王煜恒 陳軍 洪玉定 巫愛軍 周廣帥 湯傳全

摘要：為研究全人工和仿生態(tài)兩種繁育模式對大鯢（Andrias davidiaus）繁殖效果的影響，對比了兩種繁殖模式下大鯢的產(chǎn)卵率、受精率和孵化率。結(jié)果表明，仿生態(tài)繁育模式中大鯢的產(chǎn)卵率、受精率和孵化率分別為75.00%、74.99%和86.08%，而全人工繁育模式分別為50.00%、63.94%和72.36%，前者均分別高于后者。因此，大鯢繁殖時可采取適當(dāng)人工干預(yù)的仿生態(tài)繁殖模式，有助于提高繁殖效率。

關(guān)鍵詞：中國大鯢（Andrias davidiaus）;全人工繁育;仿生態(tài)繁育;繁殖效果

中國大鯢（Andrias davidiaus）屬兩棲綱、有尾目、隱鰓鯢科（Cryptobranchidae）、大鯢屬（Andrias），俗稱娃娃魚[1]，現(xiàn)為國家二級野生保護動物，其肉質(zhì)鮮嫩、味道獨特，具有極高的經(jīng)濟、藥用和食用價值。大鯢在我國分布較廣，但由于生態(tài)環(huán)境的破壞，導(dǎo)致野生大鯢資源急劇下降，因此，通過開展大鯢人工繁殖來提高大鯢的種群數(shù)量，可以更好地保護大鯢野生資源[2]。目前，經(jīng)過多年的探索研究，大鯢已經(jīng)形成全人工繁殖與仿生態(tài)繁殖兩種主要繁殖模式，二者各有優(yōu)缺點。人工繁殖存在人工操作強度大、對親本有損傷且出苗率不高等缺點;仿生態(tài)繁殖存在短期較難見效，產(chǎn)卵率不高，占地面積大等缺點[3]。為了發(fā)揮仿生態(tài)繁殖模式的優(yōu)點，張濤等[4]探索了仿生態(tài)繁殖與人工干預(yù)相結(jié)合的繁殖方法，取得了較好的效果。然而有關(guān)兩種繁殖模式對大鯢繁殖效果的研究國內(nèi)外研究報道較少。本項目通過開展大鯢全人工和仿生態(tài)兩種模式的繁殖試驗，研究兩種模式對大鯢產(chǎn)卵率、受精率和孵化率的影響，旨在探索大鯢最佳的繁殖方式，為大鯢的科學(xué)繁育提供一定的參考。

1材料與方法

1.1試驗時間和地點

試驗時間為2017年11月至2018年11月，地點在江蘇省句容市句容龍泉大鯢繁殖中心養(yǎng)殖基地，該基地建于山區(qū)內(nèi)一廢舊礦洞，洞內(nèi)有地下泉水涌出，水質(zhì)極佳，全年水量充足，泉水常年保持水溫在20 ℃左右。

1.2繁殖池建造

1.2.1人工繁殖池建造人工繁殖池建在山洞內(nèi)，依據(jù)山洞地勢建造養(yǎng)殖池，規(guī)格為1.5 m×1 m×0.7 m，池底和四周均為水泥抹面，池底由四周向中央傾斜，傾斜度為1.5%左右，池中間設(shè)地漏，地漏下連接管徑2.5 cm的排水管至池外，出水口再設(shè)置一連通管，該管可調(diào)節(jié)角度和高度來實現(xiàn)排污和控制水位，排出水統(tǒng)一經(jīng)排水總管流入凈化池。池上方設(shè)進水管，可全天使池內(nèi)呈微流水。

1.2.2仿生態(tài)繁殖池建造仿生態(tài)繁殖池建在山洞外，從泉水口直接引管道通向洞外作為水源，然后從出水口構(gòu)筑2條人工渠道，順渠道水流方向在兩側(cè)修建人工洞穴，洞穴為圓形，直徑120 cm，高度60 cm，洞口24 cm×33 cm;洞內(nèi)鋪設(shè)鵝卵石，向洞口呈一定斜坡;養(yǎng)殖池水位保持在30～35 cm，控制洞穴頂部有25 cm露出水面。洞穴上方有圓形蓋板，蓋板上設(shè)直徑30 cm的觀察口，洞穴蓋板覆蓋泥土10 cm，水渠內(nèi)種植水草，整個養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)廣種綠植，并在夏季設(shè)置雙層遮陽網(wǎng)，確保養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)的水溫在適宜范圍內(nèi)。全天保持微流水。進排水口和陸上通道口都要安裝防逃設(shè)施。

