劉坤坤 趙亞平 高瑋 高慧 謝淼

汗腺作為皮膚重要的附屬器官，在體溫調(diào)節(jié)、體液平衡及物質(zhì)代謝等方面具有重要作用。由于深Ⅱ°以上燒傷創(chuàng)面皮膚附屬器官被破壞，無論是應用自體皮片或組織工程皮膚封閉創(chuàng)面均無法使汗腺再生，導致大面積燒傷患者創(chuàng)面愈合后排汗、散熱困難，體內(nèi)熱量難以順利散發(fā)，嚴重影響患者工作及生活。如何實現(xiàn)大面積深度燒傷創(chuàng)面的汗腺重建，成為目前亟待解決一大難題。 目前部分學者用間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)誘導成汗腺樣細胞取得了一定的初步成果，但是干細胞向汗腺細胞分化是一個復雜的過程，機制尚不明確，方法尚不成熟且很難大量獲取汗腺樣細胞。需要進一步尋找更容易在體外獲得大量具有分泌汗液細胞的新方法。再生醫(yī)學是現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)展的趨勢，近年來，隨著對細胞融合技術(shù)研究的深入，為解決這一難題提供了新的思路。有研究發(fā)現(xiàn)融合后的雜合細胞能夠同時表達兩個親本特性，這在再生醫(yī)學和組織工程學中具有很大的應用潛能和治療價值[1]。因此，開展通過利用間充質(zhì)干細胞/汗腺細胞的融合細胞來獲取大量具有能分泌汗液功能的細胞的研究，對促進皮膚功能和結(jié)構(gòu)的生理性修復具有重大的意義。本文就目前干細胞/汗腺細胞融合體實現(xiàn)汗腺再生的研究進展進行綜述。

1 細胞融合技術(shù)

1.1 細胞融合技術(shù)的定義 細胞融合(cell fusion)也稱細胞雜交(cell hybridization),是指細胞通過介導和培養(yǎng)，在離體條件下用人工方法將不同種的細胞通過無性方式融合(合并)成一個核或多個核的雜合細胞的工程。利用現(xiàn)代科學技術(shù)，把來自于不同種生物的單個細胞融合成一個細胞，這個新細胞(雜合細胞)得到了來自兩個細胞的遺傳物質(zhì)(包括細胞核的染色體組合和核外基因)，具有新的遺傳或生物特性?；具^程包括細胞融合形成異核體、異核體通過細胞有絲分裂進行核融合、最終形成單核的雜種細胞。

1.2 細胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史 1965年英國科學家進一步證實滅活病毒在合適條件下可以誘發(fā)動物細胞融合，從而揭開了細胞融合技術(shù)的研究和開發(fā)。隨后相繼研究出三類成熟的細胞融合技術(shù)：(1)生物法：滅火病毒誘導細胞融合。利用某些病毒如：仙臺病毒、副流感病毒或者新城雞瘟病毒被膜中的融合蛋白可以介導病毒同宿主細胞的融合，也可以介導細胞與細胞的融合，因此可以利用紫外線滅活此類病毒誘導細胞融合。(2)化學法：聚乙二醇(PEG)誘導細胞融合 PEG可以破壞和干擾各類細胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細胞相互接觸部位的膜脂雙層中磷脂分子發(fā)生疏散，進而使其結(jié)構(gòu)發(fā)生重排，再加上膜脂雙層的相互親合以及彼此間表面張力的作用，引起相鄰的重排質(zhì)膜在修復時相互合并在一起，使兩細胞的胞質(zhì)溝通，從而造成互相接觸的細胞之間發(fā)生融合。(3)物理法：電脈沖誘導細胞融合和激光誘導細胞融合[1-3]，電融合誘導法是指利用電場來誘導細胞彼此連接成串，在施加瞬間強脈沖促使質(zhì)膜發(fā)生可逆性電擊穿，促使細胞融合的方法。自從1978年Zimmermann首先采用電脈沖方法成功地誘導了細胞電穿孔、電融合以來近三十年里,電穿孔和電融合技術(shù)不斷發(fā)展完善成為一門比較成熟的學科,得到非常廣泛地應用。激光誘導融合是利用激光微束對相鄰細胞接觸區(qū)的細胞膜進行破壞 (或擾動),可將兩個不同特性、不同大小的細胞在顯微鏡下實現(xiàn)融合。即利用光鑷捕捉并拖動一個細胞使之靠近另一個細胞并緊密接觸,然后對接觸處進行脈沖激光束處理,使質(zhì)膜發(fā)生光擊穿,產(chǎn)生微米級的微孔。這樣,由于質(zhì)膜上微孔的可逆性,細胞開始變形融合,最終成為一個細胞。1987 年和1989年德國海德堡理化研究所用準分子激光器使油菜原生質(zhì)體融合,從開始照射到完成融合僅需幾秒鐘,對融合產(chǎn)物觀測,發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)仍在運動,說明融合后的細胞仍能存活。

