尹華丁，張 蕾，丁亞平，張夢(mèng)雪，趙永坡

（1.石家莊市畜產(chǎn)品和獸藥飼料質(zhì)量檢測(cè)中心 050000；2.石家莊市農(nóng)林科學(xué)研究院 050000）

隨著我國(guó)居民生活水平的提高，水產(chǎn)品已經(jīng)是居民餐桌日常的食物，水產(chǎn)養(yǎng)殖也日益發(fā)達(dá)。 水產(chǎn)品具有高蛋白、低脂肪的特點(diǎn)，是一類適合人類飲食的食物。 但是，近年來隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，獸藥殘留成為了影響水產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要問題。 氟喹諾酮（fluoroquinolones，F(xiàn)Qs）類獸藥具有廣譜抗菌，殺菌效果好，成本低等優(yōu)點(diǎn)，近年來在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)得到了廣泛的使用，較為常見的藥物有環(huán)丙沙星、恩諾沙星等。 過分的濫用導(dǎo)致了水體受到污染，水產(chǎn)品中藥物殘留超標(biāo)，被人類食用后可以造成人體內(nèi)分泌系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等的損傷。 因此，建立靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、高通量的檢測(cè)方法勢(shì)在必行， 本文介紹了幾種針對(duì)水產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物的檢測(cè)方法。

1 膠體金法

膠體金免疫層析法一般用于大量樣品的初篩工作，該方法特異性高，靈敏度較高，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)所需時(shí)間短。 宗婧婧等采用膠體金免疫層析法檢測(cè)水產(chǎn)品中15 種喹諾酮類藥物，樣品用0.1%甲酸乙腈溶液提取，正己烷除脂，膠體金試紙條檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間約為3～5min，恩諾沙星、環(huán)丙沙星等15 種喹諾酮類藥物檢出限在0.3～5μg/kg，檢測(cè)結(jié)果與液質(zhì)聯(lián)用法驗(yàn)證結(jié)果一致[1]。

2 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法可作為半定量檢測(cè)方法，具有快速、靈敏、高通量等優(yōu)點(diǎn)，操作方法簡(jiǎn)單，特異性好，適合于基層檢測(cè)站使用。 鄭晶等運(yùn)用酶聯(lián)免疫分析方法測(cè)定鰻魚中恩諾沙星殘留， 最低檢測(cè)限為3μg/kg。 向樣品中分別添加25、50、100μg/kg 3 個(gè)濃度水平的恩諾沙星，平均回收率分別為74.5%、76.6%和66.5%。 特異性試驗(yàn)結(jié)果表明與喹諾酮類中的其它藥物以及其他類抗生素均無交叉反應(yīng)[2]。

王強(qiáng)等建立了檢測(cè)水產(chǎn)品中6 種氟喹諾酮類藥物殘留的直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附分析方法，針對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、諾氟沙星、培氟沙星、沙拉沙星和雙氟沙星6 種氟喹諾酮類藥物的檢測(cè)限(LOD)均不超過0.5ng/mL，對(duì)蝦、鰻鱺和鯽魚三種水產(chǎn)樣品中添加5.0、10.0 和20μg/kg 時(shí)，加標(biāo)回收率為70.4%～104.1%[3]。

楊金易等建立了水產(chǎn)品中3 種喹諾酮類(恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星)獸藥多殘留的新型QuEChERS 前處理技術(shù)結(jié)合酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)的分析方法， 樣品批內(nèi)和批間平均回收率分別為94.10%、93.70%[4]。

3 高效液相色譜法

高效液相色譜-熒光檢測(cè)器法是較為常用的檢測(cè)氟喹諾酮類藥物的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。 蘭承興等針對(duì)農(nóng)業(yè)部783 號(hào)公告-2-2006 的方法進(jìn)行了改進(jìn)， 針對(duì)流動(dòng)相比例， 洗脫體積等進(jìn)行優(yōu)化， 實(shí)現(xiàn)了在10～40μg/kg 加標(biāo)濃度下， 回收 率為72.40%～83.68%，優(yōu)化后的方法回收率高，重復(fù)性和分離效果好[5]。

