楊光忠，李慶慶，徐曉詩(shī)，符元澤

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074)

寬筋藤為防己科植物中華青牛膽Tinosporasinensis(Lour.) Merr.的藤莖，為傳統(tǒng)藏藥勒折，其性寒，味苦，歸肝經(jīng)，具有舒筋活絡(luò)、清熱利濕、祛風(fēng)止痛的功效，臨床常用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、虛熱以及痛風(fēng)病等[1].其主要分布于廣西、廣東、云南等地，尤以?xún)蓮V地區(qū)分布廣，產(chǎn)量大，資源豐富，在民間沿用歷史悠久，療效顯著[2].寬筋藤含萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)、苯丙素類(lèi)等多種結(jié)構(gòu)類(lèi)型的化學(xué)成分[3,4].現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，寬筋藤提取物具有抗氧化、抗輻射、抗炎、免疫抑制、抗利什曼、保肝等作用[2].為進(jìn)一步研究藏藥寬筋藤的化學(xué)成分、探究其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，本文利用溶劑提取法，正、反相硅膠柱色譜和半制備高效液相色譜法對(duì)其乙醇提取物進(jìn)行分離純化，并根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu).從其乙醇提取物中分離得到10個(gè)化合物，包含6個(gè)酚類(lèi)以及4個(gè)生物堿類(lèi)化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為對(duì)羥基苯甲醛 (1)、香草醛(2)、香草乙酮(3)、異莨菪亭(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、偽巴馬汀(7)、trans-N-coumaroyltyramine(8)、trans-N-feruloyltyramine(9)、trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine (10).化合物3、4和10為首次從寬筋藤中分離得到.

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

核磁共振波譜儀(AVANCE IIITM 600 MHz，德國(guó)布魯克)；高效液相色譜儀(Ultimate 3000半制備型，美國(guó)戴安，DAD檢測(cè)器)；半制備型色譜柱(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10.0 mm,5 μm)；三用紫外分析儀(ZF-I型，上海顧村電光儀器廠(chǎng))；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE2000A，上海亞榮生化儀器廠(chǎng))；循環(huán)水式真空泵(SHB-III，鄭州長(zhǎng)城儀器)；正相硅膠(200～300目，青島海洋化工)；反相硅膠(50 μm ,YMC·GEL ODS-A-HG,AAG12S50)；硅膠板GF 254(青島海洋化工)；分析純?nèi)軇?國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑)；色譜純?nèi)軇?昌泰興業(yè)).

寬筋藤購(gòu)買(mǎi)于青海西寧，由中南民族大學(xué)藥學(xué)院劉新橋副教授鑒定為防己科植物中華青牛膽Tinosporasinensis(Lour.) Merr.的藤莖.

