岳 龍 萬 云 黎 巧 趙 靜 肖 冉 王 雪 楊永平 張四化 阮 征

武漢市動物疫病預防控制中心，武漢 430012

非洲豬瘟（African swine fever，ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染家豬或野豬引起的一種急性、熱性、高度傳染性疾病[1]。ASF原發(fā)于非洲，蜱是其自然宿主和傳播媒介，該病病程短、死亡率高，世界衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。家豬感染后的臨床癥狀、病理變化和流行病學特點與急性豬瘟相似，但更急劇，一般表現(xiàn)為全身出血、呼吸障礙和神經(jīng)癥狀，最急性和急性死亡率可高達100%。2018年8月，我國確診首例ASF 疫情[2]，截至目前，全國31 個省、自治區(qū)、直轄市和香港特別行政區(qū)暴發(fā)了ASF 疫情，對我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。防控ASF 缺乏有效的商用疫苗，且部分地區(qū)野生動物已發(fā)現(xiàn)感染ASFV，如何在中國這樣的養(yǎng)豬大國防控好ASF、不斷推進ASF 根除和保證市場豬肉供給，是我們面臨的巨大挑戰(zhàn)。

1 病原學

1.1 ASF 病毒和基因組

ASFV 是非洲豬瘟相關病毒科（Asfarviridae）非洲豬瘟病毒屬（Asfivirus）的唯一成員，也是唯一的蟲媒DNA 病毒[3]。非洲豬瘟病毒顆粒形似正六邊形，直徑約為200 nm，主要由病毒囊膜（external enbelope）、衣殼（capsid）、內(nèi)膜（inner envelop）、內(nèi)核心殼（core shell）和病毒基因組（genome）5 部分組成[4]。ASFV 基因組為雙鏈閉合線性DNA 分子，基因組大小為170～194 kb，含有150～167 個開放閱讀框（open reading frames，ORF）[5]，編碼54 種結(jié)構(gòu)蛋白和100 多種非結(jié)構(gòu)蛋白。Dixon 等[5]研究發(fā)現(xiàn)ASFV 基因組主要由3 部分組成：中間為比較穩(wěn)定的基因區(qū)，兩端為可變區(qū)，由串聯(lián)重復序列和多基因家族構(gòu)成，末端由37nt 部分堿基互補配對的發(fā)卡環(huán)結(jié)構(gòu)與可變區(qū)相連。

1.2 ASFV 感染和復制

ASFV 主要通過消化道和呼吸道感染動物，病毒進入機體后在扁桃體內(nèi)增值，隨后隨血液和淋巴入侵全身組織和器官，引起出血、血栓、漿液性滲出和壞死等病變。ASFV 感染的靶細胞主要是單核-巨噬細胞，通過巨胞飲或網(wǎng)格蛋白介導的內(nèi)吞侵入，在巨胞飲泡或內(nèi)吞體內(nèi)完成內(nèi)體的成熟，脫去病毒囊膜，病毒內(nèi)膜與內(nèi)體膜融合，暴露病毒基因組?；蚪M在胞質(zhì)中進行復制、轉(zhuǎn)錄和翻譯?；蚪M和蛋白質(zhì)組裝完成后通過動力蛋白運輸?shù)郊毎じ浇?jīng)出芽釋放到細胞外[6]。

1.3 ASFV 血清型和基因型

Malogolpvkin 等[7]利用紅細胞吸附抑制試驗系統(tǒng)地分析了從1961年到2009年分離的32 株ASFV的紅細胞吸附特性，將其中具有紅細胞吸附特性的分成了8 個血清群。Quembo 等[8]根據(jù)p72（B646L）基因末端約500 bp 核苷酸序列的差異，對ASFV 進行基因分型，目前分離的AFSV 可被分為24 種基因型。