激光微束融合法與以前的病毒法、PEG法、電融合法相比較,可選擇任意兩個細胞進行融合,易于實現(xiàn)特異性細胞融合,作用于細胞的應力小,定時、定位性強,損傷小,參數(shù)易于控制,操作方便,可利用監(jiān)控器清晰地觀察整個融合過程,實驗重復性好,無菌,無毒性。

1.3 目前細胞融合技術(shù)取得的成果 細胞融合作為細胞工程學中一項重要技術(shù)已在生物學各個分支科學及醫(yī)學中的腫瘤學，病毒學，免役學等領(lǐng)域中得到廣泛應用。例：在醫(yī)學上現(xiàn)時最誘人的是單一特異性抗體的生產(chǎn)，1981年美國Hybriteck公司首先實現(xiàn)用單一特異抗體作臨床診斷[3]。在育種上,利用細胞融合技術(shù)將耐寒的馬鈴薯與不耐寒番茄的原生質(zhì)融合得到地上長番茄地下長馬鈴薯的新品種等，通過細胞融合技術(shù)已成功地進行種內(nèi)、種間細胞的雜交，甚至打破植物之間的界限，取得了植物細胞原生活體與鼠的宮頸癌Hela細胞雜交的成功。動物細胞融合技術(shù)可用于研究細胞的核質(zhì)關(guān)系、揭示疾病發(fā)生的機制用于衰老機制研究；動物細胞融合用于動物育種。動物體細胞融合后,雜種細胞一般難以發(fā)育再生為一個個體,但借助于細胞核移植的方法將融合后雜種細胞的細胞核移入去核成熟卵內(nèi),可培育出新的雜種；動物細胞融合用于生產(chǎn)單克隆抗體。有研究應用細胞融合技術(shù)和酶連免疫技術(shù)成功制備出一種新基因Urg11的抗體；動物細胞融合用于細胞療法[3]。SCNT(somatic cell nu-clear transfer)將患者的任何體細胞與去核卵細胞融合,融合子進行有絲分裂形成囊胚,囊胚的內(nèi)細胞團是多能干細胞,對多能干細胞進行誘導使其定向分化可形成所需的組織和器官用于器官移植,不僅解決了器官和組織來源問題,而且避免了宿主對外來物的免疫排斥。經(jīng)過近幾十年的迅速發(fā)展，細胞融合技術(shù)成為了細胞工程的核心基礎技術(shù)之一，已在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域取得了開創(chuàng)性的研究成果，而且應用領(lǐng)域不斷擴大。細胞融合技術(shù)不僅為核質(zhì)相互關(guān)系、基因調(diào)控、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、遺傳互補、腫瘤發(fā)生、基因定位、亞細胞生物分子研究、衰老控制等理念領(lǐng)域的研究提供了有力的手段，而且在遺傳學、動植物遠緣雜交育種、發(fā)生生物學、免疫醫(yī)學以及醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)等方面都有廣泛的應用價值。特別是在動植物新品種的培育、單克隆抗體的制備、哺乳動物的克隆以及抗癌疫苗的研發(fā)等技術(shù)中細胞融合技術(shù)已成為關(guān)鍵技術(shù)。