1.3種鯢的投放

種鯢來源于2部分，一部分是本繁殖中心內(nèi)經(jīng)過多年養(yǎng)殖已達性成熟的大鯢，另一部分是從陜西漢中等地購入優(yōu)質(zhì)的種鯢。種鯢要求體質(zhì)強健，無病無傷，活力好，體重勻稱，雄鯢比雌鯢個體略大。雌雄比例為1∶1.5，即兩種模式各選擇雌鯢8尾，雄鯢12尾，體重6.5～10.5 kg。人工繁殖親本在山洞內(nèi)原池培育，兩尾同性別大鯢置于一池。仿生態(tài)繁育大鯢統(tǒng)一在11月份投放，一洞穴一鯢，每個洞穴口用鐵柵欄封住洞口，防止大鯢進入其他洞穴相互打斗，水流可自由出入。

1.4日常管理

1.4.1餌料投喂全人工繁育和仿生態(tài)繁育兩種模式中種鯢培育池均投喂鮮活鯽魚，投喂前用3%～5%的食鹽水浸泡消毒，密度為3～5尾/m2，發(fā)現(xiàn)不足時及時補充，死魚及時撈出。仿生態(tài)繁殖模式下，大鯢產(chǎn)卵期間停止投喂，產(chǎn)卵結(jié)束后補投鯽魚。

1.4.2水質(zhì)管理種鯢培育期間保持水質(zhì)清新，控制水位高過體背5～10 cm即可，期間保持一定的微流水，流速控制在0.1～0.3 m/s。進入七月份以后，可加大水流，有條件的地方可營造出流水聲，可促進種鯢的性腺發(fā)育。兩種繁殖模式由于所處場地不同，水溫有較大差異，全人工繁育模式由于在山洞內(nèi)開展，繁殖池水溫常年與泉水溫度接近，保持在20～23 ℃;仿生態(tài)繁育模式由于建在室外，繁殖池水溫受水源水溫和室外天氣的影響，一年之中波動較大，1～3月份水溫逐漸降低，2月份平均水溫低至9.3 ℃，7～9月份水溫逐漸升高，8月份可高至26.5 ℃。當(dāng)水溫低于10 ℃或者高于25 ℃時，大鯢的攝食基本停止，因此認(rèn)為此時大鯢處于休眠狀態(tài)，本試驗仿生態(tài)繁育模式中2月份大鯢出現(xiàn)冬眠，8月份出現(xiàn)了短暫的夏眠。兩種模式下一年之中水溫變化見圖1。

1.4.3日常管理及時清除殘餌和糞便，定期清池，尤其是仿生態(tài)池洞穴內(nèi)水流交換稍差，需及時用水管沖洗清池，同時用藥物消毒以預(yù)防病害，5～10月每3 d清洗一次，11月～翌年4月每7 d清洗一次。

進入7月份后，仿生態(tài)池的柵欄移除，以便雌雄種鯢相互配對，此階段要防止大鯢相互打斗咬傷，尤其是夜間活動較多，發(fā)現(xiàn)打斗及時分開，一旦有咬傷較嚴(yán)重的種鯢，撈起單養(yǎng)療傷，并用慶大霉素按劑量5 mg/kg肌注防止感染。經(jīng)過1個月左右的相互適應(yīng)，種鯢之間基本平靜，其自行配對完成。

1.5產(chǎn)卵與孵化

1.5.1成熟度鑒定本基地內(nèi)種鯢往年均在9月上旬開始發(fā)情產(chǎn)卵?；诖耍敬卧囼炄斯し庇Ｊ教崆皟芍茏笥议_始觀察種鯢的性腺發(fā)育情況，而仿生態(tài)繁殖模式中當(dāng)發(fā)現(xiàn)到種鯢有沖水、推沙、求偶等行為時開始成熟度度鑒定。雄鯢發(fā)育成熟的標(biāo)志為：第二性征明顯，擠壓生殖孔，有乳白色的精液流出。雌鯢的特征：腹部膨大、松軟，用手觸摸有黃豆顆粒般凹凸感，生殖孔紅潤。

1.5.2人工催產(chǎn)全人工繁育需要進行人工催產(chǎn)，催產(chǎn)激素采用絨毛膜促性腺激素（HCG）和促黃體生成素釋放素類似物（LRH-A2）組合使用，注射激素水溶液的量以0.5～1 mL/kg計算，采用一次性腹腔注射，在背肋與腹腔交界處進針，以突破肌肉刺入腹腔為宜。雌魚催產(chǎn)劑量為：促黃體生成素釋放素類似物（LRH-A2）10 μg/ kg +絨毛膜促性腺激素（HCG）2 000 IU/kg;雄魚注射劑量減半。仿生態(tài)繁育模式首先采取雌雄種鯢自由交配，無需藥物催產(chǎn)，待到繁殖后期，對于還未交配產(chǎn)卵的種鯢則進行人工催產(chǎn)，劑量同全人工繁育模式。