2 流行病學

2.1 ASF 國際流行概況

1921年，東非國家肯尼亞首次確認ASF 疫情，隨后ASF 在撒哈拉以南地區(qū)長期流行，1957年首次傳入歐洲，首先在葡萄牙被發(fā)現(xiàn)，隨后蔓延至法國、意大利、比利時、馬耳他和荷蘭等地，同一時期，美洲國家也相繼暴發(fā)非洲豬瘟疫情，如古巴、巴西、多米尼加和海地。2007年，ASFV 經(jīng)船舶傳入格魯吉亞，隨后傳入亞美尼亞，阿塞拜疆和俄羅斯，并于高加索地區(qū)定殖。2012年傳入烏克蘭，2013年傳入白俄羅斯。2014年傳入歐盟的立陶宛、波蘭、拉脫維亞、愛沙尼亞，2016年傳入摩爾多瓦，2017年傳入捷克、羅馬尼亞，2018年歐洲比利時、保加利亞、匈牙利等國先后報道了野豬感染非洲豬瘟疫情。2018年8月3日，中國確診首例非洲豬瘟疫情[9]。2019年，越南、柬埔寨、朝鮮、蒙古國、中國香港、老撾、緬甸、韓國、印度尼西亞、菲律賓、東帝汶等國家和地區(qū)先后暴發(fā)非洲豬瘟疫情。根據(jù)世界衛(wèi)生組織公告，截至2019年12月19日，ASF 在全球共有25個國家和地區(qū)流行，其中歐洲11 個，包括保加利亞、比利時、匈牙利、拉脫維亞、摩爾多瓦、波蘭、羅馬尼亞、俄羅斯、塞爾維亞、斯洛伐克和烏克蘭；亞洲10 個，包括中國、印度尼西亞、朝鮮、韓國、老撾、緬甸、菲律賓、俄羅斯、東帝汶和越南；非洲4 個，包括科特迪瓦、肯尼亞、南非和津巴布韋[10]。

2.2 中國流行概況

ASFV 傳入俄羅斯后以每年約50 km 速度沿公路向遠東地區(qū)推進，2017年3月31日，俄羅斯官方宣布在伊爾庫茲克州（Irkutsk）暴發(fā)了ASF 疫情，距我國邊境線僅有1 000 km。2018年6月中旬，遼寧省沈陽市某農(nóng)場400 頭豬均出現(xiàn)高燒、虛弱、全身皮膚發(fā)紅等急性臨床癥狀，剖檢發(fā)現(xiàn)脾臟明顯腫大、淋巴結(jié)、脾臟、心臟、腎臟充血和全身出血等病理變化，同時在沈陽市北部等養(yǎng)殖場也出現(xiàn)了類似癥狀的散發(fā)病例，最終確診了我國首例ASF 疫情[9]。基因分析顯示此毒株屬于ASFV 基因Ⅱ型，其I73R和I329L 基因之間有一段回文序列（TATATAGG），與俄羅斯克拉斯諾達爾（Krasnodar）2012 株和伊爾庫茲克2017 株同源性為100%[10-11]。ASFV 進入中國以后，跨省域快速傳播，截至2019年12月24日，全國已有31 個省、自治區(qū)和直轄市發(fā)生非洲豬瘟疫情158 起，其中家豬154 起，野豬4 起，全國累計撲殺生豬116 萬頭。另外，香港特別行政區(qū)發(fā)生3起疫情[12]。

2.3 傳染源和傳播途徑

豬是ASFV 的唯一天然宿主，家豬和歐亞野豬對病毒敏感，非洲野豬（包括疣豬、大林豬和非洲野豬）感染后沒有明顯的臨床癥狀，呈隱形帶毒感染[13]。ASFV 主要通過接觸傳播，其傳播途徑可概括為森林循環(huán)、蜱-豬循環(huán)、豬-豬循環(huán)和野豬-棲息地循環(huán)4 個循環(huán)。ASFV 在我國的傳播途徑主要有3種：一是生豬產(chǎn)品跨區(qū)域調(diào)運，二是泔水喂豬，三是人員與車輛帶毒傳播。對于飼養(yǎng)密集的地區(qū)，還可能存在蚊蠅、老鼠、飛鳥等的機械傳播。2014年ASFV 在東歐快速傳播，一些生物安全水平較高的農(nóng)場相繼暴發(fā)疫情，并呈現(xiàn)一定的季節(jié)性，我國非洲豬瘟暴發(fā)地區(qū)同樣存在類似的現(xiàn)象。Olesen 等[14]使用含有ASFV 病毒的血液飼喂螯蠅3 d 后仍可在其頭部和身體檢測到ASFV 的DNA，這一研究提示蚊蠅等的機械傳播可能在相距較近的養(yǎng)殖場之間的ASFV 傳播中起重要作用。