理論上可以說利用細胞融合技術(shù)可以使任何2個細胞通過體細胞雜交融合而形成新的生物資源。

1.4 通過利用細胞融合技術(shù)獲得大量目的細胞的案例 沈繼紅等[4]利用細胞融合技術(shù),將生長迅速的異養(yǎng)微藻四鞭藻和富含EPA和DHA的自養(yǎng)微藻綠色巴夫藻相融合,并篩選出兼養(yǎng)的融合藻株。經(jīng)檢測融合藻株的總脂、EPA、DHA和EPA/DHA等指標均比異養(yǎng)親本四鞭藻有較大提高且在兼養(yǎng)條件下生長速率高于親本微藻。楊超一等[5]用促卵泡激素(FSH)抗原免疫Balb/c小鼠,采用雜交瘤細胞技術(shù),經(jīng)細胞融合、篩選、克隆化培養(yǎng)及通過小鼠腹水的誘發(fā)，共獲得11株FSH單克隆抗體。王琴等[6]以純化的新城疫病毒ND35免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合。經(jīng)篩選,獲得5株能穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細胞株。雷慧芬等[7]將人巨核祖細胞和胃癌細胞融合成功的獲得了能產(chǎn)生血小板的融和細胞。焦奧等[8]通過電融合法構(gòu)建將肝細胞系及原代內(nèi)皮細胞融合,成功獲得了一株由大鼠肝細胞系BRL-3A與原代大鼠胰島內(nèi)皮細胞融合而成的四倍體BRL-ies細胞。這株細胞既有內(nèi)皮細胞表型，表達CD31，又有肝細胞特性，表達較高水平的谷氨酰胺合成酶。祭芳等[9]將玉米赤霉烯酮與羧甲氧基胺半鹽酸鹽反應，合成半抗原 ZEN-oxime，通過活潑酯法將半抗原與載體蛋白偶聯(lián)制備玉米赤霉烯酮人工抗原，以人工抗原 ZEN-BSA 免疫 BALB/C 小鼠，將獲得的該鼠脾細胞與 SP 2/0 鼠骨髓瘤細胞融合，成功得到了1株能穩(wěn)定分泌抗玉米赤霉烯酮抗體的單克隆細胞株 3D10。曾柏全等[10]為獲得具有高纖維素酶活性且強抗逆性的新菌株，通過雙親滅活原生質(zhì)體技術(shù)對青霉菌與枯草芽孢桿菌進行原生質(zhì)體融合，成功選育出具有抗逆性的高產(chǎn)纖維素酶菌株。趙曉燕等[11]利用雙親滅活原生質(zhì)體融合技術(shù)，將具有殺蟲作用的蘇云金芽胞桿菌 B7 和枯草芽胞桿菌 TL2進行融合再生，再生融合子經(jīng)過十次傳代和顯微鏡檢產(chǎn)晶體情況初步篩選出 17 株性狀穩(wěn)定且均能產(chǎn)生殺蟲晶體的融合子,通過對黃瓜枯萎病和辣椒疫霉病的拮抗試驗，篩選出 3 株(TLB1、TLB2、TLB15)和親最終篩選出對小菜蛾 2 齡幼蟲校正死亡率最高的融合子 TLB15。

2 臍帶間充質(zhì)干細胞(UCB-MSCs)