1.5.3產(chǎn)卵和受精全人工繁育的大鯢在注射催產(chǎn)劑4～9 d內(nèi)產(chǎn)卵（排精），以4～5 d內(nèi)產(chǎn)的卵質(zhì)量為好。待雌鯢在池中產(chǎn)出卵膠膜后，立即將其捉起，用布蒙上雌鯢的眼睛并輕輕放入布架內(nèi)，設(shè)法穩(wěn)住親鯢，隨后另一人緩緩拉出卵帶放入臉盆內(nèi)，每100～200 粒截斷一次。當(dāng)盆中有一定的卵帶后，迅速輕壓雄鯢腹部擠取精液，略加3～5 mL生理鹽水稀釋后與卵帶混合，加入過程中輕搖臉盆使精卵充分結(jié)合。靜置10 min，用清水清洗3遍后，加入少許清水，靜置1 h，再用清水漂洗兩次即完成人工授精。

仿生態(tài)繁育模式下培育的種鯢在9月初，部分雌鯢腹部膨大。雌鯢在即將產(chǎn)卵時到雄鯢洞中，經(jīng)過1～2 h完成產(chǎn)卵，雄鯢同步授精。產(chǎn)后雄鯢將雌鯢咬出洞外便開始守洞護卵孵化，孵化過程中雄鯢有較強的攻擊性，因此需將柵欄封住洞口以防其他種鯢進入。

本試驗中，仿生態(tài)繁育模式中能夠自然配對產(chǎn)卵的雌鯢僅3尾，因此，當(dāng)?shù)谝晃泊砌F產(chǎn)卵10 d左右，就要對未產(chǎn)卵雌鯢進行人工干預(yù)，否則，未產(chǎn)卵的雌鯢很有可能當(dāng)年不產(chǎn)卵。人工干預(yù)采用注射催產(chǎn)激素方法，劑量同全人工繁育。效應(yīng)時間4 d后，剩余5尾雌鯢中的3尾開始到催產(chǎn)雄鯢洞中產(chǎn)卵，雄鯢同樣授精并守洞護卵孵化。

1.5.4孵化全人工繁育的大鯢受精卵采用人工孵化方法。孵化池使用2 m×2 m×0.5 m 的池子，經(jīng)100 mg/L的高錳酸鉀溶液浸泡消毒12 h，隨后沖洗干凈進水30 cm左右。將受精卵分置孵化盆內(nèi)，每盆裝200～250粒（孵化盆直徑35 cm的鏤空塑料筐，四周綁定浮球固定使得孵化框漂浮于水面）。本試驗條件下，經(jīng)過33～36 d的孵化后稚鯢出膜，部分脫膜困難的稚鯢可人工撕破卵膜。孵化期間每隔3～4 h攪動受精卵，以防局部缺氧。發(fā)現(xiàn)有死卵及時挑出，防止霉菌感染正常卵胚。孵化過程中保持優(yōu)良水質(zhì)（水質(zhì)指標(biāo)見表1），嚴(yán)格控制水溫、光照，同時保持微流水環(huán)境以補充水體溶氧，后期適當(dāng)加大水流。

仿生態(tài)繁育采取自然與人工相結(jié)合的孵化方式。當(dāng)發(fā)現(xiàn)親鯢完成自然產(chǎn)卵受精后，雌鯢離開后雄鯢會守護受精卵。此時在洞口用柵欄隔離防止其他大鯢進去。孵化期間，雄鯢會對受精卵進行照顧，需每天投喂2～3尾冰塊處理后活力稍弱的鯽魚。每天觀察發(fā)育情況，發(fā)現(xiàn)有少量稚鯢出膜后，為了方便后期的稚鯢統(tǒng)一培育管理，需將受精卵轉(zhuǎn)移至室內(nèi)孵化。

1.6結(jié)果計算

產(chǎn)卵率=產(chǎn)卵數(shù)/雌鯢親本數(shù)量×100%;

受精率=受精的大鯢卵/產(chǎn)卵量×100%;

