甘小艷，胡婷婷，蔣甜甜，馮浩*

(1.永州市中心醫(yī)院，湖南 永州 425000；2.湖南師范大學附屬第一醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院，湖南 長沙 410005)

黃褐斑是一種常見的后天色素沉著性皮膚病，女性多見，表現(xiàn)為雙面頰黃褐色或深咖啡色片狀斑[1]。目前臨床上治療方法多樣，而隨著激光技術(shù)的發(fā)展，調(diào)q激光在黃褐斑的治療中取得了明顯的效果[2]。本研究旨在通過動物實驗，探討調(diào)q激光治療黃褐斑的療效，并通過病理實驗探討其可能機制。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF級健康雌性豚鼠20 只，6～8 周齡，體質(zhì)量250～300 g，由湖南太平洋生物科技有限公司提供；黃體酮注射液(規(guī)格1 mL:20 mg)，購自廣州白云山明興制藥有限公司；戊巴比妥鈉注射液購自廣東邦民制藥廠有限公司；3%氫醌乳膏購自廣東人人康藥業(yè)有限公司；HMB45鼠單克隆抗體購自英國abcam公司。

1.2 動物模型制備、分組及處理

參照文獻造模方法[3-4]，選取豚鼠背部約3×3 cm范圍皮膚剃毛備用，于豚鼠后腿根部屈側(cè)肌肉注射黃體酮與0.9%的氯化鈉注射液混合液(比例為1∶1)20 mg/kg，每日1 次，左右腿交替，連續(xù)注射30 d，同時每日予以波長為280～320 nm的中波紫外線(UVB)(上海季光特種照明電器有限公司)照射背部裸露的皮膚(紫外燈距離豚鼠背部約20 cm)，每日1 次，每次60 min，共30 d，建立黃褐斑鼠模型。留取一只模型鼠取造模處皮膚，進行HE染色及免疫組化染色以確定造模成功。將20 只造模成功豚鼠隨機分為實驗組(調(diào)q激光治療組)與對照組(氫醌治療組)，每組10 只。實驗組采用調(diào)q 1064 nm激光(Fotona歐洲之星激光公司)治療，能量1.3～2.4 J/cm2，光斑大小5 mm，治療頭垂直皮膚表面，平行均勻掃描患處3～4遍，1個月為一療程，共四個療程[5]。對照組于豚鼠背部病灶皮損處每日涂抹3%的氫醌軟膏一次。4個月后進行檢測。肉眼觀察各組豚鼠治療后色斑面積及顏色深淺變化。

1.3 皮膚組織病理檢查

常規(guī)HE染色，并選用鏈霉菌素-生物素法標記黑色素細胞。一抗選用鼠抗人單克隆抗體HMB45，己二酸二丁酯(DAB)顯色，蘇木素染色。用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)代替一抗做陰性對照。

2 結(jié) 果

2.1 兩組豚鼠治療前后皮損肉眼觀察

治療前各組豚鼠皮損處均可見均一穩(wěn)定、邊界清晰的深褐色色斑。實驗組治療后可見皮膚稍淡紅，無明顯色素沉著。對照組治療后可見皮膚顏色變淺，僅有局部小片色素沉著，治療過程中皮膚偶有干燥、脫屑(見圖1)。

A B C

A:調(diào)q激光組；B：氫醌治療組；C：模型組

圖1各組豚鼠治療前后皮損比較

2.2 各組豚鼠治療后皮損HE染色情況比較

實驗組和對照組豚鼠表皮的上皮層細胞增生明顯減輕，真皮層可見少許毛細血管輕度擴張，未見明顯炎性細胞浸潤，黑素細胞明顯較少。模型鼠表皮的上皮層細胞可見明顯增生，真皮層內(nèi)毛細血管擴張，多量炎性細胞浸潤，基底層可見黑素細胞連續(xù)分布(見圖2)。

A B C

2.3 各組治療后皮損免疫組化情況比較

實驗組和對照組豚鼠上皮基底層可見胞漿著色為深褐色的黑色素細胞，棘層及角質(zhì)層未見黑色素顆粒，黑色素細胞呈線狀或散在分布。模型鼠上皮基底層可見大量黑色素細胞，胞漿著色深褐色，棘細胞層亦可見多量黑色素顆粒(見圖3)。

A B C

3 討 論

黃褐斑是一種常見的難治性面部色素沉著性皮膚病，多發(fā)于顏面，影響美觀。雖然黃褐斑對人的身體健康無影響，但由于此病發(fā)生于面部，顏色深于正常皮膚，對患者心理和社會交往影響較大。因此，黃褐斑不僅僅是簡單的色素代謝障礙性皮膚病，也是身心、心理疾病[6]。

黃褐斑的發(fā)病機制不明，目前認為與日曬、遺傳因素、口服避孕藥、妊娠、內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂(如甲狀腺功能異常)、微量元素缺乏、睡眠障礙、皮膚抗氧化系統(tǒng)失衡等有關(guān)。但不管何種因素所致，組織學上多表現(xiàn)為黑素細胞的增多，黑素顆粒的分泌增加以及色素在局部組織的堆積、沉著[7]。調(diào)q激光治療原理主要為選擇性光熱作用，光熱作用被黑素顆?；蚝谒匦◇w吸收，因驟然受熱而發(fā)生爆破，爆破的細胞碎片可被細胞質(zhì)中的巨噬細胞吞噬而排出體外，從而達到祛除黑色素的目的[8]。調(diào)q激光的激光器是在納秒脈沖寬度選擇性破壞黑色素，因而可以不影響周圍組織，尤其是調(diào)q1064激光器的激光束能均勻地通過整個真皮層，能治療位于真皮深處的色素病變，因而在臨床上能使黃褐斑得到穩(wěn)定的治療效果。調(diào)q激光能夠利用光聲雙脈沖模式，是指連續(xù)的兩束光以極短的間隔發(fā)射，這樣協(xié)同產(chǎn)生的峰值功率更高，可以更好地減少不必要的不良反應(yīng)，如炎癥或皮膚刺激等。目前調(diào)q激光治療黃褐斑的臨床研究較多，但因黃褐斑發(fā)生于面部，取材不便，因而少見有關(guān)機制的報道，在黃褐斑鼠模型中的研究也較少。

本研究發(fā)現(xiàn)UVB誘導的黃褐斑豚鼠經(jīng)調(diào)q激光治療后，與模型鼠比較，色斑基本消退，皮損明顯改善；組織病理可見黑素細胞及黑素顆粒明顯減少，與氫醌霜比較類似，但效果更佳。由此可見調(diào)q激光治療黃褐斑效果顯著，其機制可能與調(diào)q激光選擇性破壞黑素細胞減少黑色素生成有關(guān)。