吳福群 陰常欣 鄧紹團(tuán) 牛詩瓊 余建華 姚達(dá)娜

[摘要] 目的 探討急性髓系白血病患者血清可溶性程序性死亡因子配體-1（sPD-L1）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)及相關(guān)性。 方法 選擇2015年1月～2018年1月廣東省東莞康華醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的89例急性髓系白血病患者為研究對象，納入觀察組，另選取我院同期進(jìn)行健康體檢的健康受試者50名為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測兩組受試者的sPD-L1、VEGF水平，并進(jìn)行組間比較。對觀察組患者進(jìn)行2個月標(biāo)準(zhǔn)化治療，根據(jù)療效判斷標(biāo)準(zhǔn)將患者分為完全緩解（CR）組36例、部分緩解（PR）組40例和未緩解（PD）組13例，對三組患者的sPD-L1、VEGF水平進(jìn)行檢測比較，并對sPD-L1與VEGF的相關(guān)性進(jìn)行分析探討。 結(jié)果 治療前，觀察組患者sPD-L1、VEGF水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。觀察組經(jīng)治療后，CR組和PR組患者sPD-L1、VEGF水平均顯著低于PD組，且CR組患者sPD-L1、VEGF水平低于PR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。經(jīng)Pearson相關(guān)性檢驗分析，患者治療前、治療后血清sPD-L1與VEGF均呈顯著的正相關(guān)性（r = 0.447、0.327，均P < 0.05）。 結(jié)論 急性髓系白血病患者sPD-L1、VEGF呈現(xiàn)高表達(dá)，隨著預(yù)后效果的好轉(zhuǎn)，其表達(dá)水平不斷降低。因此，sPD-L1、VEGF水平的檢測對于急性髓系白血病的診治和預(yù)后評估有一定輔助作用和臨床價值。

[關(guān)鍵詞] 急性髓系白血病;可溶性程序性死亡因子配體-1;血管內(nèi)皮生長因子;相關(guān)性

[中圖分類號] R773.71? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）07（b）-0076-05

Expression and correlation of serum sPD-L1 and VEGF in patients with acute myeloid leukemia

WU Fuqun1，2? ?YIN Changxin3? ?DENG Shaotuan2? ?NIU Shiqiong2? ?YU Jianhua1? ?YAO Da′na1

1.Department of Hematology， Dongguan Kanghua Hospital， Guangdong Province， Dongguan? ?523080， China; 2.Department of Laboratory， the Seventh Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University， Guangdong Province， Shenzhen? ?518107， China; 3.Department of Hematology， Nanfang Hospital of Southern Medical University， Guangdong Province， Guangzhou? ?510515， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and correlation of serum soluble programmed death ligand 1 （sPD-L1） and vascular endothelial growth factor （VEGF） of patients with acute myeloid leukemia. Methods Eighty-nine patients with acute myeloid leukemia admitted to Dongguan Kanghua Hospital （“our hospital” for short） from January 2015 to January 2018 were selected as research objects and enrolled into observation group， and 50 healthy subjects who underwent health examination in our hospital during the same period were selected as the control group. The sPD-L1 and VEGF levels of the two groups were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and compared between the two groups. The patients in the observation group were treated with standardized therapy for 2 months， according to the criteria of curative effect， the patients were divided into complete remission （CR） group （36 cases）， partial remission （PR） group （40 cases） and proceed （PD） group （13 cases）， and the levels of sPD-L1 and VEGF in the three groups were detected and compared. The correlation between sPD-L1 and VEGF was also analyzed. Results Before treatment， the levels of sPD-L1 and VEGF in the observation group were significantly higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P < 0.05）. After treatment， the levels of sPD-L1 and VEGF in CR group and PR group were significantly lower than those in PD group， and the levels of sPD-L1 and VEGF in CR group were lower than those in PR group， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Pearson correlation test showed that sPD-L1 was positively correlated with VEGF （r = 0.447， 0.327， all P < 0.05）. Conclusion The expression of sPD-L1 and VEGF in acute myeloid leukemia patients is high， and the levels of sPD-L1 and VEGF are decreased with the improvement of prognosis. Therefore， the detection of sPD-L1 and VEGF has certain assistant effects and clinical value for the diagnosis， treatment and prognosis evaluation of acute myeloid leukemia patients.

