何 毅

（江西省贛州市會昌縣筠門嶺畜牧獸醫(yī)站，江西會昌 342600）

獸醫(yī)病理診斷能通過分析動物所患疾病的特點，按照發(fā)生過程、位置以及原因等進行分析，以判斷致病因素，掌握疾病發(fā)生規(guī)律，為后續(xù)治療提供科學(xué)依據(jù)，對于現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展有積極影響[1-4]。

1 獸醫(yī)病理診斷技術(shù)及其影響

1.1 診斷技術(shù)獸醫(yī)病理診斷以病理學(xué)原理為基礎(chǔ)，對動物身體組織患病部分和感染疾病的動物尸體進行病理學(xué)研究，按照組織形態(tài)學(xué)觀摩與病理分析方式，提出科學(xué)診斷與合理治療措施。獸醫(yī)病理診斷技術(shù)結(jié)合了表象觀察與細(xì)微分析，所以得出的結(jié)果更加具有直觀性和指導(dǎo)性優(yōu)勢。

1.2 技術(shù)影響

1.2.1 疾病研究基礎(chǔ)作用 以往在對動物疾病進行診斷中，主要采用觀察方法進行判斷，很少借助相關(guān)醫(yī)療設(shè)備進行疾病檢驗，所以有可能產(chǎn)生誤診。獸醫(yī)病理診斷技術(shù)憑借其方便、簡單和易操作的優(yōu)勢，能在最短時間內(nèi)根據(jù)病死動物尸體解剖檢驗結(jié)果分析死亡原因，結(jié)合病例部分?jǐn)?shù)據(jù)監(jiān)測，能直接確定疾病種類，為后續(xù)檢查提供方向性指導(dǎo)。

1.2.2 疾病擴散預(yù)防作用 因為動物所患疾病種類較多，而且危害性較大的疾病大部分為傳染性疾病，不僅會在動物之間傳播，還可能出現(xiàn)動物和人類之間的傳染。流行疾病危害大，已經(jīng)成為預(yù)防動物疾病的關(guān)鍵。獸醫(yī)病理診斷技術(shù)能在流行病學(xué)調(diào)查技術(shù)上，及時掌握動物患病癥狀，以病理變化和感染源研究方式，確定引起流行性疾病的病菌，提高治療的針對性。

1.2.3 醫(yī)療糾紛判斷作用 部分寵物醫(yī)院、寵物寄存工作者在工作中容易遇到救治限制等因素，因而會產(chǎn)生治療事故，醫(yī)療糾紛也越來越多。在完善的司法體系下，通過法律途徑維護權(quán)益成為首選。獸醫(yī)病理診斷結(jié)果可以為寵物死亡原因提供可靠的判斷依據(jù)，以尸體檢查方式明確動物的死亡原因，并將其作為司法判決依據(jù)，可為寵物死亡引發(fā)的糾紛問題提供直接性證據(jù)。

2 獸醫(yī)病理診斷技術(shù)在動物疾病診治中的應(yīng)用

2.1 實驗?zāi)康臑樘接懌F醫(yī)病理診斷技術(shù)在動物疾病診治中的實際應(yīng)用情況，本文對X地區(qū)的綿羊肺腺瘤病進行流行病學(xué)調(diào)查，了解到近幾年當(dāng)?shù)鼐d羊患該疾病的臨床表現(xiàn)，期望通過獸醫(yī)病理診斷技術(shù)，掌握疾病的發(fā)病機理以及生物學(xué)特性，并為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

2.2 材料與方法

2.2.1 材料 選擇2018年X地區(qū)某養(yǎng)殖場的患病綿羊作為研究對象，將綿羊的肺組織一部分保存在福爾馬林中，另一部分放置到-80℃的環(huán)境中備用。

實驗室用到的試劑與設(shè)備如下。①試劑。PBS液：定容1 000 mL，使用NaOH或者濃HCl將pH值調(diào)到7.4左右，并在高溫滅菌后放置到室溫保存；選擇美國S公司購入的硫酸卡那霉素；石蠟；上海生物工程技術(shù)有限公司購入的分析純氯化鉀和氯化鈉。②儀器設(shè)備。光學(xué)顯微鏡、高速冷凍離心機、大容量高速離心機、低溫冰箱、超凈工作臺、生物安全柜、切片機、電子秤、微量移液器和研缽。

2.2.2 方法 （1）向當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖場負(fù)責(zé)人與管理人員詢問疾病流行情況，并通過生理學(xué)觀察的方式，了解羊群的生活環(huán)境、群體性特征，掌握基本患病情況。

（2）采用剖檢觀察方法，對患病綿羊進行解剖，觀察其全身的病理學(xué)變化情況，了解內(nèi)部的病變，重點觀察肺部是否出現(xiàn)病變，記錄結(jié)果并拍照保存。