3 診斷方法

3.1 臨床診斷

ASFV 自然感染的潛伏期一般為3～15 d，也可長達28 d[15]，根據(jù)引起的不同臨床癥狀可分為最急性型、急性型、亞急性型、慢性型和亞臨床型。我國主要為最急性型和急性型，豬只表現(xiàn)為沒有任何臨床癥狀的突然死亡，出現(xiàn)高熱、精神不振、厭食、呼吸急促、耳、四肢和腹部皮膚發(fā)紅發(fā)紺等癥狀，死亡率高。臨床癥狀只可作為診斷ASF 的參考，還需實驗室檢測進行確診。在養(yǎng)殖場如發(fā)現(xiàn)疑似感染病例，禁止剖檢病豬，防止ASFV 病原暴露擴散，應盡快采集樣本送有資質(zhì)的檢測機構(gòu)進行實驗室診斷。

3.2 實驗室診斷

OIE 和FAO 等國際組織推薦的ASFV 實驗室檢測方法主要分為病原學和血清學檢測方法。病原學檢測方法包括病毒分離紅細胞吸附試驗（VIHAD）、直接免疫熒光試驗（DIF）、免疫酶組化實驗（IEH）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、聚合酶鏈式反應實驗（PCR）、熒光定量PCR 和等溫擴增技術(shù)（LAMP）等。VI-HAD、DIF、ELISA 等方法都會因為感染豬產(chǎn)生抗體后抗體與病毒形成抗原抗體復合物而導致檢測敏感性降低，適合急性病例的診斷[15]。PCR 和熒光定量PCR 敏感性和特異性高，可檢測多種樣品，操作簡單快速，是目前用于實驗室診斷的主要方法。LAMP 可實現(xiàn)等溫（60～65 ℃）條件下高效、特異、快速的擴增目的基因，適用于ASFV 的現(xiàn)場診斷。血清學檢測方法主要包括ELISA（間接和阻斷ELISA）、免疫印跡試驗（IB）、膠體金試紙條等，我國暴發(fā)的ASFV 為高致病性病原，主要表現(xiàn)為最急性型和急性型，感染豬大多在產(chǎn)生抗體前已經(jīng)死亡，所以血清學檢測方法對于我國流行的ASFV 檢測適用性不強。

為快速診斷和排查我國ASF 疫情，國內(nèi)生物科技公司開發(fā)了大量的ASFV 現(xiàn)場快速檢測試劑盒，但質(zhì)量參差不齊，2019年中國動物疫病預防控制中心2 次對這些企業(yè)生產(chǎn)的非洲豬瘟現(xiàn)場快速檢測試劑進行評價[16-17]。第2 次評價推薦了熒光定量PCR 類試劑盒28 種，等溫擴增類試劑盒6 種，用于ASFV 的現(xiàn)場快速檢測評價，為基層實驗室快速檢測診斷ASFV 提供了可靠的方法和試劑。

4 疫苗研究進展

4.1 疫苗研究概況

ASFV 雖然已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)100 多年，但由于ASFV基因組大，病毒顆粒結(jié)構(gòu)復雜，表達蛋白數(shù)量多，其與宿主的相互作用機制、入侵、復制和轉(zhuǎn)錄的機制、免疫逃避機制的研究還不夠深入等因素[18-19]，阻礙了ASF 疫苗的研制。

人們最早嘗試研究滅活疫苗，但滅活疫苗沒有保護作用。后來發(fā)現(xiàn)p30、p54 和p72 等蛋白可誘導機體產(chǎn)生中和抗體[20]，其他的一些內(nèi)膜蛋白和囊膜蛋白也可誘導產(chǎn)生中和抗體，如CD2v、p12、D117L等[21-22]，但用這些蛋白制作的亞單位疫苗免疫動物只可提供部分保護力或不產(chǎn)生保護力[23-25]。減毒活疫苗有些免疫后只對同源毒株具有保護作用，如NH/P68 和OURT88/3[26]，有些傳代后發(fā)生變異不能誘導機體產(chǎn)生免疫應答，如ASFV-G/V 株[27]，有些免疫后動物出現(xiàn)慢性感染，如西班牙和葡萄牙所使用的減毒活疫苗[28]。刪除AFSV 毒力基因TK、UK、9GL和CD2v 等基因，或刪除參與免疫逃避的基因MGF和A238L 等基因的基因缺失疫苗大部分可對同源毒株產(chǎn)生100%保護力[27]，有些甚至具有異源保護作用，如缺失CD2v 的BA71 毒株，可對基因Ⅰ和Ⅱ產(chǎn)生交叉保護[29]，研發(fā)基因缺失疫苗是未來研發(fā)ASF疫苗的重點方向。