間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞。MSCs在特定誘導條件下可分向多種中胚層來源的組織細胞分化,如骨、軟骨、脂肪、心肌組織等[12-16]。不同來源的MSCs均不表達主要組織相容性復合體-Ⅱ(major histocompatibility complex,MHC-Ⅱ)類分子和凋亡相關(guān)受體FasL，不表達共刺激分子B7-1、B7-2，低水平表達或不表達MHC-Ⅰ類分子、CD40和CD40L，因此其具有低免疫原性[17]。而且與胚胎干細胞相比MSCs不存在倫理約束，基于其獨特的分化能力和低免疫原性，MSC在再生醫(yī)學及疾病的臨床應用治療中起到了很大的作用。如王慧君等[18]用毛囊培養(yǎng)上清液為條件培養(yǎng)液誘導大鼠BM-MSCs，并對誘導后的細胞進行細胞角蛋白15(cytokeratin15,CK15)的免疫細胞化學染色和免疫熒光細胞化學染色，RT-PCR鑒定誘導后細胞CK15的表達，結(jié)果顯示BM-MSCs經(jīng)毛囊上清液誘導后部分細胞CK15表達陽性，RT-PCR檢測到CK15mRNA的表達，推斷體外培養(yǎng)的BM-MSCs經(jīng)毛囊培養(yǎng)上清液誘導可以分化為毛囊干細胞樣的細胞。李海紅等[19]將BrdU標記的大鼠BM-MSCs經(jīng)陰莖靜脈輸注到大鼠體內(nèi)，取術(shù)后3 d及7 d的創(chuàng)面組織行BrdU免疫組織化學單染色，以及BrdU和廣譜CK免疫組織化學雙染色，結(jié)果BrdU陽性細胞出現(xiàn)在創(chuàng)面皮下組織、皮脂腺、毛囊中，免疫組織化學雙染色結(jié)果顯示皮脂腺和毛囊有BrdU陽性細胞，驗證了在實驗性全身皮膚缺損創(chuàng)面微環(huán)境下，MSCs可分化為皮膚附屬器細胞。

目前臨床應用較多的為骨髓來源MSC(bonemarrow-MSC,BM-MSC)、臍帶來源MSC(umbilicalcord-MSC,UC-MSC)和臍血來源MSC(UCB-MSC)，不同來源MSC雖然具有一些共性，但也具有一些不同的特性[20]。臍帶是連接胚胎臍部和胎盤的索狀結(jié)構(gòu)，外有羊膜包被，內(nèi)有來自中胚層的膠樣結(jié)締組織。結(jié)締組織內(nèi)包括閉鎖的尿囊、卵黃蒂、兩條臍動脈和一條臍靜脈。膠樣結(jié)締組織被稱為華通膠或沃頓膠(Wharton’sjelly,WJ)。它富含膠質(zhì)和葡萄糖胺聚糖(主要為透明質(zhì)酸)。McElreavey等[21]首次報道了在人臍帶WJ組織中分離并培養(yǎng)出一種成纖維樣細胞，其能夠向多個方向進行分化。隨后眾多研究者也展開了對UC-MSCs的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其表面標志物與BM-MSCs相似，只是CD106表達率略低。研究發(fā)現(xiàn)，臍帶中含有豐富的MSCs，比骨髓和臍血更為豐富，其增值能力也比成人骨髓MSC更強，并且UC-MSCs與BM-MSCs相比較，具有相似的細胞表面標志物，它多采用組織塊法培養(yǎng)，7～10 d既可長出大量間充值干細胞[22,23]。與其他來源干細胞培養(yǎng)方法相比，其方便、簡單、細胞貼壁快，更易獲臍血干細胞得原代細胞，無其他細胞混雜，純度高，是潛在的MSC的重要來源。另有研究證實，UC-MSCs與BM-MSCs免疫原性相比較，BM-MSCs表達組織相容性復合物MHC-I和較弱的MHC-Ⅱ，但UC-MSCs只表達MHC-I，且表達率低于BM-MSCs，不表達或低表達抑制免疫排斥相關(guān)的共刺激因子CD80,CD86,CD40,CD40L等，免疫原性較BM-MSCs更低，更加適宜用于臨床上同種異體間移植治療[24,25]。

3 汗腺細胞

一般來說人體有(3～4)×106個汗腺組織，汗腺屬于外分泌腺，汗腺根據(jù)其體積的大小分為兩種，大的稱為大汗腺又叫頂泌汗腺，小的稱為小汗腺即通常說的外泌汗腺。大汗腺主要分布于腋窩、乳暈、肛門和會陰等處。小汗腺分布于全身大部分皮膚中由分泌部和導管部組成，其腺體直接開口于皮膚是人體發(fā)汗的主要器官。

從胚胎學上來說，汗腺起源于外胚層上皮細胞，其通過分裂、增殖、內(nèi)陷在表皮脊形成上皮細胞索，隨后近端發(fā)育成導管，末端發(fā)育成分泌部，中間形成空隙聯(lián)通導管和分泌部，從而構(gòu)成汗腺。一般來說整個發(fā)育起于胚胎14～16周，到胚胎24周時形態(tài)結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定[26]。整個過程復雜有各種生長因子參與其中，如成纖維細胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子和表皮細胞生長因子等可以促進有絲分裂，加速汗腺細胞增殖，誘導汗腺胚芽的發(fā)生[27]。

