呂 莉 王 元 顏澤清 婁紅軍

透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid，HA)是由D-葡糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖構(gòu)成的雙糖單位連接而成的高分子黏性多糖，是構(gòu)成機體內(nèi)關(guān)節(jié)軟骨及滑液的主要成分，它在機體關(guān)節(jié)內(nèi)能起到保護軟骨以及合成滑膜內(nèi)HA的作用。1934年美國的Meyer等首先從牛眼玻璃體中分離出該物質(zhì)。相關(guān)研究表明，HA具有獨特的皮膚保濕、營養(yǎng)、抗衰老、抗菌消炎、促進傷口愈合、改善關(guān)節(jié)功能及藥物載體等功能。相比于傳統(tǒng)的關(guān)節(jié)內(nèi)注射透明質(zhì)酸治愈關(guān)節(jié)炎，口服透明質(zhì)酸在改變傳統(tǒng)給藥方式的同時，還能通過不同的途徑發(fā)揮作用功效。商品用HA多以其鈉鹽形式存在，即透明質(zhì)酸鈉（Sodium Hyaluronate）。目前，口服透明質(zhì)酸鈉功效的研究僅僅涉及到改善軟骨病癥狀、緩解關(guān)節(jié)炎的病痛等方面。本試驗主要通過飼喂含有一定比例的透明質(zhì)酸鈉犬糧后，研究觀察其對于改善犬髖關(guān)節(jié)發(fā)育的效果及預(yù)后。

據(jù)有關(guān)報道，犬類關(guān)節(jié)炎損害程度與其關(guān)節(jié)軟骨中所含透明質(zhì)酸呈強烈負(fù)相關(guān)（r＝-0.696，p＜0.001），因而派生出一種臨床治療關(guān)節(jié)炎的方法，直接在關(guān)節(jié)腔中注射透明質(zhì)酸，也取得了良好的效果。然而，注射級別的HA對無菌、蛋白等指標(biāo)要求嚴(yán)格，成本高昂，手術(shù)操作對醫(yī)生要求較高。國外也有許多報道，在動物飼料中添加HA，也取得了良好的效果。本實驗比較在飼料中添加氨基葡萄糖、軟骨素和透明質(zhì)酸鈉的幾種方式，研究其治療犬類關(guān)節(jié)炎的效果。

一、材料與方法

（一）試驗材料

試驗用犬糧由南京警犬研究所科技開發(fā)中心動物食品廠特制。其中，基礎(chǔ)犬糧中不含有葡萄糖胺、軟骨素及透明質(zhì)酸鈉。

本實驗用透明質(zhì)酸鈉由華熙生物科技股份有限公司提供的貝熙TM飼料添加劑 透明質(zhì)酸鈉。各組犬用日糧營養(yǎng)成份見表1：

表1：實驗用日糧營養(yǎng)成份表

（二）試驗犬

在退役老年德國牧羊犬中，選取臨床上具有典型髖骨關(guān)節(jié)炎癥狀的30頭犬進行試驗；外觀癥狀主要表現(xiàn)為后肢行走異常、關(guān)節(jié)有壓痛等；X線觀察主要表現(xiàn)有關(guān)節(jié)間隙增寬、承壓關(guān)節(jié)面不平整等情況。將這30頭犬隨機分成5組，每組6頭犬，采用Lequesne 指數(shù)進行關(guān)節(jié)評分后，進行個別調(diào)整，降低組間評分差異。各組Lequesne評分情況如表2：

表2：實驗初各組Lequesne評分均數(shù)表

經(jīng)過方差分析，各組間Lequesne評分均數(shù)不存在顯著性差異（＞ 0.05）。

（三）試驗犬管理

所有試驗犬按統(tǒng)一采用封閉式飼養(yǎng)管理，集中飼養(yǎng)，一犬一舍，定量喂食（按體重的2%計算飼喂量每天，約0.6kg），喂食對應(yīng)：基礎(chǔ)犬糧組喂食1組，葡萄糖胺+軟骨素組喂食2組，0.03%HA組喂食3組，0.09%HA組喂食4組，葡萄糖胺+軟骨素+HA組喂食5組。

