趙映潔　徐煒　白本文　段可　朱開(kāi)才

摘 要 以野生草莓YW種子及其無(wú)菌苗葉片為試驗(yàn)材料，分別建立野生草莓種子高效萌發(fā)體系及葉片離體再生體系。結(jié)果表明：通過(guò)隔夜浸泡，旋渦振蕩儀清洗草莓種子，并用5%NaClO消毒5 min，春化7 d，草莓種子萌發(fā)率高達(dá)73%;葉片最適不定芽誘導(dǎo)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比為IBA 0.1 mg·L-1+6-BA 3.4 mg·L-1。

關(guān)鍵詞 野生草莓種子;高效萌發(fā);離體再生

中圖分類(lèi)號(hào)：S668.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.21.001

草莓（Fragaria×ananassa Duchesne）屬薔薇科、草莓屬多年生草本植物，是十分美味的水果之一[1]。全世界草莓屬約24個(gè)種，主要分布在亞洲、歐洲和美洲[2]。我國(guó)地域遼闊，氣候類(lèi)型多樣，有著豐富的草莓資源，是世界上野生草莓種類(lèi)最豐富的國(guó)家[3]。野生草莓具有廣泛的適應(yīng)性和多種優(yōu)良特性，有些野生草莓在風(fēng)味、品質(zhì)、抗病蟲(chóng)害等方面表現(xiàn)突出，可以作為改良栽培草莓的重要材料[4]。但國(guó)內(nèi)有關(guān)草莓離體再生的報(bào)道大多都為栽培草莓，野生草莓離體再生的研究在國(guó)內(nèi)報(bào)道較少[5-9]。基于此，以野生草莓Yellow Wonder（YW）為試驗(yàn)材料建立高效的無(wú)菌種子萌發(fā)體系及葉片離體再生體系，為提高栽培草莓的品質(zhì)和抗病蟲(chóng)害能力等良種培育奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 植物材料

飽滿(mǎn)有活力的YW種子。

1.1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

種子萌發(fā)培養(yǎng)基及不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基均添加7 g·L-1的瓊脂，pH為5.7～5.8，121 ℃下高壓蒸汽滅菌20 min備用。

除暗培養(yǎng)外，所有試驗(yàn)材料的培養(yǎng)條件均為16 h（光）/8 h（暗），光強(qiáng)2 000～3 000 lx，溫度23～25 ℃。

1.1.3 試劑

1/2MS、MS、IBA、6-BA、瓊脂、蔗糖等，均購(gòu)于生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 YW種子消毒處理

YW種子浸泡過(guò)夜，隔天用旋渦振蕩儀清洗，用剪過(guò)的1 mL槍頭吸掉雜質(zhì)及癟種，直至上清液完全澄清;分別使用3% NaClO、4% NaClO、5% NaClO消毒5 min，期間用旋渦振蕩儀低速振蕩;立即吸掉消毒液，無(wú)菌水清洗6～8次，然后吸打在1/2MS平板上，晾干水分后封口;每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，4 ℃春化7 d，報(bào)紙遮光處理21 d后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率及污染率。

1.2.2 YW不定芽誘導(dǎo)

選取YW葉齡及生長(zhǎng)狀態(tài)一致的繼代組培苗葉片，去掉葉緣，剪成0.3～0.5 cm2的小塊，正面朝下置于6-BA濃度梯度為3.0 mg·L-1、3.4 mg·L-1、3.8 mg·L-1的培養(yǎng)基上進(jìn)行處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，30 d統(tǒng)計(jì)愈傷，60 d統(tǒng)計(jì)不定芽。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析

用SPSS.17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，WPS11.1進(jìn)行作圖。

種子萌發(fā)率（%）=發(fā)芽種子粒數(shù)/萌發(fā)種子總粒數(shù)×100%

污染率（%）=污染外植體數(shù)/接種外植體總數(shù)×100%

0級(jí)愈傷發(fā)生率（%）=0級(jí)愈傷發(fā)生外植體數(shù)/總接種外植體數(shù)×100%（1～4級(jí)愈傷發(fā)生率類(lèi)推）

分化率（%）=出芽的外植體數(shù)/接種外植體總數(shù)×100%

根據(jù)愈傷發(fā)生面積將其分為0～4五個(gè)等級(jí)，如圖1所示。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒液濃度確定

