.47時，靈敏度、特異度分別為77.8%,51.6%。見圖2、表3。

表2 CRP、WBC、T4/T8比值3項(xiàng)指標(biāo)檢測水平的比較

注：與對照組比較，*P<0.05

圖3 3項(xiàng)指標(biāo)用于兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病的ROC曲線

表3 CRP、WBC、T4/T8比值診斷兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病ROC曲線參數(shù)

3 討論

感染性疾病是兒童發(fā)病率最高的一類疾病，往往具有起病較急、發(fā)展快、病情重等特點(diǎn)，是導(dǎo)致兒童死亡的主要原因之一，其中以呼吸道感染性疾病發(fā)病率最高。幼兒由于其呼吸道系統(tǒng)解剖生理特點(diǎn)以及機(jī)體免疫特點(diǎn),極易發(fā)生呼吸系統(tǒng)感染性疾病。因此，加強(qiáng)兒童呼吸道感染性疾病研究是很有必要的。感染性疾病是各種病原體感染引起的，宿主免疫功能是影響患兒疾病發(fā)生、病情發(fā)展以及預(yù)后的重要因素。外周血淋巴細(xì)胞亞群的測定可以實(shí)時反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)，從而幫助臨床判斷感染類型以及全面、早期地評估患兒病情，對提高臨床療效、改善預(yù)后尤為重要[5]。

人體的免疫系統(tǒng)主要承擔(dān)著免疫防護(hù)、免疫穩(wěn)定以及免疫監(jiān)視的作用，對外源性抗原物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等病原體的入侵，以及體內(nèi)出現(xiàn)的異常細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞、胞內(nèi)微生物感染細(xì)胞等，能及時產(chǎn)生免疫應(yīng)答予以殺滅，維護(hù)機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。人體免疫功能主要靠免疫細(xì)胞 T 細(xì)胞、 B 細(xì)胞以及自然殺傷NK細(xì)胞，以及免疫球蛋白等炎性介質(zhì)執(zhí)行[6-7]。其中T細(xì)胞是機(jī)體免疫應(yīng)答的重要參與者，執(zhí)行細(xì)胞免疫功能。CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞是T淋巴細(xì)胞中功能相異的兩個亞群，其中CD4+T細(xì)胞主要為輔助性T細(xì)胞(Th)，通過分泌細(xì)胞因子和表達(dá)膜分子發(fā)揮效應(yīng)功能，起著參與細(xì)胞免疫應(yīng)答，輔助B細(xì)胞產(chǎn)生調(diào)理性和中和性抗體的作用。CD8+T細(xì)胞主要為細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Tc)，通過釋放毒性蛋白和導(dǎo)致細(xì)胞凋亡殺傷靶細(xì)胞。二者形成T細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，通過細(xì)胞間的直接接觸或通過釋放細(xì)胞因子，導(dǎo)致或抑制免疫效應(yīng)，從而雙向調(diào)控機(jī)體獲得性免疫應(yīng)答。B淋巴細(xì)胞則能通過產(chǎn)生分泌各種免疫球蛋白和抗體，從而介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答[8]。NK細(xì)胞是機(jī)體抗感染、抗腫瘤的第一道防線，發(fā)揮介導(dǎo)病原體感染細(xì)胞的細(xì)胞毒作用[9-10]。

本研究檢測了121例常見嬰幼兒呼吸道感染性疾病淋巴細(xì)胞亞群變化情況，分析了各指標(biāo)與疾病的相關(guān)性，結(jié)果提示，與健康兒童相比，呼吸道感染組總T細(xì)胞百分比并沒有明顯改變,但CD4+T細(xì)胞百分比顯著降低，CD8+T細(xì)胞明顯增高，導(dǎo)致T4/T8比值顯著降低。B細(xì)胞比例略有升高，提示呼吸道感染組兒童普遍存在細(xì)胞免疫功能低下，體液免疫功能相對增強(qiáng)現(xiàn)象，個別感染嚴(yán)重患兒甚至出現(xiàn)免疫功能紊亂。上呼吸道感染、支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、肺炎組比較，以肺炎組改變尤為明顯，T4/T8水平降至0.9±0.4(P<0.01)，出現(xiàn)倒置現(xiàn)象，說明該組患兒細(xì)胞免疫功能低下尤為明顯，提示兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病細(xì)胞免疫功能紊亂程度與患兒病情嚴(yán)重程度有一定相關(guān)性。有報道亦提出總T細(xì)胞、T4細(xì)胞百分比、T4/T8、NK細(xì)胞百分比與下呼吸道感染性病情呈負(fù)相關(guān)，與T8細(xì)胞、B細(xì)胞百分比呈正相關(guān)[11]，這與本研究結(jié)果基本是一致的。