[Key words] Acute myeloid leukemia; Soluble programmed death ligand 1; Vascular endothelial growth factor; Correlation

白血病是一類惡性血液系統(tǒng)疾病，是由于患者造血干細(xì)胞的惡性增殖、分化障礙、凋亡受阻，而使惡性增殖的造血干細(xì)胞在骨髓和其他造血組織中大量聚集，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)移侵入其他非造血組織及旁系器官，并嚴(yán)重危及患者的生命[1]。急性髓系白血病是眾多白血病分型中的一種，該類白血病主要以髓系造血干細(xì)胞惡性增殖為主，以骨髓與外周血中原始和幼稚髓性細(xì)胞異常增生為主要特征?；颊甙l(fā)病后臨床表現(xiàn)為貧血、自發(fā)性出血、感染、代謝異常、器官衰竭直至危及患者生命。近年來流行病學(xué)調(diào)查顯示，該病的發(fā)病率約占白血病的30%，且嬰幼兒童也是該病的高發(fā)人群，其惡性程度相比于其他白血病更高，表現(xiàn)為患者5年生存率低于其他白血病患者[2-3]。當(dāng)前，該病的治療難度仍然艱巨，研究人員對其關(guān)注度逐漸提高，對其發(fā)生機(jī)制的研究也在不斷深入。多數(shù)報道顯示，急性髓系白血病發(fā)病與機(jī)體內(nèi)的血管再生能力、相關(guān)細(xì)胞的凋亡能力有密切關(guān)系[4]。血清可溶性程序性死亡因子配體-1（soluble programmed death ligand 1，sPD-L1）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）則是具有代表性的能夠調(diào)控機(jī)體血管再生、細(xì)胞凋亡的生物蛋白標(biāo)志物，其水平值的改變能夠反映機(jī)體新生血管、細(xì)胞凋亡能力[5-6]。為此，本研究對急性髓系白血病患者的血清sPD-L1、VEGF進(jìn)行檢測分析，探討sPD-L1、VEGF在患者體內(nèi)的表達(dá)情況，以期為急性髓系白血病患者發(fā)病機(jī)制的研究提供幫助，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年1月～2018年1月廣東省東莞康華醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的89例急性髓系白血病患者為研究對象，納入觀察組，其中男48例，女41例;年齡10～69歲，平均（45.37±13.89）歲;FAB分型：M1型18例，M2型23例，M3型20例，M4型10例，M5型18例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合《急性髓系白血病治療的專家共識（第一部分）》[7]中關(guān)于急性髓系白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)檢查確診為急性髓系白血病患者;②患者簽署知情同意書，研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①確診為其他類型的白血病患者;②妊娠或哺乳期婦女，精神狀態(tài)異?；颊?③并發(fā)全身性疾病、惡性腫瘤疾病患者;④患者入組前已接受相關(guān)藥物治療者。另選取同期在我院進(jìn)行健康體檢的健康受試者50名為對照組，其中男28名，女22名;年齡15～72歲，平均（47.68±15.31）歲。兩組受試者性別、年齡等基礎(chǔ)資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法

兩組受試者在入院時采集空腹靜脈血約5 mL，加入到含有抗凝劑的抗凝管中，采用TG12M型高速離心機(jī)（鹽城市凱特實驗儀器有限公司）進(jìn)行離心，3000 r/min，離心10 min（離心半徑13.5 cm），分離得到血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對每位受試者的血清sPD-L1、VEGF水平進(jìn)行檢測，相關(guān)ELISA診斷試劑盒購置于北京博爾邁生物技術(shù)有限公司（生產(chǎn)批號：20141126），操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。觀察組患者在經(jīng)過2個療程的標(biāo)準(zhǔn)化治療后，采集患者的空腹靜脈血，按上述同樣操作方法檢測患者血清中sPD-L1、VEGF水平。

