周秋艷 唐方華 劉展梅 彭濤 施穎杰

摘要?[目的]以荔枝核為原料，優(yōu)化荔枝核多酚純化工藝，提高荔枝多酚資源利用率。[方法]以多酚純度以及收率為衡量指標(biāo)，通過對比7種大孔樹脂的靜態(tài)吸附與解吸，確定純化荔枝核多酚的最佳樹脂;通過大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附與洗脫，考察吸附量、洗脫溶劑、洗脫溶劑用量、洗脫速度等因素，確定荔枝核多酚純化的最佳工藝。[結(jié)果]篩選出大孔樹脂LSA-12作為最佳純化材料，LSA-12純化荔枝核多酚的最佳工藝為吸附量1∶4.61（g∶mL）（總固形物∶樹脂體積）、洗脫溶劑70%乙醇、洗脫溶劑用量1.5 BV、洗脫速度1.0 BV/h。在該條件下，所得荔枝核多酚平均純度為71.98%，平均收率為80.93%。[結(jié)論]大孔樹脂LSA-12純化荔枝核多酚效果良好，該工藝可在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞?荔枝核多酚;純化;大孔樹脂;靜態(tài)吸附與解吸;動(dòng)態(tài)吸附與洗脫

中圖分類號?TQ?914.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼?A

文章編號?0517-6611（2019）23-0196-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.23.057

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Study on Purification Process of Polyphenols from Litchi Seed Polyphenols

ZHOU Qiu?yan1， TANG Fang?hua1， LIU Zhan?mei2 et al

（1.Extraction and Fermentation Laboratory of Nuspower Greatsun（Guangdong） Biotechnology Co.， Ltd.， Guangzhou， Guangdong 510900;2.Guangzhou Nanyang Polytechnic College， Guangzhou， Guangdong 510925）

Abstract?[Objective] Using litchi seed as raw material， optimize the purification process of litchi seed polyphenols and improve the utilization rate of litchi polyphenols. [Method] Based on the purity and yield of polyphenols， the best resin for purifying litchi core polyphenols was determined by comparing the static adsorption and desorption of seven macroporous resins. Based on the dynamic adsorption and elution of macroporous resin， the adsorption process， elution solvent， elution solvent dosage and elution rate were investigated to determine the optimal process for purification of litchi seed polyphenols. [Result] The macroporous resin LSA?12 was selected as the best purification material. The optimal process for purifying litchi seed polyphenols by LSA?12 was： adsorption amount 1∶4.61（g∶mL） （total solids∶resin volume）， elution solvent 70% ethanol， elution solvent 1.5 BV， elution rate 1.0BV/h. Under this optimal condition， the average purity of litchi seed polyphenols was 71.98%， and the average yield was 80.93%. [Conclusion] The macroporous resin LSA?12 has a good effect in purifying litchi seed polyphenols， and the process can be applied in production.

Key words?Litchi seed polyphenols;Purification;Macroporous resin;Static adsorption and desorption;Dynamic adsorption and elution

荔枝核是我國傳統(tǒng)的中藥材，為無患子科植物荔枝（Litchi chinensis Sonn.）的成熟種子，性甘、微苦、溫，歸肝、腎經(jīng)?，F(xiàn)代研究表明，荔枝核含有皂甙、植物多酚、淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪酸、揮發(fā)油及礦物元素等化學(xué)成分[1]，除了具有改善肝損傷作用之外[2]，還具有抑制腫瘤[3-4]、抗氧化[5]、抗病毒[6]等作用，可用于治療糖尿病及其并發(fā)癥[7]，以及治療乳腺增生[8]、保護(hù)神經(jīng)元[9]。多酚類化合物廣泛存在于植物中，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抑菌、預(yù)防老年癡呆和心血管疾病等諸多生理活性[2]。然而，目前國內(nèi)研究荔枝多酚類物質(zhì)主要是集中在荔枝皮部位，關(guān)于荔枝核活性物質(zhì)的研究主要集中在具有抗血糖功效的皂苷類物質(zhì)上。

筆者以干燥荔枝核為原料，采用大孔樹脂對荔枝核多酚類物質(zhì)分離純化工藝進(jìn)行研究，旨在為建立荔枝核多酚分離純化工藝提供理論依據(jù)，同時(shí)為拓展荔枝深加工產(chǎn)品領(lǐng)域、綜合利用荔枝資源提供有效途徑。

1?材料與方法

1.1?原料和試劑

“淮枝”品種荔枝核，取自廣州市從化區(qū)明珠市場的荔枝整果。

沒食子酸：中國食品藥品檢定研究院;福林酚：中國食品藥品檢定研究院;大孔樹脂：LSA-12、XDA-8、LX-T28、LX-8、D101，西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司;大孔樹脂：DM21、DM28，艾美科健（中國）生物醫(yī)藥有限公司;95%乙醇：分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠;甲醇：分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠;碳酸鈉：分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠。

