周玉波 曾怡 王賽男 屠晨瑤 黃思洋

摘要?[目的]通過(guò)測(cè)定麥冬、去心麥冬及其炮制品中多糖和總黃酮的含量，比較麥冬去心前后及炮制前后有效成分的變化。[方法]苯酚-硫酸比色法測(cè)定多糖含量;以蘆丁為對(duì)照，采用NaNO2-AlCl3-NaOH法測(cè)定總黃酮含量。[結(jié)果]多糖含量分別為麥冬生品10.88%、酒炙品6.92%、清炒制品10.48%、米炒制品6.81%，去心麥冬生品11.73%、酒炙品8.46%、清炒制品11.01%、米炒制品8.54%?？傸S酮含量分別為麥冬生品0.83%、酒炙品0.76%、清炒制品1.03%、米炒制品0.95%，去心麥冬生品0.78%、酒炙品0.70%、清炒制品0.99%、米炒制品0.84%。[結(jié)論]麥冬去心后，多糖含量增加，麥冬生品及去心麥冬經(jīng)炮制后，多糖的含量均有減少;麥冬總黃酮含量在去心后減少，麥冬生品及去心麥冬炮制后，除酒炙品以外，總黃酮的含量均有增加。

關(guān)鍵詞?麥冬;去心;炮制;多糖;總黃酮

中圖分類(lèi)號(hào)?R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A

文章編號(hào)?0517-6611（2019）22-0181-03

Abstract?[Objective]By measuring the content of polysaccharides and total flavonoids in Radix Ophiopogonis， cored Radix Ophiopogonis and its processed products， the changes of active constituents before and after the removal of Radix Ophiopogonis and before and after processing were compared.[Method]The content of polysaccharides was determined by phenolsulfuric acid colorimetry，and the concentration of total flavonoids was determined by NaNO2AlCl3NaOH colorimetry as rutin for a reference substance.[Result]The contents of polysaccharides in Radix Ophiopogonis and the processed products were as follows： crud Radix Ophiopogonis 10.88%， stirheating Radix Ophiopogonis with yellow wine 6.92%， plainfrying Radix Ophiopogonis 10.48%， stirfrying with Radix Ophiopogonis rice 6.81%;cored Radix Ophiopogonis 11.73%， stirheating cored Radix Ophiopogonis with yellow wine 8.46%， plainfrying cored Radix Ophiopogonis 11.01%， stirfrying with cored Radix Ophiopogonis rice 8.54%. The concentration of total flavonoids in above Radix Ophiopogonis and the processed products were as follows： crud Radix Ophiopogonis 0.83%， stirheating Radix Ophiopogonis with yellow wine 0.76%， plainfrying Radix Ophiopogonis 1.03%， stirfrying with Radix Ophiopogonis rice 0.95%;cored Radix Ophiopogonis 0.78%， stirheating cored Radix Ophiopogonis with yellow wine 0.70%， plainfrying cored Radix Ophiopogonis 0.99%， stirfrying with cored Radix Ophiopogonis rice 0.84%. [Conclusion]The polysaccharide content in Radix Ophiopogonis was increased by coring， while decreased by processing with above methods. The concentration of total flavonoids in Radix Ophiopogonis was decreased by coring， while increased by processing with above methods except stirheating with yellow wine.

Key words?Radix Ophiopogonis;Cored;Processing;Polysaccharide;Total flavonoid

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬[Ophiopogon japonicus（L.f.）Ker-Gawl.]的干燥塊根，是一種常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其性微寒，味甘微苦，具有除煩清心、生津益胃、潤(rùn)肺養(yǎng)陰的功效[1]。麥冬有較多炮制方法[2-3]：麥冬去心后具有除煩作用;酒制具有引經(jīng)、增強(qiáng)滋補(bǔ)、降低寒性等作用;麥冬清炒后性微寒近平，以養(yǎng)胃生津?yàn)閺?qiáng)，多用于消渴善飲、氣短而口干、治療便秘等;米制目的與酒制相似，可去苦寒，常用于發(fā)熱病癥之后，具有較緩清補(bǔ)的作用。目前臨床上麥冬多采用去心、軋扁、切制等炮制方式，卻很少用眾本草提及的清炒、米制和酒制等。多糖和黃酮是麥冬中的重要活性成分，筆者以麥冬、去心麥冬及炮制品為研究對(duì)象，分別考察其中多糖和總黃酮兩類(lèi)成分的含量變化，為進(jìn)一步研究麥冬、去心麥冬及炮制方法提供科學(xué)依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