1.3 觀察指標(biāo)與療效判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 對觀察組和對照組入院時sPD-L1、VEGF檢測的水平值進(jìn)行統(tǒng)計對比。

1.3.2 觀察組患者經(jīng)急性髓系白血病標(biāo)準(zhǔn)化治療后，評價患者的治療效果，按療效將患者分為完全緩解（CR）組36例、部分緩解（PR）組40例和未緩解（PD）組13例。

1.3.3 臨床療效判斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。①CR組，患者骨髓象：原粒細(xì)胞Ⅰ型+Ⅱ型（原單+幼單或原淋+幼淋）≤5%，紅細(xì)胞及巨核細(xì)胞正常。血象：血紅蛋白>100 g/L，血小板>100×109/L，中性粒>1.5×109/L，外周血分類中無白血病細(xì)胞。臨床表現(xiàn)：無白血病浸潤所致的癥狀和體征，生活正?；蚪咏！＂赑R組，患者原幼稚細(xì)胞在5%～20%之間;或臨床表現(xiàn)、血象2項中有一項未達(dá)上述標(biāo)準(zhǔn)者。③PD組，患者骨髓象、血象及臨床表現(xiàn)3項均未達(dá)上述標(biāo)準(zhǔn)者。

1.3.4 對CR、PR、PD三組患者的sPD-L1、VEGF水平進(jìn)行統(tǒng)計比較。采用Pearson檢驗對患者的外周血sPD-L1與VEGF水平間的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。計量資料符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用成組t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗。此外，采用Pearson相關(guān)檢驗進(jìn)行指標(biāo)間的相關(guān)性分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組治療前各項指標(biāo)水平比較

治療前，觀察組患者sPD-L1、VEGF水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 觀察組治療后不同療效患者各項指標(biāo)水平比較

整體比較（單因素方差分析）知：各指標(biāo)整體差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。多重比較并結(jié)合主要數(shù)據(jù)分析：觀察組患者經(jīng)治療后，CR組和PR組患者的sPD-L1、VEGF水平均顯著低于PD組，且CR組患者sPD-L1、VEGF水平低于PR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

2.3 sPD-L1與VEGF相關(guān)性分析

將本研究89例急性髓系白血病患者的sPD-L1與VEGF資料，按治療前和治療后分別進(jìn)行Pearson相關(guān)檢驗，結(jié)果sPD-L1與VEGF均呈顯著的正相關(guān)性（r = 0.447、0.327，P = 0.000、0.002）。見圖1。

3 討論

急性髓系白血病相比于其他白血病危害程度更高，發(fā)病急促且病情進(jìn)展迅速，臨床治療的難度頗大，促使著研究人員對其進(jìn)行進(jìn)一步的深入研究，其發(fā)病機(jī)制也逐漸明朗化[9]。通過對一些生物標(biāo)志物和生物活性因子的檢測，初步發(fā)現(xiàn)急性髓系白血病患者體內(nèi)增殖的異常造血干細(xì)胞凋亡過程受阻，另外新生血管的不斷生成增加了造血干細(xì)胞養(yǎng)分的供給，為惡性造血干細(xì)胞的異常增生提供了便利條件，從而使得患者的造血功能被破壞[10-11]。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)在急性髓系白血病患者體內(nèi)的異常造血干細(xì)胞增殖及凋亡過程中有多種生物細(xì)胞因子參與[12]。其中sPD-L1能夠反映機(jī)體細(xì)胞凋亡狀態(tài)，VEGF則是經(jīng)典的評價患者新生血管形成的主要標(biāo)志物[13-14]。因此，對急性髓系白血病患者sPD-L1、VEGF水平的檢測分析，對于急性髓系白血病發(fā)病機(jī)制的研究及臨床疾病的診斷治療有重要的輔助作用。