4.2 國內(nèi)疫苗研究進展

中國迫切需要ASF 疫苗用于ASF 的防控，哈爾濱獸醫(yī)研究所承擔了國家級ASF 疫苗研制項目，步志高研究員于2019年8月在中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第十八次全國學術(shù)研討會上介紹了我國ASF 疫苗的研究進展。其采用敲除病毒毒力基因獲得致弱的減毒活疫苗的研制策略，使用從黑龍江疫點分離的HLJ/18 株作為疫苗株，敲除MGF360 和CD2v 基因，接種后強毒攻擊豬只可存活90%以上，豬只平均體溫指數(shù)低于3 d，存活豬只可阻斷口、肛排毒，豬只體內(nèi)組織病毒載量大幅下降，疫苗可有效阻斷病毒流行傳播。目前我國的ASF 疫苗研究還處于中試工藝摸索和產(chǎn)品質(zhì)量研究以及轉(zhuǎn)基因生物安全評價階段，距離疫苗商用還需要很長的一段時間。

5 防 控

5.1 防控現(xiàn)狀

ASFV 傳入我國后，能如此快速和大范圍的傳播與我國的生豬產(chǎn)業(yè)情況密切相關，其內(nèi)在邏輯，一是生豬貿(mào)易調(diào)運頻繁。我國幅員遼闊，京津、長三角和珠三角等地區(qū)是生豬的主要消費地區(qū)，東北、華北、兩湖和四川是生豬的主產(chǎn)區(qū)，產(chǎn)區(qū)和消費區(qū)分離的現(xiàn)狀導致生豬不斷由生產(chǎn)區(qū)向消費區(qū)流動，另外，各地生豬價格差也促進了生豬的頻繁調(diào)運。二是防控觀念未能及時轉(zhuǎn)變。我國一直采用重大動物疫病強制免疫的策略來防控重大動物疫病，每年春秋兩季開展重大動物疫病集中免疫，在ASFV 沒有進入中國以前，這種策略的好處在于簡單、實用，效果也非常有效，但ASF 目前還沒有有效的商用疫苗，這就導致這一策略對ASF 防控完全無效。三是生物安全意識和設施落后。散養(yǎng)戶的生物安全意識不高，生物安全設施落后，例如使用未經(jīng)處理的泔水喂豬，一些規(guī)模場的生物安全設施不健全，與生豬生產(chǎn)相關的飼料、屠宰、轉(zhuǎn)運等行業(yè)和環(huán)節(jié)也存在從業(yè)人員的生物安全意識缺失和生物安全設施落后的問題。四是違法犯罪猖獗。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部通報了一批專業(yè)“炒豬”團伙通過向養(yǎng)殖場（戶）丟棄死豬，制造和傳播養(yǎng)殖場（戶）發(fā)生ASF 疫情的輿論，再壓低價格買豬等方式從事“炒豬”活動[30]。還有一些不法分子因不同區(qū)域價格差，鋌而走險，非法調(diào)運生豬。上述問題的改進和提升不是短期內(nèi)可以完成的，將對我國防控和根除ASF 產(chǎn)生巨大阻礙。

自我國暴發(fā)非洲豬瘟疫情以來，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部出臺了一系列防控、撲殺、補貼、調(diào)運、診斷等方面政策文件，有效地控制了非洲豬瘟疫情。但我們也要正視所面臨的問題，按照目前的形勢分析，我們無法在短期內(nèi)根除ASF，我國報道了4 起ASFV 感染野豬的疫情，表明ASFV 已感染野生動物，必須要做好長期與ASF 戰(zhàn)斗的準備。目前在我國流行的ASFV 毒株是基因Ⅱ型，而頻繁的國際貿(mào)易和與非洲等國家的日趨密切的交往，將提高其他基因型ASFV 傳入我國的風險，如果其他型ASFV 再傳入我國，屆時，根除ASFV 將會更加困難。受ASF 疫情影響，生豬出欄數(shù)量急劇減少，生豬價格也相應從疫情暴發(fā)前的14 元/kg 左右一度上漲到40 元/kg。市場上豬肉短缺短期可以依靠進口解決，但中國生豬生產(chǎn)曾占世界的一半以上，面對巨大的消費缺口和穩(wěn)價保供的要求，依靠進口不可持續(xù)，急需恢復生豬生產(chǎn)。在防控ASF 疫情的同時恢復生豬生產(chǎn)是我們面臨的巨大挑戰(zhàn)。

