郭永麗，張 君，張加勇，鐘映梅，蘇 景，王 新，孫 剛

（1.黑龍江省動物疫病預(yù)防與控制中心，黑龍江哈爾濱 150030；2.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)分院，黑龍江齊齊哈爾 161000）

炭疽是由炭疽芽孢桿菌引起的一種急性、熱性、敗血性人獸共患傳染病，牛、羊等食草動物對其最易感。炭疽散布流行于世界各地，尤以南美洲、亞洲及非洲等區(qū)域的牧區(qū)較多見，呈地方性流行，為一種自然疫源性疾病[1]。炭疽芽孢桿菌能夠在極端生存條件下形成芽孢，從而長期存活于自然環(huán)境中。易感動物通常在牧場食草時攝入土壤中的炭疽芽孢而感染，或通過喂食污染飼料而感染[2-3]，因此炭疽全球性存在，且難以根除。2019 年7 月21 日，黑龍江省動物疫病預(yù)防與控制中心接到佳木斯市獸醫(yī)部門報告，同江市某養(yǎng)殖戶肉牛發(fā)生疑似炭疽疫情。黑龍江省動物疫病預(yù)防與控制中心立即派出專家組趕赴現(xiàn)地進(jìn)行調(diào)查核實，指導(dǎo)疫情處置并開展了緊急流行病學(xué)調(diào)查。

1 方法

1.1 病例定義

根據(jù)《炭疽防治技術(shù)規(guī)范》[1]規(guī)定，該病潛伏期為20 d。為擴大病例搜索范圍，本次調(diào)查病例定義為：2019 年5 月10 日至2019 年8 月10 日，江心島上突發(fā)不明原因死亡的動物。

1.2 調(diào)查方式

1.2.1 問卷調(diào)查與訪談 調(diào)查組于2019 年7 月21 日介入調(diào)查，赴現(xiàn)場開展入戶訪談，了解發(fā)病過程，收集養(yǎng)殖戶地理信息、易感動物存欄情況，查看同群動物健康狀況；與當(dāng)?shù)卮瀚F醫(yī)技術(shù)人員交流，了解當(dāng)?shù)靥烤伊餍惺芳耙卟》揽叵嚓P(guān)信息；組織人員對周邊養(yǎng)殖戶進(jìn)行排查，搜索病例[4]。

1.2.2 實驗室檢測 從查扣的養(yǎng)殖戶剖解后的牛肉中采集樣品，同時采集江心島上一死亡牛的耳組織樣品，按照《可感染人類高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》進(jìn)行保存運輸，送實驗室進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢和熒光定量PCR檢測。按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《炭疽防治技術(shù)規(guī)范》中的生物安全要求，對樣品表面進(jìn)行消毒后，采集內(nèi)部肉組織塊做涂片2 張，隨后進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。采用哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的柱式DNA 核酸提取試劑盒（生產(chǎn)批號為PDNA-TQ20190314P）制備樣品模板，使用洛陽萊普生信息科技有限公司生產(chǎn)的炭疽桿菌實時熒光PCR 檢測試劑盒（生產(chǎn)批號為CP19072601）進(jìn)行熒光定量PCR 檢測。按照試劑盒說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

1.2.3 統(tǒng)計分析 使用Office Excel 2010 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)匯總，使用Google Earth 軟件繪制地圖。同時，結(jié)合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《獸醫(yī)公報》中的全國炭疽疫情數(shù)據(jù)和佳木斯歷史天氣數(shù)據(jù)，對疫情進(jìn)行溯源分析，查找疫情來源。

2 結(jié)果

2.1 基本信息

2.1.1 養(yǎng)殖情況 2019 年5 月初開始，同江市養(yǎng)殖戶李某和曾某在疫點牧場共飼養(yǎng)肉牛67 頭。7月16 日，從放牧場擺渡60 頭牛（李某46 頭、曾某14 頭）運到同江市出售。李某因未找到買家于7 月19 日將45 頭牛從同江市運回至牧場（途中死亡1 頭）。7 月21 日，經(jīng)現(xiàn)場核實，牧場現(xiàn)有活牛45 頭。

2.1.2 飼養(yǎng)管理情況 發(fā)生疫情牛群放牧場位于同江市松花江西側(cè)，為江心島，歸綏濱縣管轄，由承包人楊某轉(zhuǎn)包給同江市李某和曾某共同使用，以放牧養(yǎng)殖為主（圖1）。養(yǎng)殖戶數(shù)年自繁自養(yǎng)，無外購牛，未發(fā)生過非正常死?，F(xiàn)象。