汗腺的主要功能是分泌汗液，從而實現(xiàn)體溫的調(diào)節(jié)，整個排汗過程是由交感神經(jīng)支配的，外科交感神經(jīng)切除術(shù)證實膽堿能神經(jīng)纖維起源于交感神經(jīng)元的頸上神經(jīng)節(jié)[28]，成人汗腺細胞表達CK7、CK8、CK18、CK19于類上皮細胞相似[29]，Turksen等[30]發(fā)現(xiàn)一種汗腺特異性蛋白，僅存在于外泌汗腺。目前還沒有發(fā)現(xiàn)汗腺細胞的特異性標志。研究發(fā)現(xiàn)CEA在在胎兒和成人皮膚的汗腺導管部、分泌部均有表達，在表皮的其他部位不表達[29]。CK19是上皮細胞的特異性抗原標志物，作為表皮干細胞鑒定手段之一，在汗腺導管部細胞中也有表達[31]。因此，以往實驗通過CEA與CK19的免疫組化表達情況檢測汗腺細胞的表面標志物。

4 類汗腺細胞

4.1 目前獲得類汗腺細胞的主要方式是通過干細胞誘導技術(shù) 干細胞技術(shù)是通過干細胞移植誘導再生汗腺。間充質(zhì)干細胞在特定誘導下可以向多種中胚層來源的組織細胞分化,具有潛在的分化為汗腺樣細胞的能力。將骨髓間充質(zhì)干細胞在體外與熱休克后的人汗腺細胞共培養(yǎng)，可以被誘導成為具有汗腺細胞表型的細胞。直接共培養(yǎng)——將熱休克的汗腺細胞和間充質(zhì)干細胞直接放入培養(yǎng)皿中一起培養(yǎng)。間接共培養(yǎng)——將熱休克的汗腺細胞培養(yǎng)基的上清液加入到間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)皿中誘導培養(yǎng)。小室共培養(yǎng)——將熱休克的汗腺細胞和間充質(zhì)干細胞放到小室的不同層次共同培養(yǎng)。這說明熱休克細胞分泌的某種物質(zhì)可以誘導間充質(zhì)干細胞的定向分化。隨著近幾年眾多學者對汗腺再生相關(guān)研究的不斷深入，汗腺形態(tài)的多基因及信號通路的機制逐漸得到證實。多種細胞因子和信號轉(zhuǎn)導途徑參與了汗腺再生過程，并在汗腺發(fā)育過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。此外，不同的細胞因子可激活相同的信號轉(zhuǎn)導途徑，而同一種細胞因子又可激活不同的信號通路，并且不同的信號通路之間有復雜的相互作用。目前明確的相關(guān)因子和信號轉(zhuǎn)導途徑有miRNA-203、P63、EDA-A1、microRNAs、NF-κB、Lef-1、外胚葉發(fā)育不全因子(EDA-A1)、重組人表皮生長因子(rh-EGF)和胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-亞硒酸鈉(ITS)、PD98059、胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號通路、EDA-A1/EDA-A1受體信號通路、NF-κB信號通路、Wnt/β-角蛋白(β-catenin)信號通路、Shh信號通路、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)信號通路等，但是汗腺再生是一個復雜的多基因及信號通路參與的過程至今沒有完全研究清楚。共培養(yǎng)雖然可以誘導間充質(zhì)干細胞向汗腺樣細胞定向分化，但是共培養(yǎng)的前提需要大量的熱休克汗腺細胞，目前解決不了這一問題。

