王伊佳 俞晨濤 王月平

摘 要：以阿維菌素濃度為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面法對(duì)阿維菌素產(chǎn)生菌培養(yǎng)基成分進(jìn)行了優(yōu)化。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取玉米淀粉濃度、硫酸銨濃度和丙酸鈉濃度等3個(gè)因素進(jìn)行了Box-Behnken試驗(yàn)。結(jié)果表明，3個(gè)因素對(duì)阿維菌素濃度的影響顯著，最佳培養(yǎng)基組成為：玉米淀粉35.45g/L，硫酸銨16.27g/L，丙酸鈉1.56g/L。在此條件下，阿維菌素的濃度達(dá)4.492g/L。

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)基;優(yōu)化;響應(yīng)面法;阿維菌素

中圖分類號(hào) TQ920.6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 1007-7731（2019）21-0036-04

Abstract：Taking the Avermectin concentration as the response value，the medium composition for producing strain of Avermectin was optimized by response surface methodology. Study three factors such as corn starch concentration，ammonium sulfate concentration，and sodium propionate concentration by the Box-Behnken response surface test，based on the single factor experiment. Results showed that three factors had all significant effect on the Avermectin concentration，corn starch concentration was 35.45g/L，ammonium sulfate concentration was 16.27g/L，sodium propionate concentration was 1.56g/L. Under the above conditions，the Avermectin concentration was 4.492g/L.

Key words：Medium;Optimization;Response surface methodology;Avermectin

阿維菌素（Avermectins，AVM）是由阿維鏈霉菌產(chǎn)生的十六元大環(huán)內(nèi)酯類化合物[1]，具有高效、低毒、安全的特點(diǎn)[2]，已成為了一種廣泛應(yīng)用于農(nóng)、林和養(yǎng)殖業(yè)的生物源殺蟲、殺螨劑[3]。由于阿維鏈霉菌的生長(zhǎng)特性，只能使用分批發(fā)酵作為主要生產(chǎn)方式，導(dǎo)致每批次不同發(fā)酵罐中阿維菌素的產(chǎn)量都會(huì)因菌種退化、延滯期長(zhǎng)短不一、碳氮源流加需求變化等而出現(xiàn)了較大的差異。這種差異在一定程度上限制了阿維菌素的提取和精制，增加了生產(chǎn)成本。因此，通過改造阿維菌素產(chǎn)生菌的菌種和優(yōu)化發(fā)酵工藝來提高阿維菌素產(chǎn)量，越來越受到重視[4-7]。本研究在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過響應(yīng)面法優(yōu)化阿維菌素產(chǎn)生菌培養(yǎng)基成分，得到其最佳配方組成，為阿維菌素產(chǎn)生菌復(fù)壯、選育及阿維菌素工業(yè)生產(chǎn)提供支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌種 試驗(yàn)菌株由大慶志飛生物化工有限公司提供。

1.2 培養(yǎng)基 種子培養(yǎng)基：可溶性淀粉20g/L、酵母浸粉8g/L，α-淀粉酶0.04g/L、七水硫酸鎂0.5g/L，氯化鉀4g/L、磷酸氫二銨0.5g/L、二水合氯化鈣1.8g/L、六水合氯化鈷0.005g/L、pH7.0-7.2。發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米淀粉10g/L、α-淀粉酶0.04g/L、七水硫酸鎂0.5g/L，氯化鉀4g/L、硫酸銨15g/L、丙酸鈉0.6g/L、二水合氯化鈣1.8g/L、六水合氯化鈷0.005g/L、pH7.0～7.2。

1.3 培養(yǎng)方法 挑取單菌落菌種孢子接種于種子培養(yǎng)基中，28℃培養(yǎng)48h，按5%的接種量接種于搖瓶培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)14d，放瓶測(cè)定。

1.4 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確稱取阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品0.1g，以甲醇為溶劑配制成濃度為100μg/mL的母液，依次稀釋獲得濃度為10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL的阿維菌素溶液，在245nm處測(cè)得其吸光度OD值，反復(fù)實(shí)驗(yàn)3次取平均值。以阿維菌素濃度為橫坐標(biāo)，平均吸光度值為縱坐標(biāo)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

1.5 單因素試驗(yàn) 在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，其他條件保持不變，分別選擇玉米淀粉濃度（10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L）、硫酸銨濃度（10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L）和丙酸鈉濃度（0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L、1.0g/L、1.2g/L、1.4g/L、1.6g/L、1.8g/L、2.0g/L）3個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，考察各因素對(duì)阿維菌素濃度的影響。

1.6 響應(yīng)面試驗(yàn) 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，采用3因素3水平Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考察玉米淀粉、硫酸銨及丙酸鈉濃度對(duì)阿維菌素濃度的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)對(duì)阿維菌素濃度的影響

2.1.1 玉米淀粉 由圖2可知，隨著玉米淀粉濃度的增加，阿維菌素濃度先增加后減少，在玉米淀粉濃度35g/L時(shí)，阿維菌素濃度達(dá)到最高。

2.1.2 硫酸銨 由圖3可知，硫酸銨濃度在16g/L時(shí)，阿維菌素濃度達(dá)到最高。