麥冬（產(chǎn)地浙江）購(gòu)于浙江震元醫(yī)藥連鎖有限公司，經(jīng)鑒定為百合科沿階草屬植物麥冬[Ophiopogon japonicus（L.f.）Ker-Gawl.]的干燥塊根。蘆丁對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110824-200904;D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110833-201205;水為去離子水;濃H2SO4、NaNO2、AlCl3、NaOH等試劑均為分析純。

1.2?試驗(yàn)主要儀器

FZ102型粉粹機(jī)（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）;METTLER AL204型分析天平（ Mettler儀器（上海）有限公司）;80-2臺(tái)式低速離心機(jī)（上海手術(shù)器械廠）;HP8453型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（惠普公司）。

1.3?麥冬樣品的制備

（1）麥冬生品。取干燥麥冬，用純凈水清洗后曬干。

（2）去心麥冬。取干燥麥冬，撿去雜質(zhì)，用溫水浸泡約30 min，取出，悶潤(rùn)至柔軟后去心，再用純凈水清洗后曬干。

（3）清炒麥冬。取麥冬生品，用文火炒至表面微黃，部分可見(jiàn)焦斑，具焦香氣后取出放涼。

（4）清炒去心麥冬。取去心麥冬，照清炒麥冬方法制得。

（5）米炒麥冬。先將米撒于鍋中，用文火炒至全部呈焦黃色，待冒煙時(shí)倒入麥冬生品，繼續(xù)用文火炒至麥冬表面黃色或出現(xiàn)焦斑，取出后放涼，篩去米即可。其中每麥冬1 kg用米120 g。

（6）米炒去心麥冬。取去心麥冬，照米炒麥冬方法制得。其中每去心麥冬1 kg用米120 g。

（7）酒炙麥冬。取麥冬生品，加入白酒，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，稍悶至酒吸盡，用120 ℃文火微炒干，取出后放涼。其中每麥冬20 kg用米1.25 kg。

（8）酒炙去心麥冬。取去心麥冬，照酒炙麥冬方法制得。其中每去心麥冬20 kg用米1.25 kg。

1.4?麥冬多糖含量的測(cè)定

1.4.1?葡萄糖對(duì)照品溶液的制備。

無(wú)水葡萄糖105 ℃ 干燥至恒重，精密稱(chēng)取0.049 5 g，置50 mL容量瓶中，加水溶解定容后，得葡萄糖對(duì)照品溶液，其濃度為0.990 mg/mL。

1.4.2?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

精確量取“1.4.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中，加水定容。各取1.0 mL上述溶液，分別加至5支具塞試管中，從中加入1.0 mL 5%苯酚溶液，再迅速垂直加入5.0 mL濃硫酸，加塞后搖勻，在沸水浴中加熱30 min，取出用冰水冷至室溫。以1 mL雙蒸水同上進(jìn)行平行操作，作為空白對(duì)照溶液，按紫外-可見(jiàn)分光光度法，在488 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)（Y）、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.3?換算因子的測(cè)定。

麥冬粉末30 g，用75%乙醇60 ℃水浴提取3次（每次2 h），取藥渣揮盡乙醇，加蒸餾水90 ℃加熱提取3次，抽濾，合并濾液，再減壓濃縮至40 mL，濃縮液加無(wú)水乙醇使含醇量到80%，置4 ℃冰箱中醇沉過(guò)夜，沉淀經(jīng)離心分離后干燥，得粗多糖。粗多糖用Servage法[4]除蛋白，再醇沉（80%含醇量，操作同上）2次，得到的沉淀分別用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌后，60 ℃真空干燥至恒重，得麥冬精制多糖。精密稱(chēng)取麥冬精制多糖0.015 9 g，置50 mL容量瓶中，加水定容后，得到0.318 mg/mL的多糖溶液。

取麥冬精制多糖溶液1.0 mL于具塞試管中，按“1.4.2”操作測(cè)定吸光度，由回歸方程求出麥冬精制多糖溶液中葡萄糖的濃度C（mg/mL）。按公式f=W/（C×D）計(jì)算換算因子，其中，W為稱(chēng)取多糖的質(zhì)量（mg），C為多糖中葡萄糖濃度（mg/mL），D為稀釋倍數(shù)。