每天早晚各飼喂一次，試驗中注意觀察各組犬的食欲，保證飲水，每天定時打掃犬舍衛(wèi)生，每周給犬體進行一次體表梳理和清潔，每月進行一次驅(qū)蟲處理。除試驗測試外，不安排犬舍外運動。試驗觀測時間為24周。

（四）測試方法與評定標(biāo)準(zhǔn)

實驗24周后，觀察記錄實驗犬的關(guān)節(jié)表現(xiàn)及關(guān)節(jié)指數(shù)，觀察記錄疼痛或不適、晨僵、關(guān)節(jié)腫脹、步行痛等。

本試驗采用國際骨關(guān)節(jié)的評分標(biāo)準(zhǔn)Lequesne 指數(shù)：

1.關(guān)節(jié)休息痛:正常行0分;輕度疼痛主1分;疼痛較重計2分;疼痛嚴(yán)重計3分。

2.活動痛:正常計0分;上下樓有癥狀計1分;上下樓疼痛計2分;行走時疼痛計3分。

3.壓痛：正常計0分;重壓時疼痛計1分；中度壓痛計2分；輕度壓痛計3分。

4.腫脹：正常計0分;稍腫計1分；軟組織腫脹計2分；腫脹嚴(yán)重計3分。

5.晨僵：正常計0分;僵硬但很快恢復(fù)（小于5分鐘）計1分；僵硬但短時間恢復(fù)（5～10分鐘）計2分；僵硬但較長時間恢復(fù)（10分鐘以上）計3分。

6.行走能力：行走沒有限制計0分；步態(tài)行走異常計1分；步態(tài)行走異常緩慢計2分；步態(tài)嚴(yán)重緩慢計3分；

7.均分小于0.5，表示輕度功能障礙；均分處于0.5～1.33之間，表示中度功能障礙；處于1.33～2.33之間，表示重度功能障礙；大于2.33分以上表示功能障礙極其嚴(yán)重。

（五）統(tǒng)計分析

實驗數(shù)據(jù)采用Excel方差分析，比較其P-value。差異判斷標(biāo)準(zhǔn)為：P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

二、結(jié)果

試驗24周后，Lequesne指數(shù)各項評分與分別與實驗初相比，其休息痛、活動痛、壓痛、腫脹、晨僵、行走能力等各項指標(biāo)均有變化。各組實驗犬的Lequesne指數(shù)平均數(shù)的變化情況如下圖1所示：

圖1 犬關(guān)節(jié)炎Leguesne評分變化

其中，實驗2組與1組間不存在顯著性差異（P＞0.05），說明在實驗期間，添加0.5%的葡萄糖胺和0.2%的軟骨素組，對犬的關(guān)節(jié)炎沒有明顯的改善作用。實驗3組與1組間存在顯著性差異（P＜0.05），說明在實驗期間，添加0.03%的透明質(zhì)酸，對犬的關(guān)節(jié)炎具有明顯的改善作用。實驗4組與1組間、實驗5組與1組間存在極顯著性差異（P＜0.01），說明在實驗期間，添加0.09%的透明質(zhì)酸鈉，或者添加0.25%的葡萄糖胺、0.1%的軟骨素、0.03%透明質(zhì)酸鈉組合，對實驗犬關(guān)節(jié)炎具有明顯的改善作用。具體方差比較數(shù)據(jù)見表3：

表3：實驗?zāi)└鹘M與第1組間的Lequesne值方差比較情況

第1組實驗犬的Lequesne評分值，實驗?zāi)ň?.64）與實驗初（均值1.44）相比，有所上升，但經(jīng)過方差分析，二者差異不顯著。表明實驗犬的關(guān)節(jié)炎狀態(tài)經(jīng)過24周的發(fā)展，雖有加重趨勢，但其差異不具備統(tǒng)計學(xué)意義。其方差比較情況見表4：