本研究對急性髓系白血病患者與健康體檢者的sPD-L1、VEGF水平進(jìn)行檢測分析，結(jié)果顯示觀察組患者的sPD-L1、VEGF水平均顯著高于對照組，提示急性髓系白血病的發(fā)生可能與患者體內(nèi)血清sPD-L1、VEGF水平有關(guān)。在患者經(jīng)過2個療程的標(biāo)準(zhǔn)化治療后，CR組和PR組患者的sPD-L1、VEGF水平均顯著低于PD組，且CR組患者sPD-L1、VEGF水平低于PR組，提示患者sPD-L1、VEGF水平的改變與患者的預(yù)后效果顯著相關(guān)。隨著患者預(yù)后效果的好轉(zhuǎn)，sPD-L1、VEGF水平則依次降低。出現(xiàn)以上結(jié)果主要是因為，sPD-L1是一種跨膜轉(zhuǎn)運糖蛋白，廣泛存在于淋巴細(xì)胞等實體瘤細(xì)胞中[15-16]。sPD-L1在功能上與程序性細(xì)胞死亡受體（PD-L1）基本相似，其在機(jī)體內(nèi)水平的升高可以更多地與PD-1受體結(jié)合，抑制患者T細(xì)胞活化，導(dǎo)致機(jī)體正常的免疫系統(tǒng)受到抑制，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞及白血病患者惡性增殖的造血干細(xì)胞逃過免疫殺傷，細(xì)胞的凋亡過程受阻，進(jìn)一步導(dǎo)致急性髓系白血病患者的病情發(fā)生和加重[17-18]。VEGF是一種高效特異性促血管生成因子，又稱之為血管通透因子，通過酪氨酸激酶受體產(chǎn)生作用，促進(jìn)血管通透性增加、細(xì)胞外基質(zhì)變性、血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移增殖和血管形成[19-23]。VEGF水平的升高，可刺激白血病患者血液惡性腫瘤有絲分裂反應(yīng)加快，并促進(jìn)白血病惡性造血干細(xì)胞、祖細(xì)胞的自我更新，為異常增殖的惡性造血干細(xì)胞不斷地提供增殖所需的養(yǎng)分[24-25]，從而促進(jìn)急性髓系白血病病情的進(jìn)展。根據(jù)以上兩點研究的結(jié)果，推測急性髓系白血病患者可以采用PD-L1抑制劑和VEGF抑制劑進(jìn)行藥物治療，這為此類疾病的臨床治療提供新的思路。

在相關(guān)性分析中，急性髓系白血病患者治療前、后的sPD-L1與VEGF水平間呈明顯的正相關(guān)性，提示影響腫瘤等惡性細(xì)胞生長的內(nèi)部微環(huán)境（如sPD-L1）與惡性細(xì)胞增殖的外部環(huán)境（如VEGF）間密切相關(guān)，這是因為VEGF為白血病細(xì)胞的生存及發(fā)展提供了土壤，促進(jìn)其不斷分泌sPD-L1，而sPD-L1通過幫助白血病細(xì)胞逃避機(jī)體的抗腫瘤免疫，進(jìn)而促進(jìn)疾病的發(fā)展，故sPD-L1與VEGF間呈相輔相成的關(guān)系發(fā)展。此外本研究樣本含量較小，后續(xù)將收集更多的樣本進(jìn)行研究，以期明確上述各指標(biāo)在急性髓系白血病的診治和預(yù)后中的評估價值。

綜上所述，急性髓系白血病患者sPD-L1、VEGF呈現(xiàn)高表達(dá)，隨著預(yù)后效果的好轉(zhuǎn)，其表達(dá)水平不斷降低。因此，sPD-L1、VEGF水平的檢測對于急性髓系白血病的診治和預(yù)后評估有一定的輔助作用和臨床價值。

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