1.4.4?樣品溶液的制備。

取麥冬生品、去心麥冬及各種炮制品粉末各1.0 g，精密稱(chēng)定，用50 mL 80%乙醇加熱回流2次（每次2 h），抽濾，濾渣分別用80%熱乙醇洗滌3次（每次10 mL），揮盡乙醇，再用50 mL水提取3次（每次2 h），趁熱抽濾，濾渣分別用熱純化水洗滌3次（每次10 mL），將濾液和洗滌液合并后濃縮，放冷后移入50 mL容量瓶中，加水定容，搖勻，即得。

1.4.5?樣品中多糖含量的測(cè)定。

精密移取“1.4.4”項(xiàng)下麥冬生品、去心麥冬及各炮制品供試品溶液各0.5 mL，置10 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度搖勻后，取1.0 mL于具塞刻度試管中，按“1.4.2”方法測(cè)定吸光度，再根據(jù)回歸方程計(jì)算各供試品溶液中葡萄糖的濃度，按公式（C×D×f/W）×100%計(jì)算其中多糖的含量，式中，C為待測(cè)樣品溶液中以葡萄糖計(jì)所得的濃度（mg/mL），D為稀釋倍數(shù)，f為多糖換算因子，W為待測(cè)樣品干重質(zhì)量。

1.5?麥冬總黃酮含量的測(cè)定

1.5.1?對(duì)照品溶液的制備。

精密稱(chēng)取120 ℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品0.019 8 g，用60%乙醇配制成0.396 mg/mL的對(duì)照品溶液。

1.5.2?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

分別精密量取蘆丁對(duì)照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL于10 mL容量瓶中，各加入0.3 mL的5%NaNO2溶液，搖勻，靜置6 min，再分別加入0.3 mL的10%AlCl3溶液，搖勻，靜置6 min，最后分別加入4 mL的4%NaOH溶液，用60%乙醇定容至刻度，靜置15 min后，以空白溶液為參比，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A。以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5.3?供試品溶液的制備。

精密稱(chēng)取麥冬生品、去心麥冬及各種炮制品粉末各1.0 g，用50 mL的75%乙醇加熱回流提取2 h（共提取3次），趁熱濾過(guò)，濾液減壓濃縮（60 ℃）蒸去乙醇，再用同體積乙醚萃取2～3次除去葉綠素及蠟質(zhì)等，最后用75%乙醇稀釋定容至50 mL，即得各種麥冬供試品溶液。

1.5.4?樣品中總黃酮的含量測(cè)定。

精密移取“1.5.3”項(xiàng)下麥冬生品、去心麥冬及各炮制品供試品溶液各1.5 mL，按照“1.5.2”方法測(cè)定，根據(jù)回歸方程計(jì)算各供試品溶液中總黃酮的濃度。

2?結(jié)果與分析

2.1?麥冬多糖的含量測(cè)定及方法學(xué)考察

2.1.1?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

分別對(duì)不同濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行吸光度的測(cè)定，得到回歸方程Y=9.416 8X-0.040 2（r=0.999 6），結(jié)果表明，葡萄糖對(duì)照品溶液在0.019 80～0.099 00 mg/mL與吸光度有良好的線性關(guān)系。

2.1.2?換算因子。

按公式f=W/（C×D）計(jì)算換算因子，得f=3.99（n=6）。

2.1.3?穩(wěn)定性試驗(yàn)。

精密移取樣品溶液0.5 mL于10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，從中精密移取1.0 mL于具塞刻度試管中，按“1.4.2”方法測(cè)定吸光度，每15 min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定2 h，RSD=1.83%，表明顯色體系在室溫下2 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4?精密度試驗(yàn)。

精密移取1.0 mL葡萄糖對(duì)照品溶液，按“1.4.2”方法測(cè)定吸光度，平行測(cè)定6份，結(jié)果得出RSD=1.87%，表明儀器精密度良好。

2.1.5?重復(fù)性試驗(yàn)。

取同一批次麥冬生品粉末6份，各約1.0 g，精密稱(chēng)定，按“1.4.4”方法制備6份樣品液，精密移取各0.5 mL置10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，從中精密移取1.0 mL，按“1.4.2”方法測(cè)定吸光度，RSD=2.17%，表明重復(fù)性良好。