4.2 目前未能獲得具有分泌汗液功能的組織工程皮的主要制約瓶頸 目前通過三維培養(yǎng)等技術(shù)研制出的全層皮膚替代物已有許多種，已成功解決大面積燒傷患者自體皮源不足的問題，但筆者發(fā)現(xiàn)至今還沒有任何一種組織工程皮能作為理想的皮膚覆蓋物，是因為這些全層皮膚替代物缺乏皮膚附屬物，毛囊、皮脂腺尤其是汗腺。周立奉等[32]將汗腺上皮細胞以接種至Matrigel凝膠進行三維立體培養(yǎng)，成功形成了汗腺樣結(jié)構(gòu)，但汗腺細胞自身的闊增是極其緩慢的，近年來眾多學者試圖利用組織工程學培養(yǎng)皮膚附屬物汗腺組織的嘗試一直沒有間斷過，但目前仍然沒有可靠的方法培養(yǎng)出大量汗腺細胞，這嚴重阻礙了構(gòu)件能分泌汗液組織工程皮的進展。如何獲得大量汗腺細胞是目前首要解決的重點和難點。

4.3 通過構(gòu)建汗腺細胞和人間充質(zhì)干細胞來獲得大量具有分泌液功能的融合細胞的新進展 2003年國外學者首次提出間充質(zhì)干細胞分化為汗腺細胞的機制可能是直接分化，也可能是與汗腺細胞發(fā)生融合，甚至是核融合[33]。李海紅等[34]在研究人骨髓間充質(zhì)干細胞在體外與損傷的人汗腺細胞共同培養(yǎng)時的轉(zhuǎn)化情況中發(fā)現(xiàn)了間充質(zhì)干細胞和汗腺細胞融體，且做了相關(guān)檢驗證明了融合細胞同時表達間充質(zhì)干細胞和汗腺細胞兩個親本的表型。周崗[35]汗腺發(fā)生與修復過程中基因表達特征的系列研究中再次證實了間充質(zhì)干細胞和汗腺細胞融體，且做了相關(guān)檢驗證明融合細胞同時表達間充質(zhì)干細胞和汗腺細胞2個親本的特異性抗體。李海紅等[36]對人骨髓間充質(zhì)干細胞表型轉(zhuǎn)化為汗腺細胞的體外研究時也再次證實了間充質(zhì)干細胞與汗腺細胞發(fā)生融合形成多核細胞。至今融合細胞同時兩個親代細胞的表型已是不爭的事實。多個學者發(fā)現(xiàn)已分化的體細胞能夠通過重編程轉(zhuǎn)化回多能干細胞,在細胞移植、疾病細胞模型的制備以及藥物篩選等領(lǐng)域具有重要意義。通過干細胞和體細胞的細胞融合,可使體細胞重編程[37,38]。細胞融合致體細胞重編程速度快、效率高,是一種研究重編程機制的重要手段。這也同樣說明用間充質(zhì)干細胞和腫瘤細胞一樣用于細胞融合技術(shù)來改變親本細胞的特性，從理論上說明其是可行的。

綜上所述，實現(xiàn)汗腺再生具有很大的臨床價值，但汗腺細胞分化是一個復雜的過程，機制尚不明確，需要進一步深入研究。間充質(zhì)干細胞和汗腺細胞融合體的首次發(fā)現(xiàn)是無意中實現(xiàn)的，但融合體的檢測結(jié)果給了我們一個實現(xiàn)汗腺再生新的啟示。再生醫(yī)學是現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)展的趨勢，細胞融合技術(shù)作為再生醫(yī)學的重要技術(shù)手段可把來自于不同種生物的單個細胞融合成一個細胞，使這個新細胞(雜合細胞)得到了來自兩個細胞的遺傳物質(zhì)(包括細胞核的染色體組合和核外基因)，具有新的遺傳或生物特性。臍帶間充質(zhì)干細胞以其原代培養(yǎng)簡單、易獲得、純度高、低抗原性更加適宜用于臨床上同種異體間的移植。這從理論上說，用細胞融合技術(shù)把干細胞和汗腺細胞融合來獲得大量具有分泌汗液并可適當擴增的雜合細胞是可行的。深入研究構(gòu)建人間充質(zhì)干細胞和汗腺細胞融合體來獲取大量具有分泌汗液功能雜合細胞的新方法，將細胞融合技術(shù)、細胞生物技術(shù)與生物材料工程學相結(jié)合是開發(fā)理想組織工程全層皮膚的新發(fā)展方向。