賀江等采用固相萃取—超高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中6種氟喹諾酮類藥物殘留， 固相萃取技術(shù)在獸藥殘留檢測(cè)中已經(jīng)得到了越來越多的應(yīng)用，其具有操作簡(jiǎn)便，回收率高的特點(diǎn)，逐漸取代了液液萃取的操作；超高效液相色譜法分離度更好，能夠在更短的時(shí)間完成分析。 該方法添加回收率為63.69%～90.83%，最低檢出限為0.5～1.8μg/kg[6]。

4 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)獸藥殘留一般作為確證方法， 能夠有效地進(jìn)行定性以及定量，MRM 方式作為成熟的質(zhì)譜檢測(cè)方式， 已經(jīng)是近年來最為常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。 梁晶晶等采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定水產(chǎn)品中19 種喹諾酮類藥物殘留，應(yīng)用PRiME HLB 凈化技術(shù)作為前處理方式， 對(duì)樣品的凈化、濃縮、液相色譜分離及串聯(lián)質(zhì)譜等相關(guān)檢測(cè)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，各組分在各自濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好， 平均回收率為72.1%～119.9%，檢出限均為0.5μg/kg，定量下限均為1.5μg/kg[7]。

質(zhì)譜法還有一種更加具有優(yōu)勢(shì)的定量方法-內(nèi)標(biāo)法。采用同位素內(nèi)標(biāo)來定量，可以忽略基質(zhì)效應(yīng)造成的影響，大大提高回收率。 周偉光等建立了超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法快速檢測(cè)水產(chǎn)品中9 種氟喹諾酮類藥物殘留量的方法。9 種氟喹諾酮類藥物在2.5μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg 3 個(gè) 加 標(biāo) 濃 度 下 平 均 回 收 率75%～110%[8]。

5 高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜法

高分辨質(zhì)譜在獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域主要使用的是四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜（Q-TOF），其特點(diǎn)是通量高，能夠一次檢測(cè)多種化合物，而且對(duì)于未知目標(biāo)物能夠進(jìn)行很好的定性分析，在定量方面檢出限也能滿足一般的需求。 章紅等采用QuEChERS 方法作為預(yù)處理， 四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法建立了典型水產(chǎn)品中的15 種喹諾酮類藥物殘留的快速篩查方法。 15 種喹諾酮類殘留藥物檢出限為0.5～1.5μg/kg，方法平均回收率在72.3%～102.1%[9]。

6 毛細(xì)管電泳法

除以上的速測(cè)以及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法外， 常用的水產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)方法還包括毛細(xì)管電泳法， 陳宗保等建立了一種利用改性納米金粒子富集與毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光(CE-ECL) 法測(cè)定水產(chǎn)品中4 種氟喹諾酮類藥物殘留的分析方法，該方法用于鰻魚樣品的分析，回收率為94.5%～112%[10]。

7 結(jié)語(yǔ)

國(guó)內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖越來越發(fā)達(dá)， 養(yǎng)殖用藥也成為了困擾水產(chǎn)品質(zhì)量安全的一大問題，尤其是氟喹諾酮類藥物療效較好，成本低廉，目前已經(jīng)被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖治療過程中。 但是由于藥物殘留危害巨大，已經(jīng)引起了廣泛的重視，我國(guó)也專門針對(duì)此類藥物出臺(tái)了相應(yīng)規(guī)范。 由此引發(fā)的殘留檢測(cè)也受到了空前的重視，各種速測(cè)方法、實(shí)驗(yàn)室確證方法層出不窮，其中膠體金法、酶聯(lián)免疫法前處理簡(jiǎn)單，適合大批量樣品做快速篩查，但準(zhǔn)確度有所欠缺。 高效液相色譜法是最為常用的檢測(cè)方法，靈敏度較高，但是由于色譜柱分離性能受到基質(zhì)影響較大，定性能力有較大缺陷。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用法作為近年來常用的實(shí)驗(yàn)室確證檢測(cè)方法， 擁有較高的定性能力和定量能力，是較為理想的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，但由于設(shè)備昂貴，限制了基層檢測(cè)機(jī)構(gòu)的使用。 毛細(xì)管電泳法分離度高，成本較低，但檢出限較高。 在實(shí)際檢測(cè)中，要根據(jù)樣品數(shù)量，檢測(cè)樣品的基質(zhì)，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備等條件選擇合理的檢測(cè)方法。