5.2 防控目標

基于以上原因，我們防控ASF 的短期目標是采取一切措施降低非洲豬瘟疫情暴發(fā)風險，長期目標是根除在我國流行的ASFV，并防止其他基因型ASFV 傳入我國。

5.3 防控策略

應該采取全國聯(lián)防聯(lián)控，劃分區(qū)域，因地制宜地采取相應措施逐步縮小疫區(qū)，最終實現(xiàn)根除的策略。

5.4 防控措施

1）制定科學的根除計劃。中國幅員遼闊，各地防控形勢和條件千差萬別，要想實現(xiàn)根除ASFV 的目標，國家層面應出臺一套科學的根除計劃，成體系、分步驟指揮和引導各地開展ASF 防控和根除工作，并加強監(jiān)督，提高各地政策執(zhí)行力和落地效果。

2）提高生物安全水平。目前，防控重大動物疫病的理念是“預防為主，防治結(jié)合”，在具體實施的過程中“預防為主”主要的做法是免疫重大動物疫病疫苗（國家逐步在推進重大動物疫病凈化），對于生物安全的重視程度不夠，但是ASF 無法通過免疫來防治，唯一有效的方法是生物安全。提高飼養(yǎng)者的生物安全意識、提升養(yǎng)殖場生物安全管理水平和改善生物安全設施來防控ASF 勢在必行。從行業(yè)角度來看，養(yǎng)殖場、屠宰場、飼料場、車輛運輸?shù)壬i生產(chǎn)全產(chǎn)業(yè)鏈都應建立完善的生物安全體系，只有提升整個行業(yè)的生物安全級別，才能保證根除ASFV 和其他重大動物疫病落到實處。

3）提升ASF 監(jiān)測能力和應急能力。應建立完善的ASF 監(jiān)測體系和應急隊伍，通過現(xiàn)場排查、主動監(jiān)測和被動監(jiān)測及時發(fā)現(xiàn)和確診ASF 疫情，進行快速反應從而達到及時處置的目的。目前，很多地方的動物防疫機構(gòu)不健全，人員配備不足，素質(zhì)參差不齊，有些地方雖然配備了檢測儀器，但是沒有人員會使用。應強化各級動物疫控機構(gòu)建設，配齊人員，通過培訓提高人員素質(zhì)和能力，不斷提高動物疫病監(jiān)測快速反應能力。

4）加強港口、機場和邊境地區(qū)監(jiān)管。嚴格管理國外船舶、飛機和列車的餐廚垃圾。對來自風險國家旅客行李所攜帶的豬肉及其產(chǎn)品進行嚴格的風險排查。加強邊境地區(qū)野生動物管理。防止新的ASFV 傳入我國。

5）嚴厲打擊違法犯罪?！俺簇i”、非法調(diào)運等不法行為對ASFV 的傳播起了推波助瀾的作用，嚴重影響了ASF 的防控工作，應予以嚴厲打擊，減少人為因素在ASFV 傳播過程中的不可控因素。

6 結(jié) 語

ASF 傳入我國，對我國的養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成了巨大威脅[31]。其結(jié)構(gòu)復雜，基因型和血清型多樣，已初步呈現(xiàn)出全球流行趨勢，且流行區(qū)域不斷擴大，還沒有可商用疫苗，疫苗研究困難重重，經(jīng)濟全球化帶來的物流和人流跨區(qū)的快速轉(zhuǎn)移[32]，都為ASF 的防控和根除帶來了巨大的挑戰(zhàn)。我國是養(yǎng)豬大國，也是豬肉消費大國，在ASF 的背景下如何快速恢復生產(chǎn)，滿足人民對豬肉的需求，同樣面臨重重考驗。只有通過轉(zhuǎn)變防控觀念，切實提高生豬生產(chǎn)相關的整個行業(yè)的生物安全級別，提升整個產(chǎn)業(yè)鏈的防控效能，才能看到有效防控和根除ASF 的希望。