另外，與對照組比較，支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎及肺炎組NK細(xì)胞百分比顯著降低。NK細(xì)胞在機(jī)體發(fā)揮著非特異性固有免疫的功能，可不依賴抗體、補(bǔ)體和預(yù)先致敏作用即可快速殺傷靶細(xì)胞，并與單核細(xì)胞、粒細(xì)胞等協(xié)同起到抗感染作用[11]。該結(jié)果提示患兒機(jī)體固有免疫功能受到影響，病原體快速清除能力受到抑制，這可能和患兒易反復(fù)發(fā)生感染有關(guān)。因此監(jiān)測NK細(xì)胞水平有助于掌握患兒病情，指導(dǎo)臨床治療。

本研究還探討了T4/T8比值在兒科呼吸系統(tǒng)感染性疾病的診斷效率和價值。目前兒童傳統(tǒng)呼吸道感染性疾病采用WBC、CRP、降鈣素原等指標(biāo)來進(jìn)行粗略判斷[13-14]。更為準(zhǔn)確的血培養(yǎng)和病原學(xué)鑒定時間較長，不適合門診和急診患者。因此，探求新型、有臨床價值的檢測指標(biāo)是有必要的。在淋巴細(xì)胞亞群報告中，T4/T8比值是反映淋巴細(xì)胞功能強(qiáng)弱的一個較為簡單和明確的指標(biāo)。CD4+和CD8+T細(xì)胞在感染進(jìn)程中發(fā)揮著正、負(fù)調(diào)節(jié)作用，形成T細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，雙向調(diào)控免疫應(yīng)答。大多病原微生物感染不同程度上將引起。CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量上的降低，或者CD8+T細(xì)胞反應(yīng)性增高，二者均可導(dǎo)致T4/T8比值降低甚至倒置[15-18]。繪制T4/T8比值用于兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病的ROC曲線，并與臨床常用指標(biāo)CRP、WBC比較，考察其診斷價值。結(jié)果顯示，CRP、WBC、T4/T8比值曲線下面積分別為0.754、0.759、0.696，表明三者對兒童感染性疾病均有一定診斷價值。與CRP、WBC相比，T4/T8比值曲線下面積略低，但靈敏度較高，當(dāng)T4/T8的cut-off值為1.47時，靈敏度為77.8%，略高于WBC和CRP?；谏鲜鲅芯拷Y(jié)果可知，T4/T8指標(biāo)的檢測對兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病有良好的診斷價值。但由于本文并未對感染性疾病病原體進(jìn)行分類，針對于不同的感染類型，T4/T8比值的診斷效率有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

4 結(jié)論

兒童呼吸系統(tǒng)感染性疾病患者普遍存在免疫功能受損現(xiàn)象，天然免疫受到抑制，而特異性免疫調(diào)節(jié)功能下降，甚至紊亂。加強(qiáng)淋巴細(xì)胞亞群檢測有助于判斷病情，指導(dǎo)臨床治療以及評估預(yù)后。針對于免疫功能較低，反復(fù)發(fā)生感染的患兒，適當(dāng)進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)治療，對患兒病情的康復(fù)，提高治療效果可能有一定的價值。另外，血清T4/T8比值是一個有較高臨床應(yīng)用價值的指標(biāo)，可與CRP水平及WBC聯(lián)合檢測，作為診斷兒童感染性疾病的臨床常規(guī)檢查指標(biāo)。