表4：第1組實驗初與實驗?zāi)㎜equesne值方差比較

經(jīng)過方差分析，實驗?zāi)┑?組與第2組間存在顯著差異；說明在實驗期間內(nèi)，相比較添加葡萄糖胺和軟骨素，添加0.03%的HA對犬關(guān)節(jié)炎具有明顯的改善作用。第4組與第2組間、第5組與第2組間存在極顯著差異；說明在實驗期間內(nèi)，相比較添加葡萄糖胺和軟骨素，添加0.09%的HA或者添加葡萄糖胺+軟骨素+HA組合，對犬關(guān)節(jié)炎具有極其明顯的改善作用。其具體P值如表5：

表5：其它各組間Lequesne值方差比較情況

三、分析與討論

透明質(zhì)酸為關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)及滑液的主要成分，在關(guān)節(jié)腔內(nèi)對修復(fù)細(xì)胞提供網(wǎng)狀支持和營養(yǎng)環(huán)境、活化細(xì)胞表面特殊膜受體，并具有潤滑、緩沖應(yīng)力等作用。近幾年，透明質(zhì)酸鈉常用于治療骨關(guān)節(jié)炎，其治愈功能備受關(guān)注，在臨床中的應(yīng)用越來越多。目前，對于關(guān)節(jié)炎而言，常常通過注射外源性的HA，或口服含HA的營養(yǎng)物，能夠補充關(guān)節(jié)滑液中消耗的HA，并促進修復(fù)磨損的軟骨膜層，改善受損的關(guān)節(jié)；另外HA在關(guān)節(jié)內(nèi)具有清除自由基功能，調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬作用及白細(xì)胞趨化性，從而抑制炎癥反應(yīng)，阻止關(guān)節(jié)軟骨退化。

通常，在許多先期的處方犬糧中，輔助治療關(guān)節(jié)炎的營養(yǎng)添加物就是葡萄糖胺和軟骨素，在本實驗中，沒有明顯的效果，并非否定它們對修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的作用，在本實驗中沒有藥物介入，葡萄糖胺和軟骨素的輔助治療作用難以單獨發(fā)揮。在許多HA治療犬的關(guān)節(jié)炎的報道，有的是犬保健品，有的是添加在犬糧中，其組方一般葡萄糖胺+軟骨素+透明質(zhì)酸鈉組合，其中透明質(zhì)酸的添加量很少，主要是與其成本較高有關(guān)。本實驗設(shè)5組，其中有3組分別添加了0.03%、0.09%和0.03%（另加葡萄糖胺和軟骨素），相對劑量比較大，在沒有其它藥物干預(yù)的情況下，在24周內(nèi)，實驗犬的關(guān)節(jié)狀態(tài)分別得到了明顯的改善。但其劑量或者組方，還需要進一步優(yōu)化，以期找到添加量更合理、治療效果更好的組方。

本試驗中，添加葡萄糖胺和軟骨素，對犬關(guān)節(jié)炎的改善作用不如添加HA的組。在犬糧單獨添加0.03%HA，能起到改善關(guān)節(jié)炎的作用，如果HA添加量達(dá)到0.09%，作用更加顯著。在傳統(tǒng)配方中添加少量HA，能非常顯著地改善關(guān)節(jié)炎狀態(tài)。在臨床應(yīng)用時，要保障犬的營養(yǎng)供應(yīng)、同時限制犬運動。

從實驗犬的實驗?zāi)┢诒憩F(xiàn)來看，雖然第3組、第4組、第5組犬的關(guān)節(jié)炎從重度功能障礙狀態(tài)改善到中度功能障礙狀態(tài)，但離輕度功能障礙狀態(tài)或恢復(fù)正常狀態(tài)，還有較大差距。但也有個體，基本上恢復(fù)正常，其實驗初的關(guān)節(jié)炎程度很微小，也就是說，HA或含HA組方，對輕度關(guān)節(jié)炎具有一定的治愈作用，對重度關(guān)節(jié)炎也具有明顯的改善作用。

透明質(zhì)酸對骨關(guān)節(jié)的修復(fù)是一個復(fù)雜的過程，在其治療機理上，有些報道相互矛盾，因而需要進一步的研究，但其應(yīng)用會得到進一步推廣。