1.2 提取與分離

9.4 kg干燥寬筋藤粉碎，70%乙醇室溫浸提3次，每次24 h，提取液真空抽濾后減壓濃縮得乙醇提取物(1.0 kg).乙醇提取物經(jīng)聚酰胺柱層析，依次用純水、30%、50%、70%、100%乙醇梯度洗脫，合并相同組分得5個(gè)流份(Fr.1～Fr.5).Fr.2(41.3 g) 經(jīng)反相硅膠柱色譜分離，依次用20%、40%、60%、80%、100%甲醇梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并得15個(gè)組分(Fr.2.1～Fr.2.15).Fr.2.11(4.1 g)經(jīng)正相硅膠柱(200～300目)分離，以二氯甲烷-甲醇(19∶1、9∶1、1∶1)為洗脫劑，TLC檢測(cè)合并得9個(gè)組分(Fr.2.11.1～Fr.2.11.9).Fr.2.11.1經(jīng)HPLC[流動(dòng)相，V(甲醇)∶V(水)=37∶63，流速3 mL/min]制備得到化合物1(5 mg,tR=12.13 min)、2(5 mg，tR=13.28 min)、3(5 mg，tR=16.05 min)、4(2.7 mg，tR=15.22 min).Fr.2.11.2經(jīng)HPLC[流動(dòng)相，V(甲醇)∶V(水)=28.5∶71.5，流速3 mL/min]制備得到化合物5(20.6 mg，tR=18.31 min)、6(12.7 mg，tR=20.43 min).Fr.2.11.6經(jīng)HPLC[流動(dòng)相，V(乙腈):V(1‰甲酸-水)=25∶75，流速3 mL/min]制備得到化合物7(4 mg，tR=13.00 min).Fr.3(48 g) 經(jīng)正相硅膠柱(200～300目)分離，用石油醚-乙酸乙酯(體積比依次為95∶5，9∶1，8∶2，7∶3，1∶1，3∶7，2∶8，0∶1) 梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并得7個(gè)流份(Fr.3.1～Fr.3.7).Fr.3.6(4.1 g)經(jīng)反相硅膠柱層析分離，30%、50%、70%、80%、100%甲醇依次洗脫，TLC檢測(cè)合并得15個(gè)組分(Fr.3.6.1～Fr.3.6.15).Fr.3.6.5(100 mg) 經(jīng)HPLC[流動(dòng)相，V(甲醇)∶V(水)=37∶63，流速3 mL/min]制備得到化合物8(2 mg,tR=36.74 min)、9(29 mg,tR=43.25 min)、10(4.1 mg,tR=46.61 min).化合物1～10的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1.

圖1 化合物1～10的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of compound 1—10

2 結(jié)果

化合物1:白色粉末，分子式為C7H6O2.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.77(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,H-6),6.90(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,H-5),9.76(1H,s,-CHO);13C NMR(150 MHz，CD3OD)δC193.0(-CHO),130.3(C-1),133.6(C-2,C-6),117.1(C-3,C-5),165.6(C-4).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的對(duì)羥基苯甲醛基本一致，故鑒定化合物1為對(duì)羥基苯甲醛.

化合物2:白色針狀結(jié)晶，分子式為C8H8O3.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.43(1H, s,H-2),6.93(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),7.44(1H,d,J=7.8 Hz,H-6),9.73(1H,s,-CHO),3.92(3H,s,3-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC193.0(-CHO),130.5(C-1),111.3(C-2),150.0(C-3),155.4(C-4),116.5(C-5),128.3(C-6),56.5(3-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)照基本一致，故鑒定化合物2為香草醛.

化合物4：無(wú)色針晶，分子式為C10H8O4.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH6.20(1H,d,J= 9.6 Hz,H-3),7.86(1H,d,J= 9.6 Hz,H-4),7.11(1H,s,H-5),6.76(1H,s,H-8),3.91(3H,s,7-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC164.3(C-2),109.9(C-3),146.4(C-4),113.3(C-5),147.4(C-6),153.6(C-7),104.1(C-8),151.7(C-8a),112.5(C-4a),56.9(7-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照基本一致，故鑒定化合物4為異莨菪亭.

化合物5：白色針晶，分子式為C8H8O4.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.53(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.85(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.57(1H,dd,J=1.8,8.4 Hz,H-6),3.88(3H,s,3-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC123.3(C-1),115.9(C-2),148.7(C-3),152.7(C-4),113.8(C-5),125.4(C-6),170.3(-COOH),56.5(3-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對(duì)照基本一致，故鑒定化合物5為香草酸.

化合物6：白色粉末，分子式為C9H10O5.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.33(2H，s,H-2,H-6),3.88(6H,s,3,5-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC122.5(C-1),108.3(C-2,C-6),148.9(C-3,C-5),141.6(C-4),170.5(-COOH),56.9(3,5-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故確定化合物6為丁香酸.