2.1.6?加樣回收率試驗(yàn)。

取同一批已知含量的麥冬生品6份，各約0.5 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入相當(dāng)于樣品中葡萄糖含量80%、100%和120%的葡萄糖對(duì)照品，按“1.4.4”方法制備樣品溶液，精密移取0.5 mL于10 mL容量瓶中，加水稀釋搖勻后，取1.0 mL置具塞刻度試管中，按“1.4.2”方法測(cè)定吸光度，計(jì)算葡萄糖的回收率，結(jié)果顯示其平均值為100.46%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.10%（表1）。

2.1.7?樣品含量測(cè)定。

測(cè)定各供試品溶液的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到各供試品溶液中葡萄糖的濃度，再按公式（C×D×f/W）×100%計(jì)算其中多糖的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，麥冬去心后，多糖含量增加，麥冬經(jīng)炮制后，多糖的含量均有減少。

2.2?麥冬總黃酮的含量測(cè)定及方法學(xué)考察

2.2.1?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程A=11.869C-0.009 5（r=0.999 6），說(shuō)明蘆丁在0.019 8～0.099 0 mg/mL呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.2?精密度試驗(yàn)。

精密吸取同一蘆丁對(duì)照品溶液，按“1.5.2”方法連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果得出RSD為1.53%，表明精密度良好。

2.2.3?穩(wěn)定性試驗(yàn)。

取同一供試品溶液1.5 mL，按“1.5.2”方法，每隔10 min測(cè)定一次吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，RSD為1.05%，表明供試品溶液60 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4?重復(fù)性試驗(yàn)。

取同一批麥冬生品6份，按“1.5.3”方法制備供試品溶液，取1.5 mL按照“1.5.2”方法測(cè)定總黃酮的含量，結(jié)果得出RSD為2.58%，表明試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.2.5?加樣回收率試驗(yàn)。

取麥冬生品1.0 g 6份，精密稱(chēng)定，分別加入相當(dāng)于樣品中總黃酮含量80%、100%和120%的蘆丁對(duì)照品，按照“1.5.3”方法制備供試品溶液，精密移取1.5 mL，按照“1.5.2”方法處理并測(cè)定吸光度，計(jì)算平均加樣回收率為101.14%，RSD為2.92%（表3）。

2.2.6?樣品含量測(cè)定。

精密移取各供試品溶液，按照“1.5.2”方法測(cè)定，根據(jù)回歸方程計(jì)算各供試品溶液中總黃酮的濃度，結(jié)果見(jiàn)表4。從表4可以看出，麥冬去心后，總黃酮含量下降，麥冬經(jīng)炮制后，除酒炙品總黃酮含量下降外，其余炮制品總黃酮含量均升高。

3?討論

多糖是麥冬藥材的重要活性成分之一，由果糖和多量的低聚糖類(lèi)組成，現(xiàn)代藥理研究表明，具有抗心肌缺血、增強(qiáng)免疫、降血糖、抗氧化、抗過(guò)敏、抗腫瘤等藥理作用[5-6]。麥冬去心及炮制后對(duì)麥冬多糖的含量有影響，麥冬去心后，多糖含量有一定的增加，麥冬生品及去心麥冬經(jīng)炮制后，多糖的含量均有減少，可能由于高溫氧化使多糖類(lèi)成分含量減少。

黃酮類(lèi)化合物在植物的根、果實(shí)、莖、葉、花中廣泛存在，具有復(fù)雜多樣的結(jié)構(gòu)類(lèi)型，在抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗衰老、抗心腦血管疾病、鎮(zhèn)痛等方面表現(xiàn)有藥理作用，因此在醫(yī)藥領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景[7-10]。麥冬中含有豐富的黃酮類(lèi)化合物，試驗(yàn)表明，麥冬去心后總黃酮含量有所降低，麥冬生品及去心麥冬炮制后，總黃酮的含量均按清炒制品、米炒制品、生品、酒炙品次序依次降低，除酒炙品以外，麥冬、去心麥冬經(jīng)炮制后總黃酮的含量均有增高。

從該試驗(yàn)研究結(jié)果看，麥冬去心后總黃酮含量有所降低，而多糖含量有所升高，因此，關(guān)于去心的問(wèn)題還需做更多的研究。麥冬炮制品是經(jīng)過(guò)不同炮制方法制成的，而不同的炮制方法影響麥冬有效成分的含量，這是中藥炮制研究的重要組成部分，該試驗(yàn)通過(guò)對(duì)多糖及總黃酮含量的考察，可為麥冬的炮制研究及其臨床合理用藥提供試驗(yàn)依據(jù)。

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