孵化率=出苗數(shù)/受精的大鯢卵×100%。

2結(jié)果與分析

2.1不同繁殖模式對大鯢產(chǎn)卵率的影響

由表2可知，不同繁殖模式對大鯢的產(chǎn)卵率有較大影響，本試驗條件下全人工繁殖模式中8尾雌鯢僅4尾催產(chǎn)后成功產(chǎn)卵，產(chǎn)卵率為50%左右。仿生態(tài)繁育中的8尾雌鯢中僅3尾成熟度較好，能自由交配產(chǎn)卵，其余5尾未產(chǎn)卵主要是由于雄鯢成熟度不夠，經(jīng)催產(chǎn)后又有3尾成功配對產(chǎn)卵，所以綜合產(chǎn)卵率為75%。仿生態(tài)繁育中雄鯢的性腺成熟度較差，12尾雄鯢中僅3尾個體較大的自然發(fā)育成熟，其余9尾僅有2尾基本達到注射催產(chǎn)劑的要求，另一尾還是從室內(nèi)調(diào)出。另外，兩種孵化模式中，經(jīng)過一年的生長，仿生態(tài)繁育池的種鯢體重要低于全人工繁育模式。

2.2不同繁殖模式對大鯢受精率和孵化率的影響

兩種繁殖模式下受精率和孵化率有較大差異，全人工繁育中4尾雌鯢共產(chǎn)卵5 652粒，平均每尾雌鯢產(chǎn)卵1 413粒，受精卵的數(shù)量尾3 614粒，受精率則是63.94%，最后孵出的稚鯢數(shù)2 615尾，孵化率為72.36%。仿生態(tài)繁育中則有6尾雌鯢產(chǎn)卵，共產(chǎn)卵7 578粒，平均每尾雌鯢產(chǎn)卵1 263粒，這要低于全人工繁育中大鯢產(chǎn)卵平均數(shù)，可能與雌鯢的大小有關(guān);該模式中受精卵共5 683粒，受精率為74.99%，比全人工繁育模式要高11.05%;共孵出稚鯢4 892尾，孵化率為86.08%，高于全人工繁育模式13.72%。見表3。

3討論

通過試驗可以發(fā)現(xiàn)，仿生態(tài)繁育模式中能完全自然配對繁殖的僅3對，分析認(rèn)為全自然環(huán)境條件下，雄鯢的性腺發(fā)育要滯后于雌鯢，造成了自然配對的困難，為了提高產(chǎn)卵率，必須對仿生態(tài)模式下種鯢進行人工催產(chǎn)干預(yù)，提高雄鯢的成熟度以便配對成功。有條件的繁殖場，可配置冷熱水井，雄鯢培育池單獨設(shè)置在一條溝渠中，開春之后人為提高雄鯢培育水溫1～2 ℃，從而促進其性腺發(fā)育，以便使雌雄種鯢發(fā)育同步。相比于全人工繁育，仿生態(tài)模式對種鯢和受精卵的傷害要小，關(guān)鍵是受精率大大提高。朱林等[5]認(rèn)為深度冬眠一個月時間，有利于大鯢下丘腦-腦垂體-性腺之間的互動，促進卵母細胞的萌動發(fā)育。本試驗仿生態(tài)繁育模式下，種鯢經(jīng)歷了一年四季的溫差變化，尤其是2月份的低溫促使其冬眠，促進了性腺發(fā)育，因此受精率高于一直保持恒溫的室內(nèi)人工繁育模式。仿生態(tài)繁育模式下受精卵孵化率也高于全人工繁育模式，孵化率的高低除了受孵化管理水平的影響外，還與精卵質(zhì)量以及受精率密切相關(guān)，相比于全人工繁育模式，仿生態(tài)繁育模式的精卵質(zhì)量和受精率均有大幅提高，加之有雄鯢全天候的照料，因此孵化率有較大提高。

綜合比較，仿生態(tài)繁育模式下大鯢的產(chǎn)卵率、受精率和孵化率均要高于傳統(tǒng)的全人工繁育模式。因此，有條件的繁殖場可根據(jù)實際情況開展大鯢的仿生態(tài)繁殖，實施之前必須做好以下幾點：首先要挑選好優(yōu)質(zhì)的親本，以前繁育過的大鯢相對效果要優(yōu)于初次性成熟的大鯢;其次，關(guān)注雌鯢質(zhì)量的同時還要培育好雄鯢，通過升溫等措施加快雄鯢性腺發(fā)育使得雌雄性腺同步成熟，雌雄的比例調(diào)整為1∶1.5～2，增加雄鯢的競爭壓力讓更強健的個體參與配對;最后，仿生態(tài)繁殖過程中，不能全靠大鯢的自然交配產(chǎn)卵和孵化，必須適當(dāng)進行人工干預(yù)如人工催產(chǎn)和人為輔助孵化等才能獲得更高的產(chǎn)卵率、受精率和孵化率。

參考文獻：

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[5] 朱林，曾仁甫.環(huán)境因素對大鯢性腺成熟度的影響[J].漁業(yè)致富指南，2017（13）：35-36.