化合物7：黃色粉末，分子式為C21H22NO4+.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.62(1H,s，H-1),7.05(1H,s,H-4),3.27(2H,br s,H2-5),4.81(2H,br s,H2-6),9.35(1H,s,H-8),7.64(1H,s,H-9),7.60(1H,s,H-12),8.65(1H,s,H-13),3.99(3H,s,2-OCH3),3.94(3H,s,3-OCH3),4.13(3H,s,10-OCH3),4.06(3H,s,11-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC120.6(C-1a),110.0(C-1),150.9(C-2),153.9(C-3),112.3(C-4),130.2(C-4a),28.0(C-5),56.5(C-6),146.3(C-8),124.2(C-8a),107.3(C-9),154.7(C-10),160.1(C-11),106.4(C-12),139.1(C-12a),119.4(C-13),140.7(C-13a),57.0(2-OCH3),56.8(3-OCH3),57.1(10-OCH3),57.5(11-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]偽巴馬汀數(shù)據(jù)對(duì)照基本一致，故鑒定化合物7為偽巴馬汀.

化合物8：白色固體，分子式為C17H17NO3.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.40(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,H-6),6.78(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,H-5),7.44(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),6.38(1H,d,J= 15.6 Hz,H-8),7.05(2H,d,J=7.8 Hz,H-2′,H-6′),6.71(2H,d,J=7.8 Hz,H-3′,H-5′),2.75(2H,t,J=7.2 Hz,H2-7′),3.46(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz, CD3OD)δC127.8(C-1),130.7(C-2,C-6),160.7(C-4),116.4(C-3,C-5),142.7(C-7),118.5(C-8),169.4(C-9),131.4(C-1′),130.9(C-2′,C-6′),116.9(C-3′,C-5′),157.7(C-4′),36.0(C-7′),42.7(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故確定化合物8為trans-N-coumaroyltyramine.

化合物9：白色固體，分子式為C18H19NO4.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.10(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.79(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.01(1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6),7.44(1H,d,J=16.2Hz,H-7),6.41(1H,d,J=16.2 Hz,H-8),3.86(3H,s,3-OCH3),7.05(2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,H-6′),6.72(2H,d,J=8.4 Hz,H-3′,H-5′),2.75(2H,t,J=7.2 Hz,H2-7′),3.46(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC128.3(C-1),111.6(C-2),150.0(C-3),149.4(C-4),116.6(C-5),123.4(C-6),142.2(C-7),118.8(C-8),169.3(C-9),56.4(3-OCH3),131.4(C-1′),130.9(C-2′,C-6′),116.4(C-3′,C-5′),157.0(C-4′),35.9(C-7′),42.7(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故確定化合物9為trans-N-feruloyltyramine.

化合物10：白色粉末，分子式為C19H21NO5.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.12(1H,d,J=1.2 Hz,H-2),6.79(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.02(1H,dd,J=8.4,1.2 Hz,H-6),7.45(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),6.41(1H,d,J=15.6 Hz,H-8),3.88(3H,s,3-OCH3),3.83(3H,s,3′-OCH3),6.82(1H,d,J=1.2 Hz,H-2′),6.72(1H,d,J=7.8 Hz,H-5′),6.67(1H,dd,J=7.8,1.2 Hz,H-6′),2.77(2H,t,J=7.2 Hz,Hz-7′),3.48(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC128.4(C-1),111.6(C-2),150.0(C-3),149.4(C-4),116.6(C-5),123.4(C-6),142.2(C-7),118.8(C-8),169.3(C-9),56.5(3-OCH3),56.4(3′-OCH3),132.2(C-1′),113.5(C-2′),149.1(C-3′),146.2(C-4′),116.3(C-5′),122.4(C-6′),36.4(C-7′),42.7(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12,13]報(bào)道基本一致，故確定化合物10為trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine.

3 結(jié)語(yǔ)

通過(guò)對(duì)寬筋藤乙醇提取物的系統(tǒng)分離，得到10個(gè)化合物，包含6個(gè)酚類(lèi)化合物以及4個(gè)生物堿類(lèi)化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為對(duì)羥基苯甲醛(1)、香草醛(2)、香草乙酮(3)、異莨菪亭(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、偽巴馬汀(7)、trans-N-coumaroyltyramine(8)、trans-N-feruloyltyramine(9)、trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine(10).其中化合物3、4和10為首次從寬筋藤中分離得到，為寬筋藤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和開(kāi)發(fā)提供了一定的依據(jù).