（3）剖檢的同時采集患病組織，并送到病理切片室進行切片觀察，操作流程為：①將組織塊放入丙酮I中90 min、丙酮II中90 min、無水乙醇I中60 min、無水乙醇II中60 min、無水乙醇III中60 min脫水；②將組織放置到二甲苯I和二甲苯II中各15 min，直至樣本變?yōu)橥该鳡顟B(tài)；③將組織塊放到蠟缸I中60 min、蠟缸II中60 min、蠟缸II中60 min包埋，并放置到溫度為4℃的環(huán)境中保存；④將包埋后的組織進行底部加熱并固定在小木塊上，做5 μm的切片，貼在載玻片上，放置到溫度為60℃的恒溫箱中烘片；⑤經(jīng)過HE染色之后，再次放置到二甲苯I、II和III中各5 min，加入中性樹脂膠封片后，使用光學(xué)顯微鏡對病理組織切片進行觀察，得到病理變化結(jié)果。

（4）取低溫保存?zhèn)溆玫牟±斫M織10 g，剪碎后進行研磨，使用5倍體積PBS溶液稀釋制備成乳劑，放置到無菌離心管中，在-20℃下迅速冷凍，18 h后取出在室溫中融化6 h。如此反復(fù)3次之后，對樣本進行過濾，使用4 000 r/min離心機設(shè)備進行離心，共操作3次，得到上清液，分裝到小號離心管后在溫度為-70℃的環(huán)境中保存?zhèn)溆?，懸液使用透射電鏡進行觀察。

2.3 實驗結(jié)果病理組織結(jié)果觀察得到病羊的肺組織區(qū)域有明顯的瘀血情況，因病毒侵入終末細(xì)支氣管與肺泡間上皮細(xì)胞，使肺泡壁增寬，增殖細(xì)胞侵入會代替肺泡，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增生。

當(dāng)肺泡壁上皮細(xì)胞新生增殖時，其細(xì)胞壁始終處于相對完整的狀態(tài)，而且細(xì)胞核位于細(xì)胞基部。當(dāng)受感染的肺泡腔內(nèi)部出現(xiàn)滲出性漿液和纖維素時，證明周圍肺泡腔內(nèi)充滿巨噬細(xì)胞，腺瘤病灶間質(zhì)增多。終末細(xì)支氣管充滿炎性物質(zhì)，周圍有淋巴增生灶，無正常肺泡結(jié)構(gòu)，黏液分泌增強，空泡變性。可以看到增生的柱狀上皮細(xì)胞突出到末端細(xì)支氣管的腔內(nèi)，肺組織血管壁增厚，內(nèi)皮細(xì)胞變性，周圍可見立方和柱狀排列的腫瘤細(xì)胞?？梢妶A形腺瘤樣病變，周邊有結(jié)蹄組織囊腫，一些假囊腫由塌陷的肺泡壁形成，也稱為腺瘤樣區(qū)域。肺組織中有脫落的腫瘤細(xì)胞及其崩解產(chǎn)物，小葉間支氣管管壁增厚，內(nèi)皮細(xì)胞變性，肺泡融合，細(xì)支氣管內(nèi)淋巴細(xì)胞增生，肺動脈分支內(nèi)有炎性物質(zhì)浸潤。

通過制備組織懸液，并運用透射電鏡觀察得到病毒顆粒，發(fā)現(xiàn)其為球形、外部有囊膜的顆粒組織。電鏡觀察結(jié)果顯示，病毒顆粒的直徑為88～125 nm，顆粒外部囊膜的表面有長度為10～12 nm的纖突。

2.4 結(jié)果分析本研究對X地區(qū)某養(yǎng)羊場的綿羊肺腺瘤進行了調(diào)查，并對其臨床癥狀和組織解剖進行了觀察。觀察發(fā)現(xiàn)病羊的呼吸困難，并有咳嗽癥狀，尸檢可見肺增大、實變，肺表面因大小不等的灰白色，被感染肺組織的正常結(jié)構(gòu)被破壞，肺泡壁上皮細(xì)胞新增生，突入肺泡腔形成乳頭狀腺瘤。

臨床尸檢時應(yīng)注意其他易與肺部感染疾病相混淆的疾病。可見切割的肺和氣管充滿泡沫狀黏液，這是由于肺組織中的血氣屏障被破壞，滲透性增加，血管中的液體滲出，以及肺組織中有豐富的毛細(xì)血管網(wǎng)。肺泡腔內(nèi)可見大量巨噬細(xì)胞和乳頭狀瘤，末端細(xì)支氣管充滿炎癥物質(zhì)。綿羊肺腺瘤病的一個重要特征是在發(fā)病癥狀明顯的時期，可以從病羊的鼻腔中收集到大量的水樣分泌物。綿羊肺腺瘤病在臨床病理、影像學(xué)和超微結(jié)構(gòu)上與人細(xì)支氣管肺泡癌相似。因此，它也可以成為了解病毒與人肺癌關(guān)系的理想動物模型，為肺癌的發(fā)病機制提供新的有益見解。在診斷病羊時，要注意將其與其他容易混淆的疾病區(qū)分開來。

3 結(jié)語

獸醫(yī)病理診斷技術(shù)應(yīng)用期間，可在對動物疾病進行診斷的基礎(chǔ)上，對病癥進行系統(tǒng)分析，確保研究結(jié)果系統(tǒng)、完整，防止發(fā)生各類醫(yī)療糾紛，也能為后續(xù)順利開展工作奠定基礎(chǔ)。