圖1 疫點牛飼養(yǎng)管理情況

2.1.3 免疫情況 該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的肉牛于2019 年春季重大疫病防控期間，免疫接種了口蹄疫O 型滅活苗，5 月份以后未接種過任何疫苗，7 月初牛只出現(xiàn)陸續(xù)死亡，7 月底進(jìn)行了炭疽疫苗緊急接種。

2.2 臨床表現(xiàn)

據(jù)相關(guān)人講述和現(xiàn)場臨床檢查，病死牛均不同程度地出現(xiàn)發(fā)病急、死亡快、腹部膨脹、天然孔出血、尸體僵硬等癥狀（圖2）。

2.3 實驗室檢測

革蘭氏染色后，在油鏡下可看到少量單獨、成對或呈短鏈條排列的，典型竹節(jié)狀的革蘭氏陽性長桿菌，符合炭疽桿菌的鏡檢特征。

熒光定量PCR 檢測結(jié)果顯示，采集的牛肉和牛耳樣品及陽性對照均出現(xiàn)陽性擴增曲線，而陰性對照組未出現(xiàn)（圖3）。

圖2 發(fā)病死亡牛臨床表現(xiàn)

圖3 熒光定量PCR 檢測結(jié)果

2.4 三間分布

2.4.1 時間分布 調(diào)查得知，李某家2019 年7 月5 日出現(xiàn)1 頭死牛，由李某等人在牧場就地分解出售，部分內(nèi)臟就地掩埋；12—16 日死亡2 頭，由李某等人分解出售，內(nèi)臟廢棄在牧場；16—19 日運回同江市途中死亡1 頭，死亡牛已核實并處理；21 日在放牧場牛舍旁死亡1 頭。曾某家共計死亡牛4 頭，均為16—19 日運回同江市途中死亡，其中2 頭被分解銷售，1 頭被掩埋、1 頭被販賣（圖4）。

2.4.2 空間分布 疫點所在放牧地屬綏濱縣轄區(qū)，為松花江江心島，四面環(huán)江，具有天然屏障優(yōu)勢，水草豐盛，適于放牧養(yǎng)殖。疫點所在地有2戶養(yǎng)殖戶，共存欄67 頭牛。沿江上游的樺川縣新城鎮(zhèn)沿河村對岸江心島有2016 年樺川縣炭疽疫情掩埋地（圖5）。

2.4.3 群間分布 該疫點放牧地的2 戶養(yǎng)殖戶僅飼養(yǎng)牛，共存欄67 頭，未發(fā)現(xiàn)其他飼養(yǎng)場及飼養(yǎng)其他動物。發(fā)病死亡的9 頭牛中，李某家死亡5 頭，曾某家死亡4 頭，其余牛均未發(fā)現(xiàn)異常。

2.5 疫情處理

疫情確診后，根據(jù)《炭疽防治技術(shù)規(guī)范》[1]，對死亡牛進(jìn)行了無害化處理，對疫點內(nèi)圍欄、場所以及用具等進(jìn)行了嚴(yán)格徹底消毒，對疫區(qū)畜舍等可能污染的場所進(jìn)行了消毒，對所有與病死牛及產(chǎn)品接觸過的人進(jìn)行了強制體檢，排查了炭疽感染情況。在江心島疫點實行禁牧，設(shè)立警示標(biāo)識。對全市牲畜開展炭疽排查和入戶宣傳，對整個地區(qū)的易感動物進(jìn)行炭疽疫苗緊急免疫接種。45 頭臨床健康牛統(tǒng)一被隔離至岸邊李某家牛舍，全天監(jiān)控，定期消毒。因30 d 內(nèi)無任何異常且通過了風(fēng)險評估，最終解除了隔離。

圖4 牛炭疽死亡病例發(fā)生時間分布曲線

圖5 疫點空間分布

2.6 疫情溯源

此次炭疽疫點位于佳木斯市綏濱縣轄區(qū)內(nèi)的江心島。島內(nèi)養(yǎng)殖戶數(shù)年自繁自養(yǎng)，無外購牛，未發(fā)生過非正常死牛現(xiàn)象。往返江心島的船只為李某家所有，首發(fā)病例發(fā)生前，未運輸任何帶有疑似污染源的物品，且同江市未發(fā)現(xiàn)其他炭疽感染死亡事件。炭疽的流行具有明顯的季節(jié)性（圖6），溫度較高和雨水充沛的季節(jié)易暴發(fā)該病。松花江上游佳木斯市樺川縣新城鎮(zhèn)沿河村對岸江心島草場2016年曾發(fā)生過炭疽疫情，畜主曾私自將病死牛掩埋在放牧地所在江心島河岸處（圖5）。依據(jù)當(dāng)?shù)靥鞖馇闆r，2019 年6—8 月該區(qū)域降水量較大（圖7）。初步分析該起疫情可能為雨水沖刷了上游炭疽病死牛掩埋點，導(dǎo)致土壤和環(huán)境中的炭疽芽孢外露并被帶入江中，從而污染了此次疫情所在江心島的部分放牧草場，進(jìn)而感染牛致其死亡。