圖2結(jié)果表明，隨著NaClO濃度的升高，種子萌發(fā)率先升高后降低，最高可達(dá)90%。而污染率隨著NaClO濃度的升高而降低，當(dāng)NaClO濃度達(dá)到5%時(shí)，污染率降到了0%，種子萌發(fā)率可達(dá)73%。

2.2 6-BA對(duì)YW葉片再生的影響

如圖3所示，用6-BA誘導(dǎo)愈傷組織的分化，當(dāng)6-BA濃度達(dá)到3.4 mg·L-1時(shí)，YW的3級(jí)、4級(jí)愈傷相比3.0 mg·L-1

6-BA顯著增加，分別為44.0%和20.0%，且在該濃度下愈傷生長(zhǎng)狀態(tài)良好。當(dāng)6-BA濃度達(dá)到3.8 mg·L-1時(shí)，0級(jí)、1級(jí)愈傷均降至2.3%，4級(jí)愈傷增至34.1%。

圖4表明，YW在6-BA濃度達(dá)到3.4 mg·L-1時(shí)，相比其他兩個(gè)濃度不定芽分化率最高，達(dá)26.4%。

3 小結(jié)與討論

草莓種子小、種皮厚、吸水透氣性差且種子內(nèi)存在抑制物，導(dǎo)致種子發(fā)芽率極低，嚴(yán)重限制了草莓新品種雜交選育進(jìn)程[7]?；诖耍ㄟ^(guò)消毒前浸泡種子，用旋渦振蕩儀創(chuàng)傷種皮的方法提高了消毒處理后草莓種子的萌發(fā)率，并得出了最佳的消毒條件：5%NaClO處理5 min。在該條件下消毒種子后春化7 d，種子萌發(fā)率可達(dá)73%，高于李文硯等[8]試驗(yàn)中的70%。

有研究發(fā)現(xiàn)，在草莓葉片離體再生試驗(yàn)中，細(xì)胞分裂素濃度高時(shí)會(huì)抑制不定芽的形成，促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng)[9]。通過(guò)以上研究，發(fā)現(xiàn)隨著6-BA濃度的不斷升高，YW的愈傷再生率逐漸增大，當(dāng)達(dá)到一定濃度時(shí)，愈傷誘導(dǎo)率可達(dá)100%，但不定芽誘導(dǎo)率卻隨著細(xì)胞分裂素濃度的增大呈現(xiàn)出先增大后降低的趨勢(shì)，這與前人研究結(jié)果一致。因此，葉片最適不定芽誘導(dǎo)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的配比為：IBA 0.1 mg·L-1+6-BA 3.4 mg·L-1，不定芽發(fā)生率為26.4%。

參考文獻(xiàn)：

[1] Johnson AL， Govindarajulu R， Ashman TL. Bioclimatic evaluation of geographical range in Fragaria （Rosaceae）： consequences of variation in breeding system， ploidy and species age[J]. Botanical Journal of the Linnean Society，2014，176（1）：99-114.

[2] 雷家軍，薛莉，代漢萍，等.世界草莓屬（Fragaria）植物的種類(lèi)與分布[A].中國(guó)園藝學(xué)會(huì)：草莓研究進(jìn)展（IV）[C].2015.

[3] 雷家軍，代漢萍，譚昌華，等.中國(guó)草莓屬（Fragaria）植物的分類(lèi)研究[J].園藝學(xué)報(bào)，2006（1）：1-5.

[4] 馬鴻翔，陳佩度.草莓屬低倍性野生資源在育種中利用的研究進(jìn)展[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)，2003，20（4）：305-309.

[5] 周宇，張志宏，劉月學(xué)，等.野生二倍體草莓葉片離體再生及四倍體誘導(dǎo)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（3）：44-46.

[6] 孫立茹，劉月學(xué)，孟楠，等.野生草莓EMC離體快繁和葉片再生的研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（4）：9-12.

[7] 梁中午，龐曉倩，馮彩蓮，等.3種浸種方法對(duì)草莓種子發(fā)芽率的影響[A].中國(guó)植物保護(hù)學(xué)會(huì)2018年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集：綠色植保與鄉(xiāng)村振興[C].2018.

[8] 李文硯，孔方南，韋優(yōu)，等.草莓種子萌發(fā)成苗及高效離體再生體系的建立[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016（10）：2463-2469.

[9] Landi L， Mezzetti B. TDZ， auxin and genotype effects on leaf organogenesis in Fragaria[J].Plant Cell Reports，2006，25（4）：281-288.

（責(zé)任編輯：趙中正）