1.2?主要儀器設(shè)備

DMF-10A多功能搖擺式粉碎機(jī)（浙江省溫嶺市銘大藥材機(jī)械設(shè)備有限公司）;DMF-4B手提式高速中藥粉碎機(jī)（浙江省溫嶺市銘大藥材機(jī)械設(shè)備有限公司）;2WAJ阿貝折射儀（上海儀電物理光學(xué)儀器有限公司）;LT-1002電子天平（常熟市天量儀器有限責(zé)任公司）;ATX224分析天平（島津制作所）;TD-5M離心機(jī)（山東博科科學(xué)儀器有限公司）;SP-752PC紫外分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）;5 L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海大顏儀器設(shè)備有限公司）;EXRE-2002旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鞏義市宇翔儀器有限公司）;DHG-9240A電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;DZF-6053真空干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.3?荔枝核提取濃縮液的制備

新鮮荔枝核60 ℃烘8 h，粉碎至粗粉，備用→荔枝核第1次提?。簻囟?0 ℃、70%乙醇、料液比1∶8，提取60 min;藥渣第2次提?。簻囟?0 ℃、70%乙醇、料液比1∶6，提取60 min;合并提取液→60 ℃減壓濃縮至無醇→濃縮液4 000 r/min離心6 min，得荔枝核提取濃縮液，冷藏保存，備用。

1.4?繪制沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱?。?.110±0.010）g 沒食子酸，用蒸餾水溶解，然后定容至100 mL，即為沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。準(zhǔn)確量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于100 mL容量瓶中，定容，搖勻，得濃度分別為10、20、30、40、50 μg/mL沒食子酸工作液。準(zhǔn)確量取1.0 mL沒食子酸工作液于刻度試管中，分別加入5.0 mL 10%福林酚試劑，搖勻，反應(yīng)3～8 min內(nèi)，加入4.0 mL 7.5% Na2CO3溶液，加水定容、搖勻，室溫下放置60 min，于765 nm波長下，用紫外可見分光光度計(jì)測得吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?？瞻子谜麴s水代替沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.5?多酚的檢測

稱取待檢測樣品于10 mL離心管中，加入在70 ℃中預(yù)熱過的70%甲醇溶液5 mL，攪拌均勻，立即移入70 ℃水浴10 min，冷卻至室溫，于離心機(jī)3 500 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中。沉淀再加入5 mL 70%甲醇溶液，重復(fù)以上操作。合并提取液定容至10 mL，搖勻，再準(zhǔn)確量取1.0 mL于100 mL容量瓶中，搖勻，待測。從100 mL容量瓶中準(zhǔn)確量取1.0 mL樣品溶液于刻度試管中，分別加入5.0 mL 10%福林酚試劑，搖勻，反應(yīng)3～8 min，加入4.0 mL 7.5% Na2CO3溶液，搖勻，室溫下放置60 min，空白用水代替樣品溶液。在765 nm波長下測得樣品吸光度，記錄并計(jì)算樣品中多酚的含量。

1.6?大孔樹脂的預(yù)處理

用95%乙醇浸泡大孔樹脂24 h，使其充分溶脹，之后將大孔樹脂裝柱，用95%乙醇沖洗，直至洗出液加適量純化水后無白色渾濁現(xiàn)象出現(xiàn)，再用純化水洗至無醇，即可使用。

1.7?大孔樹脂的靜態(tài)吸附

稱取荔枝核提取濃縮液，用純化水稀釋至固形物≤5%，得稀釋液，備用;將預(yù)處理好的型號為LSA-12、XDA-8、LX-T28、LX-8、D101、DM21、DM28樹脂分別各取5份，每份重量為16.0 g，共計(jì)35份，分別置于250 mL錐形瓶中，然后分別加入100 mL荔枝核提取濃縮液的稀釋液，于搖床中振蕩吸附12 h（振速為150 r/min）后抽濾，并用純化水沖洗樹脂至抽濾液無色為止，合并同一樹脂型號的抽濾液，分別向抽濾后樹脂加入200 mL體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇，振蕩解吸12 h后分別收集抽濾液，檢測，計(jì)算荔枝核多酚純度和收率，確定分離純化荔枝核多酚的大孔樹脂。

1.8?大孔樹脂的動(dòng)態(tài)吸附

稱取荔枝核提取濃縮液，用純化水稀釋至固形物≤5%，得稀釋液，備用;采用大孔樹脂法對荔枝核多酚進(jìn)行純化。通過靜態(tài)吸附試驗(yàn)，將篩選出的樹脂濕法裝柱進(jìn)行試驗(yàn)，確定大孔樹脂吸附量，考察洗脫溶劑、洗脫溶劑用量、洗脫速度等因素對多酚純度以及收率的影響。

2?結(jié)果與分析

2.1?沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

以沒食子酸濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)，以吸光度（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=0.011 5 x+0.005 4（R2=0.998 7），標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

2.2?大孔樹脂的靜態(tài)吸附和篩選

7種大孔樹脂對荔枝核多酚含量的影響見圖2。由圖2可以看出，LSA-12、LX-8、DM21、DM28的荔枝核多酚純度較高，分別為73.00%、67.92%、60.69%、65.11%;LSA-12、XDA-8、D101、DM21、DM28的荔枝核多酚收率較高，分別為82.35%、88.59%、91.46%、92.55%。綜合考慮，選擇大孔樹脂LSA-12進(jìn)行下一步試驗(yàn)。