圖6 2014—2017 年全國各月份炭疽疫情暴發(fā)次數(shù)

圖7 2018 年9 月—2019 年8 月佳木斯市不同月份天氣情況

3 討論

炭疽屬于急性、烈性人獸共患傳染病，對其正確認(rèn)知、及時上報和正確處置能夠有效阻止其向人間傳播，具有極其重要的公共衛(wèi)生意義。牛屬于炭疽易感動物，如發(fā)生疫情應(yīng)立即上報，封鎖疫區(qū)，對尸體焚燒后深埋，對污染場所和用具進(jìn)行徹底消毒[1]。炭疽潛伏期一般為1～3 d，有的可達(dá)14 d；《炭疽防治技術(shù)規(guī)范》規(guī)定，該病潛伏期為20 d[1]。本次疫情首發(fā)病例出現(xiàn)在7 月5 日。畜主李某對本病缺乏認(rèn)知，為減少財產(chǎn)損失，對死亡牛進(jìn)行了就地剖解并售賣，也未對污染的場地、用具進(jìn)行消毒，從而導(dǎo)致疫情在該島牛群中擴散。7 月中旬，島上的牛陸續(xù)死亡，并再次被剖解售賣。此時，畜主將剩余的牛轉(zhuǎn)移至河岸陸地進(jìn)行治療和出售，但并未找到買家，便再次將牛運回江心島。疫情發(fā)生后，畜主未及時報告疫情，并將病死牛分解銷售，因而造成了一定的疫情傳播風(fēng)險。但經(jīng)流行病學(xué)追蹤調(diào)查和采樣監(jiān)測，未發(fā)現(xiàn)異常。此外，由于疫點位于江心島，地理位置和環(huán)境相對孤立，因而阻止了疫情的進(jìn)一步擴散。

此次疫情發(fā)生地歸綏濱縣管轄。但該島由綏濱縣林業(yè)草原局承包給二九O 農(nóng)場的楊某，其又轉(zhuǎn)租給同江市李某和鄭某共同放牧。發(fā)生牛死亡后，綏濱縣和二九O 農(nóng)場均未收到任何疫情報告。本次疫情的首發(fā)病例發(fā)病時間為7 月5 日，故最可能的感染時間應(yīng)在6 月14 日—7 月4 日。而此時該地區(qū)正處于汛期，降雨量比歷史同期多5～9成，這可能導(dǎo)致炭疽掩埋地的炭疽芽孢被雨水帶入江中進(jìn)而污染牧草，因此以放牧飼養(yǎng)牛群感染為主。此次疫情也說明，養(yǎng)殖戶文化素質(zhì)偏低，炭疽防控意識淡薄，對其危害認(rèn)知不足，為減少財產(chǎn)損失將病死家畜隨意宰殺剝皮、加工販賣，是導(dǎo)致病原擴散的主要原因。疫情發(fā)生后，各地加大了動物防疫知識宣傳力度，以此提高居民的防范意識，要求農(nóng)戶嚴(yán)禁對死亡牲畜擅自剝皮分割，須立即報告，待確診后按規(guī)定進(jìn)行無害化處理，同時組織各地對炭疽易感動物進(jìn)行緊急免疫接種。

4 結(jié)論

結(jié)合臨床癥狀、實驗室檢測和流行病學(xué)調(diào)查，認(rèn)定此次疫情由炭疽桿菌引起，推測感染源來自疫點上游河岸的原炭疽掩埋地。感染途徑很可能是，因汛期雨水較大，將炭疽掩埋地的炭疽桿菌芽孢沖刷入江內(nèi)，從而污染了江心島的牧草，導(dǎo)致放牧牛感染死亡。建議當(dāng)?shù)丶哟髮︷B(yǎng)殖場（戶）的宣傳教育力度，提高其對炭疽的認(rèn)知水平，增強其防范意識；要求養(yǎng)殖場（戶）發(fā)現(xiàn)病死牛時，及時上報，嚴(yán)禁隨意解剖與移動；一旦確診感染炭疽，要嚴(yán)格按要求實施隔離，對尸體進(jìn)行焚燒掩埋，對污染的工具和場所進(jìn)行徹底消毒，對周邊易感動物進(jìn)行緊急免疫接種；定期消毒，做好畜群和人群防護。